중증 천식에서 메폴리주맙의 효능(MESILICO) (MESILICO)

과학적 근거 인터루킨(IL)-5는 호산구의 활성화를 담당하는 주요 사이토카인이므로 임상적 사용을 위해 치료 전략이 조사되고 개발되었습니다. IL-5 및 그 수용체를 표적으로 하는 생물학적 제제(처음에는 메폴리주맙에 이어 레슬리주맙 및 벤랄리주맙)는 최근 승인되었으며 순환 호산구 수 감소, 폐 기능 개선 및 악화를 초래하는 중증 호산구성 천식에 대한 추가 요법으로 사용되었습니다. 중증 천식 환자 감소.

중증 천식에서 생물학적 요법에 대한 반응은 가변적이며, 환자는 비반응자, 반응자 또는 초반응자입니다. 현재 응답의 이러한 광범위한 변화에 대한 설명은 없습니다. 이러한 환자들이 임상에서 올바른 진단을 내리는 데 도움이 될 수 있는 뚜렷한 특성을 가지고 있는지 조사하는 것이 중요합니다.

본 임상 연구의 목적은 고정성 폐색을 동반한 후발성 중증 호산구성 천식 환자에서 인간화 IL-5 길항제 단일클론 항체인 메폴리주맙의 효능을 평가하고, 메폴리주맙 치료 시 무반응자와 초반응자의 특성을 확인하는 것이다. 이 연구는 비중재적 연구로 간주되며 포함된 모든 절차는 천식 환자의 진단 및 표현형 분석을 위한 일상적인 임상에서 발생합니다.

기도 염증을 조사하기 위해 여러 가지 방법이 사용됩니다: 직접 측정(기관지 생검 또는 기관지 폐포 세척과 같은) 및 간접 방법(증상 평가, 혈액 샘플 분석 및 폐 기능 검사와 같은). 직접적인 기법은 기도 염증을 안정적으로 평가할 수 있다는 장점이 있지만 침습적이며 환자의 불편함과 발생할 위험 때문에 대규모로 실행하기 어렵습니다. 간접 방법은 기도 염증의 직접 평가와 관련성이 낮습니다.

본 연구에서는 환자의 임상적 특징 폐활량계 중 기관지경을 통한 염증 바이오마커(혈액 호산구, FeNO, IgE 수치), 임펄스 오실로메트리(IOS) 및 기저막 비후를 평가하고자 한다. 일반적인 치료(ICS/LABA/LAMA)에 반응하지 않는 고정성 폐색을 동반한 후기 발병 중증 호산구성 천식 환자는 증가된 평활근 질량으로 나타납니다. 그러나 기도 협착에 대한 기도 평활근 질량 증가의 정확한 영향은 알려져 있지 않으며 질병의 중증도에 따라 다를 수 있습니다. 또한, 생물학적 체액(혈청, 객담, 객담 상청액 및 기관지 샘플)에서 52주 메폴리주맙 치료 전과 후에 염증의 바이오마커도 평가될 것입니다. 염증의 바이오마커는 비반응자에 대한 반응자를 식별하는 데 매우 중요합니다.

보다 구체적으로, IOS는 천식에 대한 특정 적용으로 폐 기능을 평가하는 대체 기술로 도입되었습니다. 이 기술은 비침습적이며 호기 호흡 중에 쉽게 수행할 수 있으며 최소한의 환자 협조만 필요합니다.

가래 수집은 기도에서 세포를 샘플링하는 또 다른 방법이며 기도 염증을 직접 평가할 수 있습니다. 또한, 가래 상청액을 사용한 예에는 매개체 분석 및 호산구에 대한 샘플의 화학주성 활성 평가가 포함됩니다. 가래 세포는 또한 무엇보다도 면역 표현형 분석 및 세포 분류를 허용하는 유동 세포 계측법으로 분석할 수 있습니다. 또한, 가래 세포를 배양할 수 있으며, 이들의 매개체 생산을 시험관 내에서 측정할 수 있습니다. 이 경우 매개체 함량이 가래 상청액에서 발견되는 것과 다르다는 점은 주목할 가치가 있습니다. 실제로, 객담 상청액의 매개체는 객담 세포 배양 모델과 달리 기도 상주 세포의 분비물 및 혈장 삼출물에 의해 영향을 받을 수 있습니다. 마지막으로, 가래 세포를 사용하여 면역세포화학 및 제자리 혼성화를 수행할 수도 있습니다.

