Infecciones e infertilidad inexplicable
Marcadores de pronóstico en mujeres con infertilidad primaria inexplicable
- Antecedentes: en las mujeres, la infertilidad inexplicable se ha asociado con una variedad de defectos celulares y moleculares en el endometrio, respuestas inmunitarias adversas y factores inmunológicos. Se incluyen las células asesinas naturales (NK) ya que constituyen la población de leucocitos más abundante en la decidua. Si bien las células NK decidua se investigaron ampliamente, el estudio de las células eNK endometriales aún carece de investigaciones exhaustivas. La reducción en la frecuencia de eNK se ha asociado con el estado de infertilidad, en particular en presencia de una viremia por herpesvirus concomitante. Dado que los herpesvirus utilizan como inmunoescape moléculas HLA-G y HLA-E, que son inmunoinhibitorias e importantes para una correcta placentación, podrían representar cofactores de infertilidad.
- Objetivos: dado que la falta de un diagnóstico preciso en medicina reproductiva conduce al fracaso del tratamiento, esta propuesta se centra en la caracterización de células eNK como factor de diagnóstico para la infertilidad femenina inexplicable. Evaluaremos también los cofactores, teniendo en cuenta la infección por herpesvirus y la expresión de HLA-G y HLA-E.
- Métodos: Las células NK de sangre periférica y endometriales serán inmunofenotipadas y el recuento de células y el estado de activación (CD107a, IL-6, IL-10, IL-17) se correlacionarán con la condición de infertilidad. La implicación del herpesvirus se evaluará mediante el análisis de ADN de muestras de sangre periférica y lavado endometrial mediante cebadores específicos de HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV y HHV-8 y una técnica de PCR. La expresión de HLA-G y HLA-E se analizará en sangre periférica y entorno endometrial mediante pruebas de citometría de flujo y ELISA y se correlacionará con la expresión de células NK de sus receptores (KIR, LILRB1/2, NKG2A).
- Resultados esperados: Sobre la base de nuestros resultados preliminares, esperamos identificar las células NK como marcador de pronóstico para la infertilidad primaria inexplicable, con la infección por herpesvirus y la expresión de HLA-G y HLA-E como cofactores. Estos datos serán de importancia en el manejo de mujeres infértiles.
Descripción general del estudio
Estado
Condiciones
Descripción detallada
Objetivo principal El principal desafío de este proyecto es definir el papel potencial de las células NK como marcador pronóstico de infertilidad primaria inexplicable. Para lograr este objetivo realizaremos un estudio prospectivo sobre una cohorte de 100 mujeres con infertilidad inexplicable. Las células NK de sangre periférica y endometriales serán inmunofenotipadas y se analizará su estado de activación. Mientras tanto, se evaluará la presencia de infección por herpesvirus en sangre periférica y se correlacionará con los resultados del análisis NK. Estos datos aclararán el papel de las células NK en condiciones femeninas infértiles, evaluando la implicación de la infección por herpesvirus como cofactor para el estado de las células NK. Estos datos proporcionarán una prueba de principio del uso del análisis de células NK como marcador predictivo de infertilidad inexplicable.
Objetivo secundario El objetivo secundario es evaluar los mecanismos en la base del estado de las células NK en la infertilidad. Dado que la expresión de HLA-G y HLA-E se ve modificada por la infección por herpesvirus (9), como mecanismo de escape inmunitario, y estos antígenos son los responsables de una correcta implantación embrionaria (14), analizaremos los niveles de estas moléculas en sangre periférica y entorno endometrial. Mientras tanto, se analizarán los polimorfismos genéticos HLA-G y HLA-E. Estos resultados se correlacionarán con la presencia de infección por herpesvirus, expresión del receptor KIR, LILRB y NKG2A en células pNK y eNK. Estos datos aclararán la implicación de la expresión de HLA-G y HLA-E y los antecedentes genéticos en el control de la activación de las células NK y la infección por herpesvirus en mujeres infértiles.
El logro de estos objetivos se obtendrá con 6 paquetes de trabajo/objetivos (WP)
- Caracterización de mujeres infértiles (WP1) (1-20 meses) Reclutaremos 100 mujeres infértiles inexplicables y 30 mujeres de control. Estas mujeres serán evaluadas clínicamente, estableciendo una base de datos clínica. De cada mujer, obtendremos muestras de sangre periférica, biopsias de endometrio y lavado uterino.
