Biomarcatori per prevedere il successo della sospensione dell'immunosoppressione nell'epatite autoimmune

Disegno dello studio: si tratta di uno studio prospettico non controllato, non randomizzato, unicentrico per stabilire biomarcatori predittivi per una sospensione sicura ed efficace del trattamento nei pazienti con AIH di tipo 1.

Durata dello studio: lo screening dovrebbe richiedere un anno. La sospensione del trattamento avverrà gradualmente per un periodo di 6 mesi e ci sarà un follow-up di 18 mesi.

Dimensione del campione: il tasso di recidiva è stato di circa il 36% in alcuni studi. Tuttavia, questo tasso è incerto e dipende dalla popolazione studiata e dal successivo follow-up. Ecco perché i ricercatori hanno calcolato la dimensione del campione con l'intervallo di confidenza di questo tasso e una precisione del 10% che era di 87 pazienti. Prevedendo il 10% delle perdite, la dimensione finale del campione è di 96 pazienti.

Pazienti: gli investigatori selezioneranno 96 pazienti con diagnosi di AIH di tipo 1 con remissione biochimica di almeno 3 anni che sono sottoposti a trattamento immunosoppressivo seguito presso la clinica ospedaliera di Barcellona. I pazienti con AIH di tipo 2 sono esclusi a causa del loro dimostrato alto rischio di recidiva. Altri criteri di inclusione ed esclusione sono i seguenti:

Interruzione del trattamento: l'IS sarà ridotto gradualmente per un periodo di 6 mesi. L'azatioprina verrà interrotta durante i primi 3 mesi, riducendo la dose del 50% ogni mese. Il prednisone sarà ridotto di 2,5 mg al mese fino al ritiro totale. Durante il ritiro e il primo anno dopo l'interruzione del trattamento i pazienti saranno sottoposti a test di laboratorio su base mensile, successivamente, il follow-up verrà effettuato ogni 3 mesi fino alla fine del progetto.

Remissione sostenuta: pazienti che dopo l'interruzione del trattamento mantengono AST/ALT al di sotto di 2 volte il limite normale superiore.

Recidiva: Pazienti che non soddisfano i criteri precedenti.

Raccolta dati:

• Variabili demografiche: età, sesso, tempo dalla diagnosi alla sospensione del trattamento, informazioni di laboratorio come aminotransferasi, gamma-glutamil transferasi (GGT), fosfatasi alcalina (AP) e autoanticorpi.
• Campione istologico al momento dell'inclusione in cui verranno eseguite le seguenti analisi: tecniche di colorazione usuali per valutare la presenza di infiammazione portale, epatite di interfaccia e fibrosi. L'espressione di un gruppo di geni coinvolti nel rigetto epatico (CXCL9, CXCL10, FoxP3, TK1, CD74, MMP9) sarà valutata mediante reazione quantitativa a catena della polimerasi (qPCR) nell'RNA dei campioni di tessuto crioconservati a -80ºC. Colorazione immunochimica per quantificare il numero di linfociti CD4+, CD8+ e Treg.

• Le seguenti variabili saranno valutate nei campioni di sangue raccolti all'inclusione e in ogni visita di follow-up:

  • Citometria a flusso: frequenza e caratteristiche delle Treg (CD4+, CD25+, CD127- e FoxP3). Verrà valutata anche la colorazione intracellulare di CTLA-4.
  • Stimolazione con interleuchina 2 (IL2) per studiare la risposta Tregs (misurata dall'espressione di pSTAT5 dopo 20 minuti di stimolazione e dalla successiva produzione di IL10).
  • Titoli di autoanticorpi: autoanticorpi antinucleari (ANA), anticorpo anti-muscolo liscio (ASMA), microsoma renale anti-fegato di tipo 1 (antiLKM), antigene epatico antisolubile (antiSLA) e livelli di immunoglobuline.

Analisi statistica: Le variabili categoriche saranno confrontate con i test Chi o Fisher. Le variabili quantitative saranno analizzate con test non parametrici (Mann-Whitney per campioni indipendenti e Wilcoxon per campioni appaiati). Per quantificare l'espressione dei geni nel sangue e nei campioni di tessuto il Ct del gene sarà normalizzato con i 3 "housekeeping" (18S, HPRT, GAPDH) per generare il delta Ct. I risultati saranno espressi come espressione relativa del cDNA dello studio e del campione calibrato. Differenze di

Ambizione: l'ipotesi dello sperimentatore è che quei pazienti affetti da AIH di tipo 1 in grado di mantenere la remissione dopo la sospensione del trattamento esprimeranno biomarcatori sierologici e istologici distintivi, rendendo possibile l'identificazione di pazienti che potrebbero trarre beneficio dall'interruzione del trattamento in futuro evitandone i costi e gli effetti avversi. Allo stesso tempo, aiuterebbe a comprendere l'immunopatogenesi dell'AIH e l'identificazione di nuovi bersagli terapeutici. Pertanto, cambiando la storia naturale di questa malattia dove c'è stato poco progresso in questo campo negli ultimi decenni.