표현형, 혈액 호산구 및 혈청 IgE 수치가 참조로 사용되도록 제안되었지만 이전 연구에서 확인된 바와 같이 혈액 면역 세포 수치와 기도 상피 면역 반응 사이에는 해리가 있습니다. 표적 면역 세포에 대한 기도 상피 면역조직화학 염색은 다양한 유형의 기도 염증을 결정하는 데 사용되었습니다. 그러나이 기술은 임상 환경에서 거의 사용되지 않습니다. 이전 연구에서 중증 천식 환자에 대한 기관지경 생검 수행의 상대적 안전성이 밝혀졌습니다. 비강 생검, 비강 또는 기관지 칫솔질, 기관지 폐포 세척을 포함한 조직 진단에 사용되는 샘플링 기술 중에서 기관지경 안내 기관지 상피 샘플링은 조직 맥락에서 상피 및 염증 세포에 대한 보다 정확한 정보를 제공합니다. 따라서 어려운 임상 조건에서 가장 적합한 생물학적 제제를 선택하기 위한 강력한 도구입니다.

게다가, 천식 질환은 오늘날 "기관지 리모델링"으로 알려진 기관지 벽의 돌이킬 수 없는 변화를 초래하는 만성 점막 염증 과정을 특징으로 합니다. 선 및 평활근 섬유 과형성 및/또는 비대, 술잔 세포 과형성 및 호흡기 상피 아래에 존재하는 기저막(BM)의 다양한 비후는 이러한 형태학적 변화의 일부입니다. 상피-연결 인터페이스에서 생성된 변화는 염증 스트레스 및 산발성 기관지 수축에 대한 "적응 반응"을 설명합니다. 그러나 천식 환자의 BM 반응성에 대한 현재 데이터는 주로 lamina reticularis의 콜라겐 침착이 질병 중증도와 관련이 없기 때문에 병인, 특히 기관지 벽 리모델링에 대한 정확한 평가를 위해 여전히 불완전합니다.

더욱이, 천식 환자에게서 나타나는 다양한 임상 양상, 생리학적 특성 및 결과에 의해 입증되는 바와 같이, 중증 천식은 단일 질병이 아니라는 것이 점차 분명해지고 있습니다. 이러한 이질성을 더 잘 이해하기 위해 천식 표현형 및 엔도타이핑의 개념이 등장했습니다. Phenotyping은 치료 개선을 목표로 분자, 세포, 형태 및 기능에서 환자 중심 특성에 이르기까지 생물학적 및 임상적 특징을 모두 통합합니다. 궁극적으로 이러한 표현형은 임상적 특징과 식별 가능한 기계 경로를 결합한 천식 "엔도타입"으로 진화합니다. 객관적으로 측정될 수 있고 기본 생물학적 과정 또는 병인의 지표 역할을 하는 특성으로 정의되는 바이오마커는 표현형 및 엔도타입을 정의하는 데 중요합니다. 천식에서 유전적 다형성, 기도 생리학의 측정, 소변, 혈액, 가래, 조직, 호기 가스 및 호흡 응축물의 염증 매개체 수준은 모두 천식 진단 및 관리를 개선하고 객관화하기 위한 잠재적 마커로 연구되었습니다. 이러한 도구를 개발하면 특정 바이오마커 프로필을 기반으로 치료법을 맞춤화한다는 궁극적인 목표를 가지고 천식에 설명된 다양한 임상 패턴을 표현형 및 엔도타입화할 수 있습니다. 그런 다음 바이오마커를 사용하여 개입에 대한 약리학적 반응을 더 잘 이해하고 그에 따라 치료를 조정할 수 있습니다.

바이오마커는 중증 천식의 질병 병인 연구 및 새로운 치료법 개발에 매우 ​​중요합니다. 특히, 2형 염증의 바이오마커는 새로운 생물학적 작용제를 엔도타이핑하고 표적화하는 데 가치가 있는 것으로 입증되었습니다. 2형 염증을 이해하고 표시하는 이러한 성공으로 인해 천식의 비 2형 염증 메커니즘에 대한 지식 부족은 곧 중증 천식의 새로운 치료법 및 관리 전략 개발에 주요 장애물이 될 것입니다. 다른 잠재적인 바이오마커에는 선천성 림프구 세포, IL-33 또는 흉선 간질 림포포이에틴이 포함됩니다.

