Infecties en onverklaarbare onvruchtbaarheid
Prognostische markers bij vrouwen met primaire onverklaarbare onvruchtbaarheid
- Achtergrond: Onverklaarbare onvruchtbaarheid bij vrouwen is in verband gebracht met een reeks cellulaire en moleculaire defecten in het endometrium, ongunstige immuunresponsen en immunologische factoren. Natural killer-cellen (NK-cellen) zijn opgenomen omdat zij de meest voorkomende leukocytenpopulatie in de decidua vormen. Terwijl decidua NK-cellen uitgebreid werden onderzocht, ontbreekt het de studie van endometriale eNK-cellen nog steeds aan uitgebreid onderzoek. De verlaging van de eNK-frequentie is in verband gebracht met de status van onvruchtbaarheid, in het bijzonder in de aanwezigheid van een bijkomende herpesvirusviremie. Aangezien herpesvirussen HLA-G- en HLA-E-moleculen gebruiken als immuun-ontsnapping, die immuun-remmend zijn en belangrijk voor een correcte placentatie, zouden ze co-factoren voor onvruchtbaarheid kunnen vertegenwoordigen.
- Doelstellingen: Aangezien het ontbreken van een nauwkeurige diagnose in de voortplantingsgeneeskunde leidt tot falen van de behandeling, richt dit voorstel zich op de karakterisering van eNK-cellen als diagnostische factor voor onverklaarbare onvruchtbaarheid bij vrouwen. We zullen ook co-factoren evalueren, rekening houdend met herpesvirusinfectie en HLA-G- en HLA-E-expressie.
- Methoden: Perifeer bloed en NK-cellen van het endometrium zullen immuungefenotypeerd worden en het aantal cellen en de activeringsstatus (CD107a, IL-6, IL-10, IL-17) zullen gecorreleerd worden met onvruchtbaarheid. De implicatie van herpesvirus zal worden geëvalueerd door analyse van DNA uit perifeer bloed en endometriumspoelmonsters met HSV-1-, HSV-2-, EBV-, CMV-, HHV-6-, HHV-7-, VZV- en HHV-8-specifieke primers en PCR-techniek. HLA-G- en HLA-E-expressie zal worden geanalyseerd in perifeer bloed en endometriumomgeving door middel van flowcytometrie en ELISA-testen en gecorreleerd door NK-celexpressie van hun receptoren (KIR's, LILRB1/2, NKG2A).
- Verwachte resultaten: Op basis van onze voorlopige resultaten verwachten we NK-cellen te identificeren als prognostische marker voor primaire onverklaarde onvruchtbaarheid, met herpesvirusinfectie en HLA-G- en HLA-E-expressie als co-factoren. Deze gegevens zullen van belang zijn bij de behandeling van onvruchtbare vrouwen.
Studie Overzicht
Toestand
Conditie
Gedetailleerde beschrijving
Primaire doelstelling De belangrijkste uitdaging van dit project is het definiëren van de potentiële rol van NK-cellen als prognostische marker voor primaire onverklaarde onvruchtbaarheid. Om dit doel te bereiken zullen we een prospectieve studie uitvoeren op een cohort van 100 onverklaarbare onvruchtbare vrouwen. Perifeer bloed en endometriale NK-cellen zullen immuun gefenotypeerd worden en hun activeringsstatus zal geanalyseerd worden. Ondertussen zal de aanwezigheid van herpesvirusinfectie worden geëvalueerd in perifeer bloed en worden gecorreleerd met de resultaten van NK-analyse. Deze gegevens zullen de rol van NK-cellen in onvruchtbare vrouwelijke aandoeningen verduidelijken, waarbij de implicatie van herpesvirusinfectie als cofactor voor de status van NK-cellen wordt geëvalueerd. Deze gegevens zullen een bewijs leveren van het principe van het gebruik van NK-celanalyse als een voorspellende marker voor onverklaarde onvruchtbaarheid.
Secundair doel Het secundaire doel is het evalueren van de mechanismen die ten grondslag liggen aan de NK-celstatus bij onvruchtbaarheid. Aangezien HLA-G- en HLA-E-expressie wordt gewijzigd door herpesvirusinfectie (9), als een immuunontsnappingsmechanisme, en deze antigenen verantwoordelijk zijn voor een correcte embryo-implantatie (14), zullen we de niveaus van deze moleculen in perifeer bloed analyseren en endometriale omgeving. Ondertussen zullen HLA-G en HLA-E genetische polymorfismen worden geanalyseerd. Deze resultaten zullen worden gecorreleerd met de aanwezigheid van herpesvirusinfectie, KIR-, LILRB- en NKG2A-receptorexpressie op pNK- en eNK-cellen. Deze gegevens zullen de implicatie van HLA-G- en HLA-E-expressie en genetische achtergrond bij de controle van NK-celactivering en herpesvirusinfectie bij onvruchtbare vrouwen verduidelijken.