- Inmunofenotipo de células NK (WP2) (1-20 meses) Las células NK de sangre periférica y endometrio se analizarán para determinar los porcentajes de subtipos (CD56, CD16, CD9, CD49a) y la expresión de KIR, LILRB-1 y -2 y Receptores CD94/NKG2A, que se sabe que interactúan con moléculas HLA-G y HLA-E produciendo señales inhibitorias.
- Th1, Th2, Th17 y LIF (WP3). (1-20 meses) Los niveles de Th1, Th2, Th17 y LIF se analizarán en plasma y muestras de lavado uterino para evaluar el estado de activación. Los resultados se correlacionarán con el recuento de células NK.
- Infección por herpesvirus (WP4) (12-24 meses) Se analizará la presencia de ADN de herpesvirus (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV y HHV-8) en sangre periférica y lavado uterino.
- HLA-G (WP5) (12-24 meses) Las moléculas HLA-G se expresan como moléculas de membrana (HLA-G1) y solubles (HLA-G5, del empalme alternativo de ARNm; sHLA-G1, del desprendimiento de la membrana). Se evaluará la expresión del HLA-G de membrana y soluble en sangre periférica y endometrio. La expresión de HLA-G está controlada por un polimorfismo de inserción/deleción (ins/del) de 14 pares de bases (rs66554220), donde la deleción de 14bp estabiliza el mRNA produciendo niveles más altos de HLA-G (15). Genotipificaremos a las mujeres para el polimorfismo rs66554220, para evaluar la implicación en los niveles de expresión de HLA-G en condiciones infértiles.
- HLA-E (WP6) (12-24 meses) Las moléculas HLA-E se expresan como moléculas de membrana y solubles. Se evaluará la expresión del HLA-E de membrana y soluble en sangre periférica y endometrio. Se han identificado dos alelos no sinónimos de HLA-E, HLA-ER (E*0101) y HLA-EG (E*0103) (16), donde la expresión de HLA-E de la proteína EG fue mayor que la de ER. Genotipificaremos a las mujeres para los polimorfismos HLA-E, para evaluar la implicación en la infertilidad.
Tipo de estudio
Inscripción (Actual)
Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
Acepta Voluntarios Saludables
Géneros elegibles para el estudio
Método de muestreo
Población de estudio
Descripción
Criterios de inclusión para el grupo de estudio:
- 21-38 años,
- infertilidad primaria (sin nacimiento vivo),
- ciclo menstrual regular (24-35 días),
- índice de masa corporal (IMC) ≤ 25, FSH <10 mUI/mL,
- E2 < 50 pg/ml en el día 2-3 del ciclo menstrual. Reclutamiento al ingreso para evaluación de permeabilidad tubárica.
Criterios de inclusión para el grupo de control:
- 21-35 años,
- casi un nacido vivo,
- ciclo menstrual regular (24-35 días),
- IMC ≤ 25, FSH <10 mUI/mL,
- E2 < 50 pg/mL en el día 2-3 del ciclo menstrual
Criterio de exclusión:
- endometritis,
- endometriosis,
- factor tubárico,
- disfunción ovulatoria,
- patologías anatómicas uterinas.
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
- Modelos observacionales: Grupo
- Perspectivas temporales: Futuro
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
Intervención / Tratamiento |
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Mujeres infértiles
Los criterios de inclusión para el grupo de estudio serán los siguientes: 21-38 años, infertilidad primaria (sin nacido vivo), ciclo menstrual regular (24-35 días), índice de masa corporal (IMC) ≤ 25, FSH <10 mUI/mL , E2 < 50 pg/ml en el día 2-3 del ciclo menstrual.
Serán reclutados en el momento de la admisión para la evaluación de la permeabilidad tubárica.
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Elegimos realizar el estudio durante la fase proliferativa (día 9-11), donde solo las células eNK residentes están presentes en el endometrio. Las muestras se analizarán con los siguientes métodos, que se utilizan habitualmente en las unidades organizativas de la propuesta: - Análisis de células pNK: las PBMC se purificarán con solución de Ficoll y las células NK se analizarán mediante citometría de flujo (FacsVantage, BD) con análisis de células eNK anti-CD56, CD16, CD9, CD49a, KIRs, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a: Las células eNK se obtendrán de biopsias endometriales durante la fase proliferativa, se determinarán mediante ecografía y se analizarán los subtipos de células NK y la expresión de KIR, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a mediante citometría de flujo.
