Инфекции и необъяснимое бесплодие

Основная цель Основной задачей этого проекта является определение потенциальной роли NK-клеток в качестве прогностического маркера первичного необъяснимого бесплодия. Для достижения этой цели мы проведем проспективное исследование когорты из 100 женщин с необъяснимым бесплодием. NK-клетки периферической крови и эндометрия будут подвергнуты иммунофенотипированию, и будет проанализирован их статус активации. При этом наличие герпесвирусной инфекции будет оцениваться в периферической крови и соотноситься с результатами анализа NK. Эти данные прояснят роль NK-клеток при бесплодии у женщин, оценив влияние герпесвирусной инфекции как кофактора на статус NK-клеток. Эти данные обеспечат доказательство принципа использования анализа NK-клеток в качестве прогностического маркера необъяснимого бесплодия.

Вторичная цель Вторичная цель состоит в том, чтобы оценить механизмы, лежащие в основе статуса NK-клеток при бесплодии. Поскольку экспрессия HLA-G и HLA-E модифицируется герпесвирусной инфекцией (9) в качестве механизма ускользания от иммунного ответа, и эти антигены отвечают за правильную имплантацию эмбриона (14), мы проанализируем уровни этих молекул в периферической крови и среда эндометрия. Тем временем будут проанализированы генетические полиморфизмы HLA-G и HLA-E. Эти результаты будут коррелировать с наличием герпесвирусной инфекции, экспрессией рецепторов KIR, LILRB и NKG2A на клетках pNK и eNK. Эти данные прояснят роль экспрессии HLA-G и HLA-E и генетического фона в контроле активации NK-клеток и герпесвирусной инфекции у женщин с бесплодием.

Достижение этих целей будет достигнуто с помощью 6 рабочих пакетов/целей (WP)

1. Характеристика бесплодных женщин (WP1) (1-20 мес.) Мы наберем 100 женщин с необъяснимым бесплодием и 30 контрольных женщин. Эти женщины будут клинически оценены, и будет создана клиническая база данных. У каждой женщины мы возьмем образцы периферической крови, биопсию эндометрия и результаты промывания матки.
2. Иммунный фенотип NK-клеток (WP2) (1-20 мес.) NK-клетки из периферической крови и эндометрия будут проанализированы на процент подтипов (CD56, CD16, CD9, CD49a), а также на экспрессию KIR, LILRB-1 и -2 и Рецепторы CD94/NKG2A, которые, как известно, взаимодействуют с молекулами HLA-G и HLA-E, производя ингибирующие сигналы.
3. Th1, Th2, Th17 и LIF (WP3). (1-20 мес.) Уровни Th1, Th2, Th17 и LIF будут проанализированы в образцах плазмы и маточных смывов для оценки состояния активации. Результаты будут коррелированы с количеством NK-клеток.
4. Герпесвирусная инфекция (WP4) (12-24 мес.) Наличие ДНК герпесвируса (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV и HHV-8) будет проанализировано в периферической крови и маточном смыве.
5. Молекулы HLA-G (WP5) (12-24 мкм) HLA-G экспрессируются как мембранные (HLA-G1), так и растворимые (HLA-G5, в результате альтернативного сплайсинга мРНК; sHLA-G1, в результате отщепления мембраны). Экспрессию мембранного и растворимого HLA-G оценивают в периферической крови и эндометрии. Экспрессия HLA-G контролируется полиморфизмом вставки/делеции (ins/del) 14 пар оснований (rs66554220), где делеция 14 п.н. стабилизирует мРНК, производя более высокие уровни HLA-G (15). Мы будем генотипировать женщин по полиморфизму rs66554220, чтобы оценить влияние уровней экспрессии HLA-G на бесплодие.
6. HLA-E (WP6) (12–24 мес.) Молекулы HLA-E экспрессируются как в мембранных, так и в растворимых молекулах. Экспрессию мембранного и растворимого HLA-E оценивают в периферической крови и эндометрии. Были идентифицированы два несинонимичных аллеля HLA-E, HLA-ER (E*0101) и HLA-EG (E*0103) (16), где экспрессия HLA-E белка EG была выше, чем ER. Мы будем генотипировать женщин по полиморфизмам HLA-E, чтобы оценить влияние на бесплодие.