최근 간행물은 천식의 병리 메커니즘에서 miRNA의 중요한 규제 역할을 확인했습니다. 일부 단일 miRNA 또는 그 세트는 치료 결과의 진단 또는 예측을 용이하게 하는 천식 바이오마커로 사용할 가능성이 있습니다. 그들은 또한 미래 치료법의 가능한 대상입니다. 하지만 이 분야에 대한 연구는 부족하다. 최근에는 대부분의 관련 miRNA가 Th2 사이토카인의 분비를 증가시키고, Th1 사이토카인의 분비를 감소시키며, T 세포의 Th2로의 분화를 촉진하거나 기관지 평활근 세포의 증식 및 비대에 역할을 한다는 것이 밝혀졌습니다. miRNA의 프로필은 폐 기능, 표현형 및 천식의 중증도를 포함한 임상 특성과 관련이 있습니다.

대부분의 업계 후원 생물학적 임상 시험은 SARP(고강도 조절 약물 요법, 빈번한 악화 및 낮은 폐 기능)의 중증 천식 임상 표현형과 유사한 연구 대상을 선택하여 위의 접근 방식을 효과적으로 사용했지만 높은 바이오마커(in 혈액, 호기 가스 또는 객담) 임상 표현형 내에서 특정 면역 조절제에 반응할 가능성이 가장 높은 환자를 식별해야 합니다. 최근 발표된 임상 시험의 생물학적 제제는 2형 염증 경로를 표적으로 하고 2형 바이오마커(혈액 또는 가래 호산구 또는 FeNO)가 상승한 피험자에 대한 참여를 제한합니다. 어떤 환자가 생물학적 면역조절제로부터 가장 큰 혜택을 받는지 더 잘 이해하기 위해 "그룹" 바이오마커에 대한 사후 반응자 분석은 1개 이상의 유형 2 염증성 바이오마커에서 동시 상승이 "고반응자" 환자를 추가로 식별할 수 있다는 이해로 이어질 것입니다.

가설에는 고정 폐색이 있고 임상 및 염증 바이오마커와의 관계가 있는 후기 발병 중증 호산구성 천식 환자에서 메폴리주맙 치료의 효능이 포함됩니다.

연구 질문 후기 발병 중증 호산구성 천식 환자에서 mepolizumab 치료 1년차 치료 시 악화율이 개선되었으며 무반응자와 초반응자의 특징은 무엇인가? 평활근 세포 리모델링에 개선이 있습니까? 후기 발병 중증 호산구성 천식 환자에서 메폴리주맙 치료에 대한 반응을 예측하는 바이오마커가 있습니까? 호흡 매개변수에 개선이 있습니까? 천식 조절과 환자의 삶의 질에 개선이 있습니까? 목표

이 연구의 주요 목적은 다음과 같습니다.

1. 고정 폐색이 있는 후기 발병 중증 호산구성 천식 환자의 악화율에 대한 메폴리주맙 치료의 효과를 입증합니다.
2. 비반응자와 슈퍼반응자의 특성을 식별합니다.

이 연구의 주요 2차 목표는 다음과 같습니다.

1. 리모델링의 모든 개선(기관지 평활근 세포의 비후).
2. 가능한 모든 반응 바이오마커.
3. 고정 폐색이 있는 후기 발병 중증 호산구성 천식 환자에서 메폴리주맙 치료 동안 천식 조절 및 환자의 삶의 질에서 호흡 매개변수의 개선.

연구 설계 및 방법 환자는 그리스 인구를 포함하는 각 사이트(8명)의 기관지 천식 외래 환자 클리닉에서 수집됩니다. 이러한 모든 클리닉은 모집을 강화하고 국제적인 영향을 미치는 기관지경 전문의를 포함하기 위해 포함되었습니다. Covid-19 전염병과 관련된 현재 상황으로 인해 조사관은 이 임상 연구가 우리 클리닉의 업무량을 방해하지 않는다고 가정합니다.

전반적으로 이것은 8개의 폐 클리닉을 포함하는 전향적 다기관 연구입니다. 5개의 폐 대학 클리닉, 2개의 National Health System 및 1개의 육군 종합 병원.

이 연구에는 적격성을 평가하고 사전 서면 동의를 얻기 위한 최대 2주의 스크리닝 기간, 52주의 메폴리주맙 치료 기간, 4주마다 1회, 치료 중 3개월마다 후속 방문이 포함됩니다.

연구 모집단은 20세 이상의 메폴리주맙을 투여받는 후기 발병 중증 호산구성 천식 및 고정성 폐색 환자 45명으로 구성됩니다.

