Biomarker zur Vorhersage des Erfolgs des Absetzens der Immunsuppression bei Autoimmunhepatitis

Studiendesign: Dies ist eine prospektive, nicht kontrollierte, nicht randomisierte, unizentrische Studie zur Etablierung prädiktiver Biomarker für einen sicheren und wirksamen Behandlungsabbruch bei Patienten mit Typ-1-AIH.

Dauer der Studie: Das Screening wird voraussichtlich ein Jahr dauern. Das Absetzen der Behandlung erfolgt schrittweise über einen Zeitraum von 6 Monaten und es erfolgt eine Nachbeobachtung von 18 Monaten.

Stichprobengröße: Die Rezidivrate lag in einigen Studien bei etwa 36 %. Diese Rate ist jedoch ungewiss und hängt von der untersuchten Population und der anschließenden Nachsorge ab. Aus diesem Grund haben die Forscher die Stichprobengröße mit dem Konfidenzintervall dieser Rate und einer Genauigkeit von 10 % berechnet, was 87 Patienten entspricht. Unter Berücksichtigung von 10 % der Verluste beträgt die endgültige Stichprobengröße 96 Patienten.

Patienten: Die Ermittler werden 96 Patienten auswählen, bei denen Typ-1-AIH mit einer biochemischen Remission von mindestens 3 Jahren diagnostiziert wurde und die sich in der Hospital Clinic Barcelona einer immunsuppressiven Behandlung unterziehen. Patienten mit AIH Typ 2 sind aufgrund ihres nachgewiesen hohen Rezidivrisikos ausgeschlossen. Weitere Ein- und Ausschlusskriterien sind:

Behandlungsabbruch: IS wird schrittweise über einen Zeitraum von 6 Monaten ausgeschlichen. Azathioprin wird während der ersten 3 Monate abgesetzt, wobei die Dosis jeden Monat um 50 % reduziert wird. Prednison wird auf 2,5 mg monatlich bis zum vollständigen Entzug reduziert. Während des Entzugs und im ersten Jahr nach Beendigung der Behandlung werden die Patienten monatlich Laboruntersuchungen unterzogen, danach erfolgt die Nachsorge alle 3 Monate bis zum Ende des Projekts.

Anhaltende Remission: Patienten, die nach Beendigung der Behandlung AST/ALT unter dem 2-fachen der oberen Normalgrenze halten.

Rezidiv: Patienten, die die vorherigen Kriterien nicht erfüllen.

Datensammlung:

• Demografische Variablen: Alter, Geschlecht, Zeit von der Diagnose bis zum Behandlungsabbruch, Labordaten wie Aminotransferasen, Gamma-Glutamyl-Transferase (GGT), alkalische Phosphatase (AP) und Autoantikörper.
• Histologische Probe zum Zeitpunkt der Aufnahme, in der die folgende Analyse durchgeführt wird: übliche Färbetechniken zur Beurteilung des Vorhandenseins von Pfortaderentzündung, Hepatitis und Fibrose der Schnittstelle. Die Expression einer Gruppe von Genen, die an der Leberabstoßung beteiligt sind (CXCL9, CXCL10, FoxP3, TK1, CD74, MMP9), wird mit quantitativer Polymerase-Kettenreaktion (qPCR) in RNA der bei -80 °C kryokonservierten Gewebeproben bewertet. Immunchemische Färbung zur Quantifizierung der Anzahl der Lymphozyten CD4+, CD8+ und Tregs.

• Die folgenden Variablen werden in Blutproben ausgewertet, die beim Einschluss und bei jedem Nachsorgebesuch entnommen wurden:

  • Flusszytometrie: Häufigkeit und Eigenschaften von Tregs (CD4+, CD25+, CD127- und FoxP3). Die intrazelluläre Färbung von CTLA-4 wird ebenfalls bewertet.
  • Stimulation mit Interleukin 2 (IL2) zur Untersuchung der Tregs-Antwort (gemessen anhand der Expression von pSTAT5 nach 20 Minuten Stimulation und der anschließenden Produktion von IL10).
  • Autoantikörper-Titer: Antinukleäre Autoantikörper (ANA), Anti-Glatte-Muskel-Antikörper (ASMA), Anti-Leber-Nieren-Mikrosom Typ 1 (Anti-LKM), Anti-lösliches Leber-Antigen (Anti-SLA) und Immunglobuline.

Statistische Analyse: Kategoriale Variablen werden mit Chi- oder Fisher-Tests verglichen. Quantitative Variablen werden mit nichtparametrischen Tests analysiert (Mann-Whitney für unabhängige Stichproben und Wilcoxon für gepaarte Stichproben). Um die Expression von Genen in Blut- und Gewebeproben zu quantifizieren, wird der Ct des Gens mit dem 3 "Housekeeping" (18S, HPRT, GAPDH) normalisiert, um den Delta-Ct zu erzeugen. Die Ergebnisse werden als relative Expression der cDNA der Studie und der kalibrierten Probe ausgedrückt. Unterschiede von

Ehrgeiz: Die Hypothese des Prüfers lautet, dass Patienten mit Typ-1-AIH, die nach Absetzen der Behandlung eine Remission aufrechterhalten können, charakteristische serologische und histologische Biomarker aufweisen werden, was die Identifizierung von Patienten ermöglicht, die von einem zukünftigen Behandlungsabbruch profitieren könnten, um Kosten und Nebenwirkungen zu vermeiden. Gleichzeitig würde es helfen, die Immunpathogenese der AIH zu verstehen und neue therapeutische Angriffspunkte zu identifizieren. Daher ändert sich der natürliche Verlauf dieser Krankheit, wo in den letzten Jahrzehnten auf diesem Gebiet kaum Fortschritte erzielt wurden.