Infektiot ja selittämätön hedelmättömyys

Ensisijainen tavoite Tämän projektin päähaaste on määritellä NK-solujen mahdollinen rooli primaarisen selittämättömän hedelmättömyyden prognostisena merkkinä. Tämän tavoitteen saavuttamiseksi teemme prospektiivisen tutkimuksen 100 selittämättömän hedelmättömän naisen kohortilla. Perifeerisen veren ja kohdun limakalvon NK-solut määritetään immuunifenotyypiksi ja niiden aktivaatiotila analysoidaan. Sillä välin herpesvirusinfektion esiintyminen perifeerisestä verestä arvioidaan ja korreloidaan NK-analyysin tulosten kanssa. Nämä tiedot selventävät NK-solujen roolia hedelmättömissä naistiloissa arvioiden herpesvirusinfektion osuutta NK-solujen tilan kofaktorina. Nämä tiedot osoittavat periaatteen NK-soluanalyysin käytöstä selittämättömän hedelmättömyyden ennustavana markkerina.

Toissijainen tavoite Toissijaisena tavoitteena on arvioida mekanismeja NK-solujen tilan perusteella hedelmättömyydessä. Koska HLA-G:n ja HLA-E:n ilmentymistä modifioi herpesvirusinfektio (9) immuunipakomekanismina ja nämä antigeenit ovat vastuussa oikean alkion istutuksesta (14), analysoimme näiden molekyylien tasoja ääreisveressä ja endometriumin ympäristö. Sillä välin analysoidaan geneettisiä HLA-G- ja HLA-E-polymorfismeja. Nämä tulokset korreloivat herpesvirusinfektion, KIR-, LILRB- ja NKG2A-reseptorin ilmentymisen kanssa pNK- ja eNK-soluissa. Nämä tiedot selventävät HLA-G:n ja HLA-E:n ilmentymisen ja geneettisen taustan merkitystä NK-soluaktivaation ja herpesvirusinfektion hallinnassa hedelmättömillä naisilla.

Näiden tavoitteiden saavuttaminen saavutetaan 6 työpaketilla/tavoitteella (WP)

1. Hedelmättömien naisten luonnehdinta (WP1) (1-20kk) Rekrytoimme 100 selittämätöntä hedelmätöntä naista ja 30 kontrollinaista. Nämä naiset arvioidaan kliinisesti ja luodaan kliininen tietokanta. Jokaiselta naiselta otetaan perifeeriset verinäytteet, endometriumin biopsiat ja kohdun punoitus.
2. NK-solujen immuunifenotyyppi (WP2) (1-20 kk) NK-soluista perifeerisestä verestä ja kohdun limakalvosta analysoidaan alatyyppien prosenttiosuudet (CD56, CD16, CD9, CD49a) sekä KIR:n, LILRB-1:n ja -2:n ja CD94/NKG2A-reseptorit, joiden tiedetään olevan vuorovaikutuksessa HLA-G- ja HLA-E-molekyylien kanssa tuottaen estäviä signaaleja.
3. Th1, Th2, Th17 ja LIF (WP3). (1-20 kk) Th1-, Th2-, Th17- ja LIF-tasot analysoidaan plasman ja kohdun huuhtelunäytteistä aktivaatiotilan arvioimiseksi. Tulokset korreloidaan NK-solujen määrän kanssa.
4. Herpesvirusinfektio (WP4) (12-24 kk) Herpesviruksen DNA:n (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV ja HHV-8) esiintyminen analysoidaan ääreisverestä ja kohdun punoituksesta.
5. HLA-G (WP5) (12-24 kk) HLA-G-molekyylit ilmentyvät sekä kalvo- (HLA-G1) että liukoisina (HLA-G5, mRNA:n vaihtoehtoisesta silmukoitumisesta; sHLA-G1, kalvon irtoamisesta) molekyyleinä. Kalvon ja liukoisen HLA-G:n ilmentyminen arvioidaan ääreisveressä ja endometriumissa. HLA-G:n ilmentymistä säätelee 14 emäsparin (rs66554220) insertion/deleetion (ins/del) polymorfismi (rs66554220), jossa 14 bp:n deleetio stabiloi mRNA:ta, joka tuottaa korkeampia HLA-G-tasoja (15). Genotyypisimme naiset rs66554220-polymorfismin suhteen arvioidaksemme vaikutuksen HLA-G:n ilmentymistasoihin hedelmättömissä olosuhteissa.
6. HLA-E (WP6) (12-24mth) HLA-E-molekyylit ilmaistaan ​​sekä kalvo- että liukoisina molekyyleinä. Kalvon ja liukoisen HLA-E:n ilmentyminen arvioidaan ääreisveressä ja endometriumissa. HLA-E:n kaksi ei-synonyymiä alleelia on tunnistettu, HLA-ER (E*0101) ja HLA-EG (E*0103) (16), joissa EG-proteiinin HLA-E:n ilmentyminen oli korkeampaa kuin ER:n. Genotyypisimme naiset HLA-E-polymorfismien varalta, jotta voimme arvioida vaikutuksen hedelmättömyyteen.