Biomarkery k predikci úspěchu vysazení imunosuprese u autoimunitní hepatitidy

Design studie: Toto je prospektivní nekontrolovaná, nerandomizovaná, unicentrická studie ke stanovení prediktivních biomarkerů pro bezpečné a účinné vysazení léčby u pacientů s AIH 1. typu.

Délka studie: Předpokládá se, že screening bude trvat rok. Ukončení léčby bude probíhat postupně po dobu 6 měsíců a následná kontrola bude trvat 18 měsíců.

Velikost vzorku: Míra recidivy se v některých studiích pohybovala kolem 36 %. Tato míra je však nejistá a závisí na studované populaci a následném sledování. To je důvod, proč vyšetřovatelé vypočítali velikost vzorku s intervalem spolehlivosti této frekvence a 10% přesností, což bylo 87 pacientů. Při očekávání 10 % ztrát je konečná velikost vzorku 96 pacientů.

Pacienti: Vyšetřovatelé vyberou 96 pacientů s diagnózou AIH typu 1 s biochemickou remisí po dobu nejméně 3 let, kteří jsou pod imunosupresivní léčbou sledovanou na nemocniční klinice Barcelona. Pacienti s AIH typu 2 jsou vyloučeni z důvodu prokázaného vysokého rizika recidivy. Další kritéria pro zařazení a vyloučení jsou následující:

Vysazení léčby: IS bude postupně snižován po dobu 6 měsíců. Azathioprin bude vysazen během prvních 3 měsíců, přičemž dávka se bude každý měsíc snižovat o 50 %. Prednison bude snižován o 2,5 mg měsíčně až do úplného vysazení. Během vysazení a první rok po ukončení léčby budou pacienti podstupovat laboratorní testy na měsíční bázi, poté bude následná kontrola prováděna každé 3 měsíce až do konce projektu.

Setrvalá remise: Pacienti, kteří po ukončení léčby udržují AST/ALT pod 2násobkem horní normální hranice.

Recidiva: Pacienti, kteří nesplňují předchozí kritéria.

Sběr dat:

• Demografické proměnné: věk, pohlaví, doba od diagnózy do vysazení léčby, laboratorní informace, jako jsou aminotransferázy, gama-glutamyltransferáza (GGT), alkalická fosfatáza (AP) a autoprotilátky.
• Histologický vzorek v okamžiku zařazení, ve kterém bude provedena následující analýza: obvyklé techniky barvení k hodnocení přítomnosti portálního zánětu, hepatitidy na rozhraní a fibrózy. Exprese skupiny genů zapojených do jaterní rejekce (CXCL9, CXCL10, FoxP3, TK1, CD74, MMP9) bude hodnocena pomocí kvantitativní polymerázové řetězové reakce (qPCR) v RNA vzorků tkáně kryokonzervovaných při -80ºC. Imunochemické barvení ke kvantifikaci počtu lymfocytů CD4+, CD8+ a Tregs.

• Ve vzorcích krve odebraných při zařazení a při každé následné návštěvě budou hodnoceny následující proměnné:

  • Fluxová cytometrie: Frekvence a charakteristiky Tregs (CD4+, CD25+, CD127- a FoxP3). Rovněž bude hodnoceno intracelulární barvení CTLA-4.
  • Stimulace interleukinem 2 (IL2) pro studium odpovědi Tregs (měřeno expresí pSTAT5 po 20 minutách stimulace a následnou produkcí IL10).
  • Titry autoprotilátek: antinukleární autoprotilátky (ANA), protilátky proti hladkému svalstvu (ASMA), anti-jaterní ledvinový mikrozom typu 1 (antiLKM), anti-rozpustný jaterní antigen (antiSLA) a hladiny imunoglobulinů.

Statistická analýza: Kategorické proměnné budou porovnány s Chi nebo Fisherovým testem. Kvantitativní proměnné budou analyzovány neparametrickými testy (Mann-Whitney pro nezávislé vzorky a Wilcoxon pro párové vzorky). Pro kvantifikaci exprese genů ve vzorku krve a tkáně bude Ct genu normalizována pomocí 3 "housekeeping" (18S, HPRT, GAPDH), aby se vytvořil delta Ct. Výsledky budou vyjádřeny jako relativní exprese cDNA studie a kalibrovaného vzorku. Rozdíly v

Ambice: Hypotézou výzkumníka je, že pacienti postižení AIH typu 1, kteří si po vysazení léčby udrží remisi, budou vykazovat výrazné sérologické a histologické biomarkery, což umožní identifikaci pacientů, kteří by mohli mít prospěch z ukončení léčby v budoucnu a vyhnout se jejím nákladům a nežádoucím účinkům. Zároveň by to pomohlo pochopit imunopatogenezi AIH a identifikaci nových terapeutických cílů. Proto se mění přirozená historie tohoto onemocnění tam, kde v posledních desetiletích došlo v této oblasti k malému pokroku.