De realisatie van deze doelstellingen zal worden bekomen met 6 werkpakketten/doelstellingen (WP)
- Karakterisering van onvruchtbare vrouwen (WP1) (1-20mnd) We zullen 100 onverklaarbare onvruchtbare vrouwen en 30 controlevrouwen rekruteren. Deze vrouwen zullen klinisch worden geëvalueerd en een klinische database opzetten. Van elke vrouw zullen we perifere bloedmonsters, endometriumbiopten en baarmoederspoeling afnemen.
- NK-cel immuunfenotype (WP2) (1-20mnd) NK-cellen uit perifeer bloed en endometrium zullen worden geanalyseerd op subtypepercentages (CD56, CD16, CD9, CD49a), en op de expressie van KIR, LILRB-1 en -2 en CD94/NKG2A-receptoren, waarvan bekend is dat ze interageren met HLA-G- en HLA-E-moleculen die remmende signalen produceren.
- Th1, Th2, Th17 en LIF (WP3). (1-20 mnd) Th1-, Th2-, Th17- en LIF-niveaus zullen worden geanalyseerd in plasma- en baarmoederspoelmonsters om de activeringsstatus te evalueren. De resultaten zullen worden gecorreleerd met het aantal NK-cellen.
- Herpesvirus infectie (WP4) (12-24mnd) Herpesvirus DNA (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV en HHV-8) aanwezigheid zal worden geanalyseerd in perifeer bloed en baarmoederspoeling.
- HLA-G (WP5) (12-24mnd) HLA-G-moleculen worden uitgedrukt als zowel membraan- (HLA-G1) als oplosbare (HLA-G5, van alternatieve mRNA-splitsing; sHLA-G1, van membraanafscheiding). De expressie van het membraan en oplosbaar HLA-G zal geëvalueerd worden in perifeer bloed en endometrium. HLA-G-expressie wordt gecontroleerd door een polymorfisme van insertie/deletie (ins/del) van 14 basenparen (rs66554220), waarbij de deletie van 14 bp het mRNA stabiliseert en hogere niveaus van HLA-G produceert (15). We zullen de vrouwen genotyperen op rs66554220-polymorfisme, om de implicatie in HLA-G-expressieniveaus in onvruchtbare toestand te evalueren.
- HLA-E (WP6) (12-24mnd) HLA-E-moleculen worden uitgedrukt als zowel membraan- als oplosbare moleculen. De expressie van het membraan en oplosbaar HLA-E zal geëvalueerd worden in perifeer bloed en endometrium. Er zijn twee niet-synonieme allelen van HLA-E geïdentificeerd, HLA-ER (E*0101) en HLA-EG (E*0103) (16), waarbij de HLA-E-expressie van het EG-eiwit hoger was dan die van ER. We zullen de vrouwen genotyperen op HLA-E-polymorfismen, om de implicaties voor onvruchtbaarheid te evalueren.
Studietype
Inschrijving (Werkelijk)
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
Accepteert gezonde vrijwilligers
Geslachten die in aanmerking komen voor studie
Bemonsteringsmethode
Studie Bevolking
Beschrijving
Inclusiecriteria voor de onderzoeksgroep:
- 21-38 jaar oud,
- primaire onvruchtbaarheid (geen levendgeborene),
- regelmatige menstruatiecyclus (24-35 dagen),
- body mass index (BMI) ≤ 25, FSH <10 mUI/ml,
- E2 < 50 pg/ml op dag 2-3 van de menstruele cyclus. Werving bij opname voor beoordeling van de doorgankelijkheid van de eileiders.
Inclusiecriteria voor controlegroep:
- 21-35 jaar oud,
- bijna één levendgeborene,
- regelmatige menstruatiecyclus (24-35 dagen),
- BMI ≤ 25, FSH <10 mUI/ml,
- E2 < 50 pg/ml op dag 2-3 van de menstruele cyclus
Uitsluitingscriteria:
- endometritis,
- endometriose,
- eileiders factor,
- ovulatoire disfunctie,
- anatomische baarmoederpathologieën.
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
- Observatiemodellen: Cohort
- Tijdsperspectieven: Prospectief
Cohorten en interventies
Groep / Cohort |
Interventie / Behandeling |
|---|---|
|
Onvruchtbare vrouwen
Inclusiecriteria voor de onderzoeksgroep zijn als volgt: 21-38 jaar oud, primaire onvruchtbaarheid (geen levendgeborene), regelmatige menstruatiecyclus (24-35 dagen), body mass index (BMI) ≤ 25, FSH <10 mUI/mL , E2 < 50 pg/ml op dag 2-3 van de menstruele cyclus.
