Биомаркеры для прогнозирования успеха отмены иммуносупрессии при аутоиммунном гепатите

Дизайн исследования: это проспективное неконтролируемое, нерандомизированное, одноцентровое исследование, целью которого является определение прогностических биомаркеров для безопасной и эффективной отмены лечения у пациентов с АИГ 1 типа.

Продолжительность исследования: Ожидается, что скрининг займет год. Прекращение лечения будет осуществляться постепенно в течение 6 месяцев, а последующее наблюдение будет продолжаться в течение 18 месяцев.

Размер выборки: в некоторых исследованиях частота рецидивов составляла около 36%. Однако эта частота неопределенна и зависит от изучаемой популяции и последующего наблюдения. Вот почему исследователи рассчитали размер выборки с доверительным интервалом этой частоты и точностью 10%, которая составила 87 пациентов. Ожидая 10% потерь, окончательный размер выборки составляет 96 пациентов.

Пациенты: Исследователи отберут 96 пациентов с диагнозом АИГ 1 типа с биохимической ремиссией не менее 3 лет, которые проходят иммуносупрессивное лечение в госпитальной клинике Барселоны. Пациентов с АИГ 2 типа исключают из-за доказанного высокого риска рецидива. Другими критериями включения и исключения являются следующие:

Прекращение лечения: ИС будет снижаться постепенно в течение 6 месяцев. Азатиоприн будет остановлен в течение первых 3 месяцев, ежемесячно снижая дозу на 50%. Преднизолон будет постепенно снижаться до 2,5 мг в месяц до полной отмены. В период отмены и в течение первого года после прекращения лечения пациенты ежемесячно будут проходить лабораторные исследования, в дальнейшем контрольное наблюдение будет проводиться каждые 3 месяца до окончания проекта.

Устойчивая ремиссия: пациенты, у которых после прекращения лечения уровень АСТ/АЛТ в 2 раза ниже верхней границы нормы.

Рецидив: пациенты, которые не соответствуют предыдущим критериям.

Сбор информации:

• Демографические переменные: возраст, пол, время от постановки диагноза до прекращения лечения, лабораторная информация, такая как аминотрансферазы, гамма-глутамилтрансфераза (ГГТ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и аутоантитела.
• Гистологический образец на момент включения, в котором будет проводиться следующий анализ: обычные методы окрашивания для оценки наличия портального воспаления, гепатита и фиброза интерфейса. Экспрессия группы генов, участвующих в отторжении печени (CXCL9, CXCL10, FoxP3, TK1, CD74, MMP9), будет оцениваться с помощью количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР) в РНК образцов тканей, криоконсервированных при -80ºC. Иммунохимическое окрашивание для количественного определения количества лимфоцитов CD4+, CD8+ и Treg.

• Следующие переменные будут оцениваться в образцах крови, собранных при включении и при каждом последующем посещении:

  • Проточная цитометрия: частота и характеристики Tregs (CD4+, CD25+, CD127- и FoxP3). Также будет оцениваться внутриклеточное окрашивание CTLA-4.
  • Стимуляция интерлейкином 2 (IL2) для изучения ответа Tregs (измеряется по экспрессии pSTAT5 после 20 минут стимуляции и последующей продукции IL10).
  • Титры аутоантител: антинуклеарные аутоантитела (ANA), антитела к гладкомышечным клеткам (ASMA), антитела к микросомам печени почки типа 1 (antiLKM), антирастворимые печеночные антигены (antiSLA) и уровни иммуноглобулинов.

Статистический анализ: Категориальные переменные будут сравниваться с критерием Чи или Фишера. Количественные переменные будут проанализированы с помощью непараметрических тестов (Манна-Уитни для независимых выборок и Уилкоксона для парных выборок). Для количественной оценки экспрессии генов в образце крови и ткани Ct гена будет нормализован с помощью 3 «домашних хозяйств» (18S, HPRT, GAPDH) для получения дельта Ct. Результаты будут выражены как относительная экспрессия кДНК исследования и калиброванного образца. Отличия

Амбиции: Гипотеза исследователя состоит в том, что пациенты с АИГ 1-го типа, способные поддерживать ремиссию после прекращения лечения, будут экспрессировать отличительные серологические и гистологические биомаркеры, что позволит выявить пациентов, которым в будущем может помочь прекращение лечения, избегая его затрат и побочных эффектов. В то же время это помогло бы понять иммунопатогенез АИГ и определить новые терапевтические мишени. Таким образом, естественное течение этого заболевания меняется там, где за последние десятилетия в этой области было мало достижений.