연구 참여, 평가 및 후속 조치:

스크리닝: 조사관은 참여한 클리닉(중증 천식 외래 환자 클리닉)에 선택된 피험자를 스크리닝합니다. 주제는 동의에 서명하기 위해 올 것입니다. 임상 평가 및 절차와 구조적 인터뷰는 스크리닝 중에 수행됩니다. 스크리닝 방문을 완료할 자격이 있는/가능한 피험자는 같은 날 그렇게 할 수 있으며 필요한 경우 2주 이내에 기본 평가를 완료합니다. 진행 중인 천식 악화가 있는 피험자는 조사자가 피험자가 기본 천식 상태로 돌아갔다고 생각할 때까지 스크리닝 및 치료 시작 방문을 연기해야 ​​합니다. 2주간의 스크리닝 기간이 경과한 경우, 피험자는 스크리닝 실패로 간주되어야 합니다. 피험자는 스크리닝 기간 내내 현재 유지 요법을 계속 받게 됩니다. 환자의 적격성은 다음 섹션에 나열된 기준을 기반으로 합니다.

지난 12개월 동안의 천식 악화 이력은 스크리닝 방문 시 보고됩니다. 또한, 악화는 보고된 바와 같이 각 방문에서 평가될 것이다.

바이탈 사인은 스크리닝 방문 시, 베이스라인 시 및 3개월마다 수행됩니다. 측정에는 수축기 및 이완기 혈압, 맥박수 및 체온이 포함됩니다.

신장(센티미터) 및 체중(kg)은 스크리닝 방문 시 측정됩니다. 체질량 지수(BMI)는 kg 단위의 체중을 미터 단위의 키의 제곱으로 나눈 값으로 계산됩니다.

실험실 평가(혈액학, 혈액 화학, 소변 검사):

정맥혈과 소변은 기준선에서 수집됩니다. 혈액학: 헤모글로빈, 헤마토크리트, 적혈구수, 백혈구수 감별, 혈소판은 각 현장 병원의 검사실에서 측정합니다. 기본 임상 화학 및 소변 검사가 평가됩니다. 여성 피험자에 대한 소변 수집도 임신을 평가합니다.

IgE 수준은 면역 CAP 테스트를 사용하여 스크리닝 방문 시 평가되며 IU/mL로 보고됩니다.

다음 설문지가 시행됩니다. 1) 현재 천식 조절을 평가하기 위한 천식 조절 설문지(ACQ-5) 및 천식 조절 테스트(ACT) 2) 삶의 질과 심리적 이환율을 평가하기 위한 천식 삶의 질 설문지(AQLQ+12). 수면의 질을 추가로 평가하기 위해 1) AIS(Athens Insomnia Scale), 2) Epworth Sleepiness Scale(ESS), 3) St. George's Respiratory Questionnaire(SGRQ) 및 4) WHO(Five) Well-Being Index(WHO-5), 5) 피로 심각도 척도(FSS).

호기된 산화질소(NO)는 미국 흉부 학회 지침 및 제조업체에서 지정한 대로 기준선 및 3개월마다 측정됩니다. FeNO 수준은 10억분의 1로 보고됩니다. 폐활량 측정을 수행하기 전에 측정이 이루어집니다.

정맥혈 샘플은 기준선에서 오전 8시에서 10시 사이에 그리고 메폴리주맙 치료로 52주 기간 동안 3개월마다 검색됩니다. 절대 혈중 호산구 수는 세포/μl로 보고됩니다.

폐활량 측정: 폐활량 측정 A는 방문 시 현장 자체 장비를 사용하여 수행됩니다(기준선 및 3개월마다). 모든 진료소 방문은 아침에 이루어져야 합니다. 치료 기간 동안 폐활량계는 현재 ATS/ERS 지침을 충족하고 폐활량계는 생성된 모든 데이터의 출력물을 생성해야 하며 이는 피험자의 메모에 저장되어야 합니다. 폐활량계는 제조업체의 지침에 따라 보정됩니다. 폐활량 측정은 방문 0 폐활량 측정과 동시에(±1시간) 수행되어야 합니다. 피험자는 가능한 경우 임상 방문 전 4시간 이상 동안 속효성 베타-2 작용제(SABA)를 중단하고 15시간 이상 동안 LABA를 중단하도록 노력해야 합니다(GINA 2019). 기록할 평가에는 FEV1, FVC, FEV1/FVC%, PEF 및 FEF25-75가 포함됩니다. 기관지확장제 후 측정은 200-400mcg 알부테롤 또는 이와 동등한 것을 사용하여 방문할 때마다 수행됩니다.

