Biomarkører til at forudsige succesen med immunsuppressionsabstinens ved autoimmun hepatitis

Undersøgelsesdesign: Dette er et prospektivt ikke-kontrolleret, ikke randomiseret, unicentrisk studie for at etablere prædiktive biomarkører for en sikker og effektiv behandlingsafbrydelse hos patienter med type 1 AIH.

Undersøgelsens varighed: Screening forventes at tage et år. Behandlingsafbrydelsen vil ske gradvist over en periode på 6 måneder, og der vil være en opfølgning på 18 måneder.

Prøvestørrelse: Hyppigheden af ​​tilbagefald har været omkring 36% i nogle undersøgelser. Denne rate er dog usikker, og den afhænger af den undersøgte population og den efterfølgende opfølgning. Det er grunden til, at efterforskerne har beregnet stikprøvestørrelsen med konfidensintervallet for denne frekvens og en 10 % præcision, som var på 87 patienter. Med forventet 10 % af tabene er den endelige stikprøvestørrelse 96 patienter.

Patienter: Efterforskerne vil udvælge 96 patienter diagnosticeret med type 1 AIH med biokemisk remission på mindst 3 år, som er under immunsuppressiv behandling fulgt i Hospital Clinic Barcelona. Patienter med type 2 AIH er udelukket på grund af deres påvist høje risiko for tilbagefald. Andre inklusions- og eksklusionskriterier er følgende:

Behandlingsophør: IS vil gradvist nedtrappes over en periode på 6 måneder. Azathioprin stoppes i løbet af de første 3 måneder, hvorved dosis reduceres med 50 % hver måned. Prednison vil blive nedtrappet 2,5 mg månedligt indtil fuldstændig tilbagetrækning. Under seponering og det første år efter behandlingsophør vil patienterne gennemgå laboratorietests på månedsbasis, efterfølgende vil der blive fulgt op hver 3. måned indtil projektets afslutning.

Vedvarende remission: Patienter, der efter behandlingsophør holder ASAT/ALAT under 2 gange den øvre normalgrænse.

Recidiv: Patienter, der ikke opfylder tidligere kriterier.

Dataindsamling:

• Demografiske variabler: alder, køn, tid fra diagnose til behandlingsafbrydelse, laboratorieoplysninger såsom aminotransferaser, gamma-glutamyltransferase (GGT), alkalisk fosfatase (AP) og autoantistoffer.
• Histologisk prøve på tidspunktet for inklusion, hvor følgende analyse vil blive udført: sædvanlige farvningsteknikker til at evaluere tilstedeværelsen af ​​portalbetændelse, grænsefladehepatitis og fibrose. Ekspression af en gruppe gener involveret i leverafstødning (CXCL9, CXCL10, FoxP3, TK1, CD74, MMP9) vil blive evalueret med kvantitativ polymerasekædereaktion (qPCR) i RNA fra vævsprøverne kryokonserveret ved -80ºC. Immunkemisk farvning for at kvantificere antallet af lymfocytter CD4+, CD8+ og Tregs.

• Følgende variabler vil blive evalueret i blodprøver indsamlet ved inklusion og ved hvert opfølgningsbesøg:

  • Fluxcytometri: Hyppighed og karakteristika af Tregs (CD4+, CD25+, CD127- og FoxP3). Den intracellulære farvning af CTLA-4 vil også blive evalueret.
  • Stimulering med interleukin 2 (IL2) for at studere Tregs-respons (målt ved ekspressionen af ​​pSTAT5 efter 20 minutters stimulering og den efterfølgende produktion af IL10).
  • Autoantistoftitre: antinukleære autoantistoffer (ANA), anti-glatmuskel-antistof (ASMA), anti-levernyremikrosom type 1 (antiLKM), antiopløseligt leverantigen (antiSLA) og immunoglobulinniveauer.

Statistisk analyse: Kategoriske variabler vil blive sammenlignet med Chi eller Fisher test. Kvantitative variabler vil blive analyseret med ikke-parametriske tests (Mann-Whitney for uafhængige prøver og Wilcoxon for parrede prøver). For at kvantificere ekspressionen af ​​gener i blod- og vævsprøver vil Ct af genet blive normaliseret med 3 "husholdning" (18S, HPRT, GAPDH) for at generere delta Ct. Resultater vil blive udtrykt som en relativ ekspression af undersøgelsens cDNA og den kalibrerede prøve. Forskelle af

Ambition: Undersøgerens hypotese er, at de patienter, der er ramt af type 1 AIH, der er i stand til at opretholde remission efter behandlingsophør, vil udtrykke særprægede serologiske og histologiske biomarkører, hvilket gør det muligt at identificere patienter, der kunne drage fordel af at stoppe behandlingen i fremtiden og undgå dens omkostninger og bivirkninger. Samtidig ville det hjælpe med at forstå immunopatogenesen af ​​AIH og identifikation af nye terapeutiske mål. Derfor ændrer den naturlige historie af denne sygdom, hvor der har været lidt fremskridt på dette område i de sidste årtier.