Infecções e Infertilidade Inexplicada

Objetivo principal O principal desafio deste projeto é definir o papel potencial das células NK como um marcador prognóstico para infertilidade primária inexplicável. Para atingir este objetivo, realizaremos um estudo prospectivo em uma coorte de 100 mulheres inférteis inexplicadas. Sangue periférico e células NK endometriais serão imunofenotipadas e seu estado de ativação será analisado. Enquanto isso, a presença de infecção por herpesvírus será avaliada no sangue periférico e correlacionada com os resultados da análise NK. Esses dados esclarecerão o papel das células NK em condições femininas inférteis, avaliando a implicação da infecção por herpesvírus como um cofator para o status das células NK. Esses dados fornecerão uma prova de princípio do uso da análise de células NK como um marcador preditivo para infertilidade inexplicável.

Objetivo secundário O objetivo secundário é avaliar os mecanismos na base do estado das células NK na infertilidade. Como a expressão de HLA-G e HLA-E é modificada pela infecção por herpesvírus (9), como um mecanismo de escape imune, e esses antígenos são responsáveis ​​por uma correta implantação embrionária (14), analisaremos os níveis dessas moléculas no sangue periférico e ambiente endometrial. Enquanto isso, os polimorfismos genéticos HLA-G e HLA-E serão analisados. Esses resultados serão correlacionados com a presença de infecção por herpesvírus, expressão dos receptores KIR, LILRB e NKG2A nas células pNK e eNK. Esses dados esclarecerão a implicação da expressão de HLA-G e HLA-E e o histórico genético no controle da ativação de células NK e infecção por herpesvírus em mulheres inférteis.

A concretização destes objetivos será obtida com 6 workpackages/objetivos (WP)

1. Caracterização de mulheres inférteis (WP1) (1-20 meses) Recrutaremos 100 mulheres inférteis inexplicadas e 30 mulheres de controle. Essas mulheres serão avaliadas clinicamente, estabelecendo-se um banco de dados clínico. De cada mulher, obteremos amostras de sangue periférico, biópsias de endométrio e lavagem uterina.
2. Fenótipo imune de células NK (WP2) (1-20 meses) Células NK de sangue periférico e endométrio serão analisadas quanto às porcentagens de subtipos (CD56, CD16, CD9, CD49a) e quanto à expressão de KIR, LILRB-1 e -2 e Receptores CD94/NKG2A, que são conhecidos por interagir com moléculas HLA-G e HLA-E produzindo sinais inibitórios.
3. Th1, Th2, Th17 e LIF (WP3). (1-20 meses) Os níveis de Th1, Th2, Th17 e LIF serão analisados ​​em amostras de plasma e lavagem uterina, para avaliar o estado de ativação. Os resultados serão correlacionados com a contagem de células NK.
4. Infecção por Herpesvírus (WP4) (12-24 meses) A ​​presença de DNA de Herpesvírus (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV e HHV-8) será analisada em sangue periférico e lavagem uterina.
5. HLA-G (WP5) (12-24 meses) As moléculas de HLA-G são expressas como moléculas de membrana (HLA-G1) e solúveis (HLA-G5, de splicing alternativo de mRNA; sHLA-G1, de desprendimento de membrana). A expressão da membrana e do HLA-G solúvel será avaliada em sangue periférico e endométrio. A expressão de HLA-G é controlada por um polimorfismo de inserção/deleção (ins/del) de 14 pares de bases (rs66554220), onde a deleção de 14bp estabiliza o mRNA produzindo níveis mais elevados de HLA-G (15). Faremos a genotipagem das mulheres para o polimorfismo rs66554220, para avaliar a implicação nos níveis de expressão do HLA-G na condição infértil.
6. HLA-E (WP6) (12-24 meses) As moléculas HLA-E são expressas tanto como moléculas de membrana como solúveis. A expressão da membrana e do HLA-E solúvel será avaliada em sangue periférico e endométrio. Dois alelos não sinônimos de HLA-E foram identificados, HLA-ER (E*0101) e HLA-EG (E*0103) (16), onde a expressão de HLA-E da proteína EG foi maior do que ER. Iremos genotipar as mulheres para polimorfismos HLA-E, para avaliar a implicação na infertilidade.