Biomarcadores para predecir el éxito de la retirada de la inmunosupresión en la hepatitis autoinmune

Diseño del estudio: Se trata de un estudio prospectivo, no controlado, no aleatorizado, unicéntrico, para establecer biomarcadores predictivos de retirada segura y eficaz del tratamiento en pacientes con HAI tipo 1.

Duración del estudio: Se espera que la evaluación dure un año. La retirada del tratamiento se hará de forma paulatina durante un periodo de 6 meses y habrá un seguimiento de 18 meses.

Tamaño de la muestra: La tasa de recurrencia ha estado alrededor del 36% en algunos estudios. Sin embargo, esta tasa es incierta y depende de la población estudiada y del seguimiento posterior. Por eso los investigadores han calculado el tamaño de la muestra con el intervalo de confianza de esta tasa y un 10% de precisión que era de 87 pacientes. Esperando un 10% de pérdidas, el tamaño final de la muestra es de 96 pacientes.

Pacientes: Los investigadores seleccionarán 96 pacientes diagnosticados de HAI tipo 1 con remisión bioquímica de al menos 3 años que estén bajo tratamiento inmunosupresor seguido en Hospital Clinic Barcelona. Se excluyen los pacientes con HAI tipo 2 por su alto riesgo comprobado de recurrencia. Otros criterios de inclusión y exclusión son los siguientes:

Retiro del tratamiento: IS se reducirá gradualmente durante un período de 6 meses. Se suspenderá la azatioprina durante los 3 primeros meses, reduciéndose la dosis al 50% cada mes. La prednisona se reducirá en dosis de 2,5 mg mensuales hasta la abstinencia total. Durante el retiro y el primer año después de suspender el tratamiento, los pacientes se someterán a exámenes de laboratorio mensualmente, luego se realizará un seguimiento cada 3 meses hasta el final del proyecto.

Remisión sostenida: Pacientes que tras suspender el tratamiento mantienen AST/ALT por debajo de 2 veces el límite superior normal.

Recurrencia: Pacientes que no cumplen criterios previos.

Recopilación de datos:

• Variables demográficas: edad, sexo, tiempo desde el diagnóstico hasta el retiro del tratamiento, información de laboratorio como aminotransferasas, gamma-glutamil transferasa (GGT), fosfatasa alcalina (FA) y autoanticuerpos.
• Muestra histológica en el momento de la inclusión en la que se realizarán los siguientes análisis: técnicas de tinción habituales para evaluar la presencia de inflamación portal, hepatitis de interfase y fibrosis. Se evaluará la expresión de un grupo de genes implicados en el rechazo hepático (CXCL9, CXCL10, FoxP3, TK1, CD74, MMP9) mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) en el ARN de las muestras de tejido criopreservadas a -80ºC. Tinción inmunoquímica para cuantificar el número de linfocitos CD4+, CD8+ y Tregs.

• En las muestras de sangre recogidas en la inclusión y en cada visita de seguimiento se evaluarán las siguientes variables:

  • Citometría de flujo: Frecuencia y características de Tregs (CD4+, CD25+, CD127- y FoxP3). También se evaluará la tinción intracelular de CTLA-4.
  • Estimulación con interleucina 2 (IL2) para estudiar la respuesta de las Tregs (medida por la expresión de pSTAT5 tras 20 minutos de estimulación y la posterior producción de IL10).
  • Títulos de autoanticuerpos: autoanticuerpos antinucleares (ANA), anticuerpos antimúsculo liso (ASMA), antimicrosoma renal hepático tipo 1 (antiLKM), antígeno hepático antisoluble (antiSLA) y niveles de inmunoglobulinas.

Análisis estadístico: Las variables categóricas se compararán con las pruebas Chi o Fisher. Las variables cuantitativas se analizarán con pruebas no paramétricas (Mann-Whitney para muestras independientes y Wilcoxon para muestras pareadas). Para cuantificar la expresión de genes en muestras de sangre y tejido, el Ct del gen se normalizará con los 3 "housekeeping" (18S, HPRT, GAPDH) para generar el delta Ct. Los resultados se expresarán como una expresión relativa del ADNc del estudio y la muestra calibrada. diferencias de

Ambición: La hipótesis del investigador es que aquellos pacientes afectos de HAI tipo 1 capaces de mantener la remisión tras la retirada del tratamiento expresarán biomarcadores serológicos e histológicos distintivos, posibilitando la identificación de pacientes que podrían beneficiarse de suspender el tratamiento en el futuro evitando sus costes y efectos adversos. Al mismo tiempo, ayudaría a comprender la inmunopatogénesis de la HAI y la identificación de nuevas dianas terapéuticas. Por lo tanto, cambiando la historia natural de esta enfermedad donde ha habido pocos avances en este campo en las últimas décadas.