Infeksjoner og uforklarlig infertilitet

Primært mål Hovedutfordringen til dette prosjektet er å definere den potensielle rollen til NK-celler som en prognostisk markør for primær uforklarlig infertilitet. For å nå dette målet vil vi utføre en prospektiv studie på en kohort på 100 uforklarlige infertile kvinner. Perifert blod og endometrie NK-celler vil være immunfenotype og deres aktiveringsstatus vil bli analysert. I mellomtiden vil tilstedeværelsen av herpesvirusinfeksjon bli evaluert i perifert blod og korrelert med resultatene av NK-analyse. Disse dataene vil klargjøre rollen til NK-celler i infertile kvinnelige tilstander, og evaluere implikasjonen av herpesvirusinfeksjon som en kofaktor for NK-cellestatus. Disse dataene vil gi et prinsippbevis for bruk av NK-celleanalyse som en prediktiv markør for uforklarlig infertilitet.

Sekundærmål Det sekundære målet er å evaluere mekanismene som ligger til grunn for NK-cellestatus ved infertilitet. Siden HLA-G- og HLA-E-ekspresjonen modifiseres av herpesvirusinfeksjon (9), som en immunfluktmekanisme, og disse antigenene er ansvarlige for en korrekt embryoimplantasjon (14), vil vi analysere nivåene av disse molekylene i perifert blod og endometrial miljø. I mellomtiden vil HLA-G og HLA-E genetiske polymorfismer bli analysert. Disse resultatene vil være korrelert med tilstedeværelsen av herpesvirusinfeksjon, KIR-, LILRB- og NKG2A-reseptorekspresjon på pNK- og eNK-celler. Disse dataene vil avklare implikasjonen av HLA-G- og HLA-E-ekspresjon og genetisk bakgrunn i kontrollen av NK-celleaktivering og herpesvirusinfeksjon hos infertile kvinner.

Oppnåelsen av disse målene vil oppnås med 6 arbeidspakker/mål (WP)

1. Karakterisering av infertile kvinner (WP1) (1-20 mnd) Vi vil rekruttere 100 uforklarlige infertile kvinner og 30 kontrollkvinner. Disse kvinnene vil bli klinisk evaluert, og etablere en klinisk database. Fra hver kvinne vil vi få perifere blodprøver, endometriumbiopsier og livmorspyling.
2. NK-celle immun-fenotype (WP2) (1-20 mnd) NK-celler fra perifert blod og endometrium vil bli analysert for subtype prosenter (CD56, CD16, CD9, CD49a), og for ekspresjon av KIR, LILRB-1 og -2 og CD94/NKG2A-reseptorer, som er kjent for å samhandle med HLA-G- og HLA-E-molekyler som produserer hemmende signaler.
3. Th1, Th2, Th17 og LIF (WP3). (1-20 mnd) Th1-, Th2-, Th17- og LIF-nivåer vil bli analysert i plasma- og livmorskylleprøver for å evaluere aktiveringsstatus. Resultatene vil være korrelert med NK-celletall.
4. Herpesvirusinfeksjon (WP4) (12-24 mnd.) Herpesvirus-DNA (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV og HHV-8) tilstedeværelse vil bli analysert i perifert blod og livmorspyling.
5. HLA-G (WP5) (12-24 mnd) HLA-G-molekyler uttrykkes som både membran- (HLA-G1) og løselige (HLA-G5, fra alternativ mRNA-spleising; sHLA-G1, fra membranutskillelse) molekyler. Uttrykket av membranen og løselig HLA-G vil bli evaluert i perifert blod og endometrium. HLA-G-ekspresjon kontrolleres av en polymorfisme av innsetting/delesjon (ins/del) av 14 basepar (rs66554220), hvor delesjonen av 14bp stabiliserer mRNA som produserer høyere nivåer av HLA-G (15). Vi vil genotype kvinnene for rs66554220 polymorfisme, for å evaluere implikasjonen i HLA-G-nivåer av uttrykk i infertil tilstand.
6. HLA-E (WP6) (12-24 mnd) HLA-E-molekyler uttrykkes som både membran og løselige molekyler. Uttrykket av membranen og løselig HLA-E vil bli evaluert i perifert blod og endometrium. To ikke-synonyme alleler av HLA-E er identifisert, HLA-ER (E*0101) og HLA-EG (E*0103) (16), der HLA-E-ekspresjonen av EG-proteinet var høyere enn ER. Vi vil genotype kvinnene for HLA-E polymorfismer, for å evaluere implikasjonen i infertilitet.