Ze worden bij opname gerekruteerd voor beoordeling van de doorgankelijkheid van de eileiders.
|
We kozen ervoor om het onderzoek uit te voeren tijdens de proliferatieve fase (dag 9-11), waar alleen residente eNK-cellen aanwezig zijn in het endometrium. De monsters worden geanalyseerd met de volgende methoden, die routinematig worden gebruikt in de OE's van het voorstel: - pNK-celanalyse: PBMC's zullen worden gezuiverd met Ficoll-oplossing en NK-cellen zullen worden geanalyseerd door flowcytometrie (FacsVantage, BD) met anti-CD56, CD16, CD9, CD49a, KIRs, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a eNK-celanalyse: eNK-cellen zullen worden verkregen uit endometriumbiopten tijdens de proliferatieve fase, bepaald door echografie en geanalyseerd op NK-celsubtypen en KIR's, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a-expressie door flowcytometrie
Detectie van herpesvirus: DNA wordt geanalyseerd door specifieke primers voor HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV en HHV-8, met PCR en geneste PCR
sHLA-G-analyse: sHLA-G-kwantificering in plasma en endometriumflushing zal worden uitgevoerd door ELISA met behulp van anti-HLA-G (G233) en anti-beta2-microglobuline HRP-geconjugeerde moAbs (Exbio)
Genomisch DNA zal gegenotypeerd worden door middel van RealTime PCR
sHLA-E-analyse: sHLA-E-kwantificering in plasma en endometriumflushing zal worden uitgevoerd door ELISA met behulp van anti-HLA-E (3D12, eBioscience) en anti-beta2-microglobuline HRP-geconjugeerde moAbs (Exbio)
|
|
Vruchtbare vrouwen
Inclusiecriteria voor controlegroep zijn als volgt: 21-35 jaar oud, bijna één levendgeborene, regelmatige menstruatiecyclus (24-35 dagen), BMI ≤ 25, FSH <10 mUI/ml, E2 < 50 pg/ml op dag 2-3 van de menstruatiecyclus.
Vrouwen met endometritis, endometriose, eileidersfactor, ovulatoire disfunctie, anatomische uteriene pathologieën worden uitgesloten.
|
We kozen ervoor om het onderzoek uit te voeren tijdens de proliferatieve fase (dag 9-11), waar alleen residente eNK-cellen aanwezig zijn in het endometrium. De monsters worden geanalyseerd met de volgende methoden, die routinematig worden gebruikt in de OE's van het voorstel: - pNK-celanalyse: PBMC's zullen worden gezuiverd met Ficoll-oplossing en NK-cellen zullen worden geanalyseerd door flowcytometrie (FacsVantage, BD) met anti-CD56, CD16, CD9, CD49a, KIRs, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a eNK-celanalyse: eNK-cellen zullen worden verkregen uit endometriumbiopten tijdens de proliferatieve fase, bepaald door echografie en geanalyseerd op NK-celsubtypen en KIR's, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a-expressie door flowcytometrie
Detectie van herpesvirus: DNA wordt geanalyseerd door specifieke primers voor HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV en HHV-8, met PCR en geneste PCR
sHLA-G-analyse: sHLA-G-kwantificering in plasma en endometriumflushing zal worden uitgevoerd door ELISA met behulp van anti-HLA-G (G233) en anti-beta2-microglobuline HRP-geconjugeerde moAbs (Exbio)
Genomisch DNA zal gegenotypeerd worden door middel van RealTime PCR
sHLA-E-analyse: sHLA-E-kwantificering in plasma en endometriumflushing zal worden uitgevoerd door ELISA met behulp van anti-HLA-E (3D12, eBioscience) en anti-beta2-microglobuline HRP-geconjugeerde moAbs (Exbio)
|
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Prognostische waarde van NK-cellen bij idiopathische onvruchtbaarheid bij vrouwen
Tijdsspanne: 20 maanden
|
Percentage (e)NK CD56brightCD16-
|
20 maanden
|
|
Detectie van herpesvirus
Tijdsspanne: 16 maanden
|
Aanwezigheid van HHV-infectie in endometriumcellen
|
16 maanden
|
Secundaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Niveaus van sHLA-G en sHLA-E cellule pNK e eNK
Tijdsspanne: 16 maanden
|
Niveaus van sHLA-G en sHLA-E in spoelmonsters van de baarmoeder
|
16 maanden
|
|
HLA-G en HLA-E genetische polymorfismen
Tijdsspanne: 10 maanden
|
Frequentie van HLA-G en HLA-E genetische polymorfismen
|
10 maanden
|
|
Cytokines-niveaus in endometriumspoelmonsters
Tijdsspanne: 10 maanden
|
Niveaus van Th1- en Th2-cytokines
|
10 maanden
|
Medewerkers en onderzoekers
Sponsor
Onderzoekers
- Hoofdonderzoeker: Giuseppe Lo Monte, M.D., Università di Ferarra
Publicaties en nuttige links
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start (Werkelijk)
Primaire voltooiing (Werkelijk)
Studie voltooiing (Werkelijk)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (Werkelijk)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (Werkelijk)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Trefwoorden
Aanvullende relevante MeSH-voorwaarden
Andere studie-ID-nummers
- PRUAlGR-2013-00000084
Plan Individuele Deelnemersgegevens (IPD)
Bent u van plan om gegevens van individuele deelnemers (IPD) te delen?
Informatie over medicijnen en apparaten, studiedocumenten
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd geneesmiddel
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd apparaatproduct
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .