Infektionen und ungeklärte Unfruchtbarkeit

Hauptziel Die Hauptherausforderung dieses Projekts besteht darin, die potenzielle Rolle von NK-Zellen als prognostischer Marker für primäre ungeklärte Unfruchtbarkeit zu definieren. Um dieses Ziel zu erreichen, werden wir eine prospektive Studie an einer Kohorte von 100 Frauen mit ungeklärter Unfruchtbarkeit durchführen. Peripheres Blut und endometriale NK-Zellen werden immunphänotypisiert und ihr Aktivierungsstatus wird analysiert. In der Zwischenzeit wird das Vorhandensein einer Herpesvirus-Infektion im peripheren Blut bewertet und mit den Ergebnissen der NK-Analyse korreliert. Diese Daten werden die Rolle von NK-Zellen bei unfruchtbaren weiblichen Zuständen klären und die Implikation einer Herpesvirusinfektion als Cofaktor für den NK-Zellstatus bewerten. Diese Daten werden einen Grundsatzbeweis für die Verwendung der NK-Zellanalyse als prädiktiver Marker für ungeklärte Unfruchtbarkeit liefern.

Sekundäres Ziel Das sekundäre Ziel ist die Bewertung der Mechanismen, die dem NK-Zellstatus bei Unfruchtbarkeit zugrunde liegen. Da die HLA-G- und HLA-E-Expression durch eine Herpesvirusinfektion (9) als immunologischer Fluchtmechanismus modifiziert wird und diese Antigene für eine korrekte Embryonenimplantation verantwortlich sind (14), werden wir die Spiegel dieser Moleküle im peripheren Blut analysieren und endometriale Umgebung. In der Zwischenzeit werden genetische Polymorphismen von HLA-G und HLA-E analysiert. Diese Ergebnisse werden mit dem Vorhandensein einer Herpesvirus-Infektion, der KIR-, LILRB- und NKG2A-Rezeptorexpression auf pNK- und eNK-Zellen korreliert. Diese Daten werden die Auswirkungen der HLA-G- und HLA-E-Expression und des genetischen Hintergrunds auf die Kontrolle der NK-Zellaktivierung und der Herpesvirusinfektion bei unfruchtbaren Frauen klären.

Die Erreichung dieser Ziele wird mit 6 Arbeitspaketen/Zielen (WP) erreicht

1. Charakterisierung unfruchtbarer Frauen (WP1) (1-20 Monate) Wir werden 100 ungeklärte unfruchtbare Frauen und 30 Kontrollfrauen rekrutieren. Diese Frauen werden klinisch untersucht und eine klinische Datenbank erstellt. Von jeder Frau erhalten wir periphere Blutproben, Endometriumbiopsien und eine Gebärmutterspülung.
2. NK-Zell-Immunphänotyp (WP2) (1-20 Monate) NK-Zellen aus peripherem Blut und Endometrium werden auf Subtyp-Prozentsätze (CD56, CD16, CD9, CD49a) und auf die Expression von KIR, LILRB-1 und -2 und analysiert CD94/NKG2A-Rezeptoren, von denen bekannt ist, dass sie mit HLA-G- und HLA-E-Molekülen interagieren und hemmende Signale erzeugen.
3. Th1, Th2, Th17 und LIF (WP3). (1-20 Monate) Die Th1-, Th2-, Th17- und LIF-Spiegel werden in Plasma- und Uterusspülungsproben analysiert, um den Aktivierungsstatus zu bewerten. Die Ergebnisse werden mit der NK-Zellzahl korreliert.
4. Herpesvirusinfektion (WP4) (12-24 Monate) Das Vorhandensein von Herpesvirus-DNA (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV und HHV-8) wird im peripheren Blut und in der Gebärmutterspülung analysiert.
5. HLA-G (WP5) (12-24 Monate) HLA-G-Moleküle werden sowohl als Membran- (HLA-G1) als auch als lösliche (HLA-G5, durch mRNA-alternatives Spleißen; sHLA-G1, durch Membran-Shedding) Moleküle exprimiert. Die Expression von membranständigem und löslichem HLA-G wird in peripherem Blut und Endometrium evaluiert. Die HLA-G-Expression wird durch einen Polymorphismus der Insertion/Deletion (ins/del) von 14 Basenpaaren (rs66554220) kontrolliert, wobei die Deletion von 14 bp die mRNA stabilisiert und höhere HLA-G-Spiegel produziert (15). Wir werden die Frauen auf rs66554220-Polymorphismus genotypisieren, um die Auswirkungen auf die HLA-G-Expressionsspiegel in einem unfruchtbaren Zustand zu bewerten.
6. HLA-E (WP6) (12-24 Monate) HLA-E-Moleküle werden sowohl als Membran- als auch als lösliche Moleküle exprimiert. Die Expression des membranständigen und löslichen HLA-E wird im peripheren Blut und im Endometrium evaluiert. Zwei nicht-synonyme Allele von HLA-E wurden identifiziert, HLA-ER (E*0101) und HLA-EG (E*0103) (16), wobei die HLA-E-Expression des EG-Proteins höher war als die von ER. Wir werden die Frauen auf HLA-E-Polymorphismen genotypisieren, um die Auswirkungen auf die Unfruchtbarkeit zu bewerten.