폐활량계 B는 방문 시 현장 자체 장비를 사용하여 수행될 것입니다(기준선, 6개월 후 및 52주 시점에서 치료 후). Spirometry B에는 확산, 폐 부피 및 용량이 포함됩니다.

임펄스 오실로메트리(옵션):

IOS(Impulse Osillometry)는 기준선과 치료 52주 후에 수행됩니다. IOS에는 5Hz에서의 저항, 20Hz에서의 저항(R5-R20), 중소형 전도 및 말초 기도의 호흡 저항을 반영하는 측정값, AX, 말초 폐(즉 실질 및 소말초 기도)의 확장성을 반영하는 측정값이 포함됩니다. , 및 호흡 시스템 리액턴스(X5), 관성 및 탄성 또는 커패시턴스(소형 주변 기도 포함)를 반영하는 척도.

생물학적 제제를 사용한 치료:

스크리닝 방문이 완료되면 참가자는 한 달 이내에 생물학적 요법(메폴리주맙)으로 치료를 시작할 수 있습니다. 치료 기간 동안 피험자는 연구에 참여하기 위해 연구 그룹에 그들을 추천한 폐전문의의 관리를 받게 됩니다. 이러한 폐학자는 '관련 폐학자'로 불립니다. 제품 제조업체 지침에 따라 치료가 제공됩니다.

연구 중에 생물학적 치료를 제공하는 동료 폐학자는 프로토콜에 따라 연구를 수행하고, 자신이 의료 행위 및 연구 수행에 대한 책임이 있음을 인정하고, 동료(및 동료 및 직원)은 연구 수행을 지원하며 그들의 의무에 대해 알립니다. 부교수가 연구 기간 동안 연구 그룹의 적절한 정보와 지원을 받을 수 있도록 메커니즘이 마련될 것입니다.

생물학적 요법 중 후속 조치: 생물학적 요법을 시작하고 방문할 때마다 부폐과 전문의가 정보 수집을 수행하고, 부폐과 전문의가 요청하는 경우 연구 그룹의 지원(예: 연구원이 전화 또는 대면을 통해)을 수행합니다. 얼굴 접촉은 환자를 인터뷰합니다. 또한 준수 여부는 환자의 구두 확인을 기반으로 의사로부터 기록됩니다. 약물 투여 날짜 형태는 매 방문시마다 기록될 뿐만 아니라 즉시 및 지연된 부작용을 기록할 것입니다.

안전 모니터링:

기록된 부작용(AE)은 연구 보고서에서 필요에 따라 모니터링되고 대조될 것입니다. 부작용은 연구 등록을 시작한 후 발생하는 바람직하지 않은 징후, 증상 또는 의학적 상태가 나타나거나 악화되는 것입니다. 연구 약물을 시작하기 전에 존재하는 의학적 상태/질병은 연구 약물을 시작한 후에 악화되는 경우에만 부작용으로 간주됩니다. 비정상적인 실험실 값 또는 검사 결과가 임상 징후 또는 증상을 유발하거나 임상적으로 중요하다고 간주되거나 치료가 필요한 경우에만 유해 사례로 간주됩니다. 또한 Covid-19와 관련된 부작용이 포함됩니다. 파트너 호흡기 전문의 또는 연구 직원이 제품과 관련된 AE를 알게 된 경우 자발적 AE 보고에 대한 현지 표준 관행에 따라 제조업체에 보고할 수 있습니다. 보고서 사본도 연구 코디네이터에게 보내야 합니다. 심각한 부작용(SAE)은 eCRF 페이지에 보고되며 24시간 이내에 모든 조사관은 테살로니키의 중앙 위원회에 알릴 책임이 있습니다. 그런 다음 중앙위원회는 과학위원회와 그리스 의료 기관에 알릴 것입니다. 또한 피험자의 치료 중단 여부를 결정함에 있어 중앙위원회와 함께 각 센터의 수석 조사관이 의학적 및 과학적 판단을 내릴 것입니다.

임신 보고서:

처음에 선별검사에서 여성 환자는 임신 테스트를 해야 합니다. 치료 중 여성 피험자가 임신을 보고하면 편견을 방지하기 위해 연구를 중단하라는 요청을 받게 됩니다. 각 센터의 외래진료소.