Detección de herpesvirus: el ADN se analizará mediante cebadores específicos para HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV y HHV-8, con PCR y PCR anidada
Análisis de sHLA-G: la cuantificación de sHLA-G en plasma y lavado endometrial se realizará mediante ELISA utilizando anti-HLA-G (G233) y anti-beta2-microglobulina HRP-moAbs conjugados (Exbio)
El ADN genómico será genotipado por RealTime PCR
Análisis de sHLA-E: la cuantificación de sHLA-E en plasma y lavado endometrial se realizará mediante ELISA utilizando anti-HLA-E (3D12, eBioscience) y anti-beta2-microglobulina HRP-moAbs conjugados (Exbio)
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Mujeres fértiles
Los criterios de inclusión para el grupo control serán los siguientes: 21-35 años, casi un nacido vivo, ciclo menstrual regular (24-35 días), IMC ≤ 25, FSH <10 mUI/mL, E2 < 50 pg/mL el día 2-3 del ciclo menstrual.
Se excluirán mujeres con endometritis, endometriosis, factor tubárico, disfunción ovulatoria, patologías anatómicas uterinas.
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Elegimos realizar el estudio durante la fase proliferativa (día 9-11), donde solo las células eNK residentes están presentes en el endometrio. Las muestras se analizarán con los siguientes métodos, que se utilizan habitualmente en las unidades organizativas de la propuesta: - Análisis de células pNK: las PBMC se purificarán con solución de Ficoll y las células NK se analizarán mediante citometría de flujo (FacsVantage, BD) con análisis de células eNK anti-CD56, CD16, CD9, CD49a, KIRs, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a: Las células eNK se obtendrán de biopsias endometriales durante la fase proliferativa, se determinarán mediante ecografía y se analizarán los subtipos de células NK y la expresión de KIR, LILRB1, LILRB2, CD94, CD107a mediante citometría de flujo.
Detección de herpesvirus: el ADN se analizará mediante cebadores específicos para HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, HHV-6, HHV-7, VZV y HHV-8, con PCR y PCR anidada
Análisis de sHLA-G: la cuantificación de sHLA-G en plasma y lavado endometrial se realizará mediante ELISA utilizando anti-HLA-G (G233) y anti-beta2-microglobulina HRP-moAbs conjugados (Exbio)
El ADN genómico será genotipado por RealTime PCR
Análisis de sHLA-E: la cuantificación de sHLA-E en plasma y lavado endometrial se realizará mediante ELISA utilizando anti-HLA-E (3D12, eBioscience) y anti-beta2-microglobulina HRP-moAbs conjugados (Exbio)
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Valor pronóstico de las células NK en la infertilidad idiopática femenina
Periodo de tiempo: 20 meses
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Porcentaje de (e)NK CD56brightCD16-
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20 meses
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Detección de herpesvirus
Periodo de tiempo: 16 meses
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Presencia de infección por HHV en células endometriales
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16 meses
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
|---|---|---|
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Niveles de sHLA-G y sHLA-E celular pNK e eNK
Periodo de tiempo: 16 meses
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Niveles de sHLA-G y sHLA-E en muestras de lavado uterino
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16 meses
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Polimorfismos genéticos HLA-G y HLA-E
Periodo de tiempo: 10 meses
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Frecuencia de polimorfismos genéticos HLA-G y HLA-E
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10 meses
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Niveles de citocinas en muestras de lavado endometrial
Periodo de tiempo: 10 meses
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Niveles de citoquinas Th1 y Th2
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10 meses
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Giuseppe Lo Monte, M.D., Università di Ferarra
Publicaciones y enlaces útiles
Fechas de registro del estudio
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (Actual)
Finalización primaria (Actual)
Finalización del estudio (Actual)
Fechas de registro del estudio
Enviado por primera vez
Primero enviado que cumplió con los criterios de control de calidad
Publicado por primera vez (Actual)
Actualizaciones de registros de estudio
Última actualización publicada (Actual)
Última actualización enviada que cumplió con los criterios de control de calidad
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Términos relacionados con este estudio
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Términos MeSH relevantes adicionales
Otros números de identificación del estudio
- PRUAlGR-2013-00000084
Plan de datos de participantes individuales (IPD)
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Información sobre medicamentos y dispositivos, documentos del estudio
Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
Estudia un producto de dispositivo regulado por la FDA de EE. UU.
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