Infektioner og uforklarlig infertilitet

Primært mål Hovedudfordringen i dette projekt er at definere NK-cellernes potentielle rolle som en prognostisk markør for primær uforklaret infertilitet. For at nå dette mål vil vi udføre en prospektiv undersøgelse af en kohorte på 100 uforklarlige infertile kvinder. Perifert blod og endometrie NK-celler vil blive immunfænotypebestemt, og deres aktiveringsstatus vil blive analyseret. I mellemtiden vil tilstedeværelsen af ​​herpesvirusinfektion blive evalueret i perifert blod og korreleret med resultaterne af NK-analyse. Disse data vil afklare NK-cellernes rolle i infertile kvindelige tilstande og evaluere implikationen af ​​herpesvirusinfektion som en cofaktor for NK-cellestatus. Disse data vil give et principbevis for brugen af ​​NK-celleanalyse som en prædiktiv markør for uforklaret infertilitet.

Sekundært mål Det sekundære mål er at evaluere mekanismerne på grundlag af NK-cellestatus ved infertilitet. Da HLA-G- og HLA-E-ekspression modificeres af herpesvirusinfektion (9), som en immunflugtsmekanisme, og disse antigener er ansvarlige for en korrekt embryoimplantation (14), vil vi analysere niveauerne af disse molekyler i perifert blod og endometrie miljø. I mellemtiden vil HLA-G og HLA-E genetiske polymorfismer blive analyseret. Disse resultater vil blive korreleret med tilstedeværelsen af ​​herpesvirusinfektion, KIR-, LILRB- og NKG2A-receptorekspression på pNK- og eNK-celler. Disse data vil afklare implikationen af ​​HLA-G- og HLA-E-ekspression og genetisk baggrund i kontrollen af ​​NK-celleaktivering og herpesvirusinfektion hos infertile kvinder.

Opfyldelsen af ​​disse mål opnås med 6 arbejdspakker/mål (WP)

1. Karakterisering af infertile kvinder (WP1) (1-20 mdr.) Vi vil rekruttere 100 uforklarlige infertile kvinder og 30 kontrolkvinder. Disse kvinder vil blive klinisk evalueret og etablere en klinisk database. Fra hver kvinde vil vi få perifere blodprøver, endometriumbiopsier og livmoderskylning.
2. NK-celle immun-fænotype (WP2) (1-20 mdr.) NK-celler fra perifert blod og endometrium vil blive analyseret for subtype-procenter (CD56, CD16, CD9, CD49a) og for ekspression af KIR, LILRB-1 og -2 og CD94/NKG2A-receptorer, der vides at interagere med HLA-G- og HLA-E-molekyler, der producerer hæmmende signaler.
3. Th1, Th2, Th17 og LIF (WP3). (1-20 mdr.) Th1-, Th2-, Th17- og LIF-niveauer vil blive analyseret i plasma- og livmoderskylleprøver for at evaluere aktiveringsstatus. Resultaterne vil blive korreleret med NK-celletal.
4. Herpesvirusinfektion (WP4) (12-24 mdr.) Herpesvirus-DNA (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV og HHV-8) tilstedeværelse vil blive analyseret i perifert blod og uterinskylning.
5. HLA-G (WP5) (12-24 mdr.) HLA-G-molekyler udtrykkes som både membran- (HLA-G1) og opløselige (HLA-G5, fra alternativ mRNA-splejsning; sHLA-G1, fra membranudskillelse) molekyler. Ekspressionen af ​​membranen og opløseligt HLA-G vil blive evalueret i perifert blod og endometrium. HLA-G-ekspression styres af en polymorfi af insertion/deletion (ins/del) af 14 basepar (rs66554220), hvor deletionen af ​​14bp stabiliserer mRNA'et, der producerer højere niveauer af HLA-G (15). Vi vil genotype kvinderne for rs66554220 polymorfi for at evaluere implikationen i HLA-G niveauer af ekspression i infertil tilstand.
6. HLA-E (WP6) (12-24 mdr.) HLA-E-molekyler udtrykkes som både membran- og opløselige molekyler. Ekspressionen af ​​membranen og opløseligt HLA-E vil blive evalueret i perifert blod og endometrium. To ikke-synonyme alleler af HLA-E er blevet identificeret, HLA-ER (E*0101) og HLA-EG (E*0103) (16), hvor HLA-E-ekspression af EG-proteinet var højere end ER. Vi vil genotype kvinderne for HLA-E polymorfismer for at evaluere implikationen i infertilitet.