Biomarkører for å forutsi suksessen med immunsuppresjonsuttak ved autoimmun hepatitt

Studiedesign: Dette er en prospektiv ikke kontrollert, ikke randomisert, unsentrisk studie for å etablere prediktive biomarkører for en sikker og effektiv behandlingsseponering hos pasienter med type 1 AIH.

Studiens lengde: Screening forventes å ta et år. Behandlingsseponering vil skje gradvis over en periode på 6 måneder og det vil være en oppfølging på 18 måneder.

Prøvestørrelse: Forekomsten av tilbakefall har vært rundt 36 % i noen studier. Denne raten er imidlertid usikker og avhenger av den studerte populasjonen og oppfølgingen i etterkant. Det er grunnen til at etterforskere har beregnet prøvestørrelsen med konfidensintervallet til denne frekvensen og en 10 % presisjon som var på 87 pasienter. Forventer 10 % av tapene, og den endelige prøvestørrelsen er 96 pasienter.

Pasienter: Etterforskerne vil velge 96 pasienter diagnostisert med type 1 AIH med biokjemisk remisjon på minst 3 år som er under immunsuppressiv behandling fulgt i Hospital Clinic Barcelona. Pasienter med type 2 AIH er ekskludert på grunn av deres påvist høye risiko for residiv. Andre inkluderings- og eksklusjonskriterier er følgende:

Behandlingsavbrudd: IS vil trappes ned gradvis over en periode på 6 måneder. Azatioprin stoppes i løpet av de første 3 månedene, og dosen reduseres med 50 % hver måned. Prednison vil trappes ned 2,5 mg månedlig inntil fullstendig uttak. Ved seponering og det første året etter avsluttet behandling vil pasientene gjennomgå laboratorietester på månedlig basis, etterpå vil det bli gjort oppfølging hver 3. måned frem til prosjektets slutt.

Vedvarende remisjon: Pasienter som etter avsluttet behandling opprettholder ASAT/ALAT under 2 ganger øvre normalgrense.

Residiv: Pasienter som ikke oppfyller tidligere kriterier.

Datainnsamling:

• Demografiske variabler: alder, kjønn, tid fra diagnose til behandlingsavbrudd, laboratorieinformasjon som aminotransferaser, gamma-glutamyltransferase (GGT), alkalisk fosfatase (AP) og autoantistoffer.
• Histologisk prøve ved inklusjonsøyeblikket der følgende analyse vil bli utført: vanlige fargeteknikker for å evaluere tilstedeværelsen av portalbetennelse, grensesnitthepatitt og fibrose. Uttrykk av en gruppe gener involvert i leveravstøtning (CXCL9, CXCL10, FoxP3, TK1, CD74, MMP9) vil bli evaluert med kvantitativ polymerasekjedereaksjon (qPCR) i RNA fra vevsprøvene kryokonservert ved -80ºC. Immunkjemisk farging for å kvantifisere antall lymfocytter CD4+, CD8+ og Tregs.

• Følgende variabler vil bli evaluert i blodprøver samlet ved inkluderingen og i hvert oppfølgingsbesøk:

  • Flukscytometri: Frekvens og egenskaper ved Tregs (CD4+, CD25+, CD127- og FoxP3). Den intracellulære flekken av CTLA-4 vil også bli evaluert.
  • Stimulering med interleukin 2 (IL2) for å studere Tregs-respons (målt ved uttrykket av pSTAT5 etter 20 minutter med stimulering og etterpå produksjon av IL10).
  • Autoantistofftitere: antinukleære autoantistoffer (ANA), anti-glattmuskelantistoff (ASMA), anti-levernyremikrosom type 1 (antiLKM), antioppløselig leverantigen (antiSLA) og immunoglobulinnivåer.

Statistisk analyse: Kategoriske variabler vil bli sammenlignet med Chi- eller Fisher-tester. Kvantitative variabler vil bli analysert med ikke-parametriske tester (Mann-Whitney for uavhengige prøver og Wilcoxon for parede prøver). For å kvantifisere ekspresjonen av gener i blod- og vevsprøver vil Ct til genet normaliseres med 3 "husholdning" (18S, HPRT, GAPDH) for å generere delta Ct. Resultatene vil bli uttrykt som et relativt uttrykk for cDNA fra studien og den kalibrerte prøven. Forskjeller av

Ambisjon: Etterforskerens hypotese er at de pasientene som er rammet av type 1 AIH som er i stand til å opprettholde remisjon etter behandlingsavbrudd, vil uttrykke særegne serologiske og histologiske biomarkører, noe som gjør det mulig å identifisere pasienter som kan ha nytte av å stoppe behandlingen i fremtiden og unngå dens kostnader og bivirkninger. Samtidig vil det hjelpe å forstå immunopatogenesen til AIH og identifiseringen av nye terapeutiske mål. Derfor endrer naturhistorien til denne sykdommen der det har vært lite fremskritt på dette feltet de siste tiårene.