Infekcje i niewyjaśniona niepłodność

Główny cel Głównym wyzwaniem tego projektu jest określenie potencjalnej roli komórek NK jako markera prognostycznego pierwotnej niewyjaśnionej niepłodności. Aby osiągnąć ten cel, przeprowadzimy prospektywne badanie na kohorcie 100 kobiet z niewyjaśnioną niepłodnością. Krew obwodowa i komórki NK endometrium zostaną poddane fenotypowaniu immunologicznemu, a ich stan aktywacji zostanie przeanalizowany. Tymczasem obecność zakażenia herpeswirusem zostanie oceniona we krwi obwodowej i skorelowana z wynikami analizy NK. Dane te wyjaśnią rolę komórek NK w stanach niepłodności kobiet, oceniając implikacje zakażenia wirusem opryszczki jako kofaktora dla statusu komórek NK. Dane te dostarczą dowodu zasadności wykorzystania analizy komórek NK jako markera predykcyjnego niewyjaśnionej niepłodności.

Cel drugorzędny Celem drugorzędnym jest ocena mechanizmów leżących u podstaw statusu komórek NK w niepłodności. Ponieważ ekspresja HLA-G i HLA-E jest modyfikowana przez infekcję herpeswirusem (9), jako mechanizm ucieczki immunologicznej, a antygeny te są odpowiedzialne za prawidłową implantację zarodka (14), przeanalizujemy poziomy tych cząsteczek we krwi obwodowej i środowisko endometrium. W międzyczasie zostaną przeanalizowane polimorfizmy genetyczne HLA-G i HLA-E. Wyniki te będą skorelowane z obecnością zakażenia herpeswirusem, ekspresją receptorów KIR, LIRB i NKG2A na komórkach pNK i eNK. Dane te wyjaśnią implikacje ekspresji HLA-G i HLA-E oraz tła genetycznego w kontroli aktywacji komórek NK i zakażenia wirusem opryszczki u niepłodnych kobiet.

Osiągnięcie tych celów zostanie osiągnięte dzięki 6 pakietom zadań/celom (WP)

1. Charakterystyka niepłodnych kobiet (WP1) (1-20 mc) Zrekrutujemy 100 kobiet z niewyjaśnioną niepłodnością i 30 kobiet z grupy kontrolnej. Te kobiety zostaną poddane ocenie klinicznej, tworząc kliniczną bazę danych. Od każdej kobiety pobierzemy próbki krwi obwodowej, biopsję endometrium, płukanie macicy.
2. Immunofenotyp komórek NK (WP2) (1-20 mth) Komórki NK z krwi obwodowej i błony śluzowej macicy zostaną przeanalizowane pod kątem odsetka podtypów (CD56, CD16, CD9, CD49a) oraz ekspresji KIR, LIRB-1 i -2 oraz Receptory CD94/NKG2A, o których wiadomo, że oddziałują z cząsteczkami HLA-G i HLA-E, wytwarzając sygnały hamujące.
3. Th1, Th2, Th17 i LIF (WP3). (1-20 mth) Poziomy Th1, Th2, Th17 i LIF będą analizowane w próbkach osocza i popłuczyn macicy, aby ocenić stan aktywacji. Wyniki zostaną skorelowane z liczbą komórek NK.
4. Zakażenie wirusem opryszczki (WP4) (12-24 mc) Obecność DNA wirusa opryszczki (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV i HHV-8) będzie analizowana we krwi obwodowej i popłuczynach macicy.
5. HLA-G (WP5) (12-24 mth) Cząsteczki HLA-G ulegają ekspresji zarówno jako cząsteczki błonowe (HLA-G1), jak i rozpuszczalne (HLA-G5, z alternatywnego składania mRNA; sHLA-G1, z zrzucania błony). Ekspresja błony i rozpuszczalnego HLA-G zostanie oceniona we krwi obwodowej i endometrium. Ekspresja HLA-G jest kontrolowana przez polimorfizm insercji/delecji (ins/del) 14 par zasad (rs66554220), gdzie delecja 14 bp stabilizuje mRNA, wytwarzając wyższe poziomy HLA-G (15). Będziemy genotypować kobiety pod kątem polimorfizmu rs66554220, aby ocenić wpływ na poziomy ekspresji HLA-G w stanie niepłodności.
6. HLA-E (WP6) (12-24mth) Cząsteczki HLA-E ulegają ekspresji zarówno jako cząsteczki błonowe, jak i rozpuszczalne. Ekspresja błony i rozpuszczalnego HLA-E zostanie oceniona we krwi obwodowej i endometrium. Zidentyfikowano dwa niesynonimiczne allele HLA-E, HLA-ER (E*0101) i HLA-EG (E*0103) (16), w których ekspresja HLA-E białka EG była wyższa niż ER. Będziemy genotypować kobiety pod kątem polimorfizmów HLA-E, aby ocenić wpływ na niepłodność.