자가면역 간염에서 면역 억제 철회의 성공을 예측하는 바이오마커

연구 설계: 이것은 1형 AIH 환자의 안전하고 효과적인 치료 중단을 위한 예측 바이오마커를 확립하기 위한 전향적 비통제, 비 무작위, 단일 중심 연구입니다.

연구 기간: 스크리닝에는 1년이 소요될 것으로 예상됩니다. 치료 중단은 6개월에 걸쳐 점진적으로 이루어지며 18개월의 후속 조치가 있을 것입니다.

표본 크기: 재발률은 일부 연구에서 약 36%였습니다. 그러나 이 비율은 불확실하며 연구 대상 인구와 이후 후속 조치에 따라 다릅니다. 그렇기 때문에 연구자들은 이 비율의 신뢰 구간과 87명의 환자에 대한 10% 정확도로 샘플 크기를 계산했습니다. 손실의 10%를 예상하면 최종 샘플 크기는 96명의 환자입니다.

환자: 조사관은 바르셀로나 병원 클리닉에서 면역억제 치료를 받고 있는 최소 3년의 생화학적 관해가 있는 1형 AIH 진단을 받은 96명의 환자를 선택합니다. 2형 AIH 환자는 재발 위험이 높은 것으로 입증되었기 때문에 제외됩니다. 기타 포함 및 제외 기준은 다음과 같습니다.

치료 중단: IS는 6개월에 걸쳐 점진적으로 테이퍼링됩니다. Azathioprine은 처음 3개월 동안 중단하고 매달 용량을 50% 줄입니다. 프레드니손은 완전히 중단될 때까지 매월 2.5mg씩 점감됩니다. 중단 기간 및 치료 중단 후 첫 1년 동안 환자는 매달 실험실 검사를 받게 되며, 그 이후에는 프로젝트가 종료될 때까지 3개월마다 후속 조치가 이루어집니다.

지속적인 관해: 치료 중단 후 AST/ALT가 정상 상한치의 2배 미만으로 유지되는 환자.

재발: 이전 기준을 충족하지 않는 환자.

데이터 수집:

• 인구통계학적 변수: 연령, 성별, 진단에서 치료 중단까지의 시간, 아미노전이효소, 감마글루타밀전이효소(GGT), 알칼리성 인산분해효소(AP) 및 자가항체와 같은 검사실 정보.
• 다음 분석이 수행되는 포함 시점의 조직학적 샘플: 문맥 염증, 인터페이스 간염 및 섬유증의 존재를 평가하기 위한 일반적인 염색 기술. 간 거부와 관련된 유전자 그룹(CXCL9, CXCL10, FoxP3, TK1, CD74, MMP9)의 발현은 -80ºC에서 냉동 보관된 조직 샘플의 RNA에서 정량적 중합효소 연쇄 반응(qPCR)으로 평가됩니다. 림프구 CD4+, CD8+ 및 Treg의 수를 정량화하기 위한 면역화학 염색.

• 다음 변수는 포함 및 모든 후속 방문에서 수집된 혈액 샘플에서 평가됩니다.

  • Flux cytometry: Treg(CD4+, CD25+, CD127- 및 FoxP3)의 빈도 및 특성. CTLA-4의 세포내 염색도 평가될 것입니다.
  • Treg 반응을 연구하기 위한 인터루킨 2(IL2)로 자극(자극 20분 후 pSTAT5 발현 및 이후 IL10 생성으로 측정됨).
  • 자가항체 역가: 항핵 ​​자가항체(ANA), 항평활근 항체(ASMA), 항간 신장 마이크로솜 1형(antiLKM), 항용성 간 항원(antiSLA) 및 면역글로불린 수준.

통계 분석: 범주형 변수는 Chi 또는 Fisher 테스트와 비교됩니다. 정량적 변수는 비모수 테스트(독립 샘플의 경우 Mann-Whitney, 쌍 샘플의 경우 Wilcoxon)로 분석됩니다. 혈액 및 조직 샘플에서 유전자의 발현을 정량화하기 위해 유전자의 Ct를 3 "하우스키핑"(18S, HPRT, GAPDH)으로 정규화하여 델타 Ct를 생성합니다. 결과는 연구의 cDNA와 보정된 샘플의 상대적 표현으로 표현됩니다. 차이점

야망: 연구자의 가설은 치료 중단 후 관해를 유지할 수 있는 1형 AIH에 영향을 받은 환자가 독특한 혈청학적 및 조직학적 바이오마커를 나타내어 비용과 부작용을 피하면서 향후 치료를 중단함으로써 이익을 얻을 수 있는 환자를 식별할 수 있게 한다는 것입니다. 동시에 AIH의 면역 병인을 이해하고 새로운 치료 표적을 식별하는 데 도움이 될 것입니다. 따라서 지난 수십 년 동안 이 분야에서 거의 발전이 없었던 이 질병의 자연사를 변화시킵니다.