사전 선별 및 선별 실패:

동의서에 서명할 때 피험자에게 연구 번호가 지정됩니다. 서명했지만 스크리닝 방문 평가로 진행되지 않은 피험자는 사전 스크리닝 실패로 간주됩니다. 이러한 주제에 대한 데이터는 데이터베이스에 캡처되지 않습니다.

두 번의 스크리닝 방문 중 적어도 하나를 완료했지만 생물학적 요법을 시작하지 않은 피험자는 스크리닝 실패로 지정됩니다. 사전 심사 및 심사 불합격 시 수집되는 정보는 데이터베이스 완성 시 자세히 안내될 예정입니다.

철수 방문:

참가자가 후속 조치 중에 연구에서 탈퇴하기로 결정하는 경우(추적 손실 이외의 이유로), 철회 방문에 참석하도록 요청받을 수 있습니다(조사자가 필요하다고 간주하고 동의하는 경우). 방문하는 동안 참가자는 천식 및 비강 증상, 악화 및 치료 진행 상황과 같은 임상 정보 수집의 일환으로 현재 상태에 대해 질문을 받을 수 있습니다.

혈액 샘플 수집 및 처리:

기준선 방문 시, 6개월 후 및 치료 완료 후 혈액 샘플을 수집합니다. 혈액 샘플을 수집한 후 완전한 응고 형성을 위해 약 30분 동안 방해받지 않고 그대로 둡니다. 그런 다음 샘플을 원심분리하여 혈전에서 혈청을 분리합니다. 원심분리 후 혈청은 분석이 완료될 때까지 -20°C에서 에펜도르프 튜브에 보관됩니다. 혈액 표현형은 또한 유동 세포측정법에 의해 평가될 것입니다.

유도 가래(선택 사항):

유도 객담은 유도 객담 처리에 대한 자세한 전문가 합의 기반 권장 사항이 제안된 ERS 태스크 포스 보고서에 따라 치료 시작 전과 치료 완료 후에 기준선에서 수행됩니다.

방문 시 일상적인 폐활량 측정 평가가 완료된 후 객담 유도가 수행됩니다.

유도 가래는 연구 현장에서 유도 절차 종료 후 2시간 이내에 처리됩니다. 객담 세포 및 세포 현탁액 상청액은 분석을 위해 -80ºC에서 보관됩니다. 유도된 가래를 채취한 후 샘플의 상등액은 분석이 완료될 때까지 -20°C 에펜도르프 튜브에 보관합니다. 이러한 절차에 따라 지침에 따라 가래에 대한 검사실 평가가 이어집니다.

기관지경 검사, 기관지 생검 및 세척 샘플 수집 및 처리(선택 사항): 방문 시 기관지 생검을 통한 내시경 검사, 기관지 세척 샘플(Visit 0b)은 환자의 서면 동의에 따라 수행됩니다. 구체적으로, 각 환자가 서명할 별도의 사전 동의가 포함될 것입니다. 기관지경 검사는 두 시점(치료 시작 전 및 치료 완료 후 기준선)에서 수행됩니다. 굴곡성 기관지경 검사 및 진단 기술은 미국 흉부 학회와 영국 흉부 학회에서 권장하는 모니터링된 마취 관리 하에 수행되었습니다.

조직 샘플은 포름알데히드 또는 글루타르알데히드를 사용하여 인플레이션 또는 침지에 고정되고 파라핀에 포매됩니다. 병리학자의 재량에 따라 진단 해부 중에 기도를 체계적으로 샘플링하거나 확보합니다. 0.5, 5 및 30 μm 두께의 연속 절편을 각 블록에서 잘라내어 Masson's trichrome 기법, 각각 haematoxylin 및 eosin, haematoxylin을 사용하여 염색했습니다. 면역조직화학적 염색은 다음 mAb로 수행될 것입니다: 항비만세포 트립타제 클론 AA1(Dako UK), 항알파 평활근 액틴 클론 1A4(Dako UK), 항호산구 주요 염기성 단백질 클론 BMK-13(Monosan, 네덜란드) ), 항호중구 엘라스타제 클론 NP57(Dako UK) 및 항내피 클론 EN4(Monosan, 네덜란드) 또는 적절한 아이소타입 대조군을 사용하였다.

기관지내 생검은 임상적 특징을 알지 못하는 단일 관찰자(광현미경용 ZEN 2012 이미지 분석 소프트웨어, 독일 Carl Zeiss AG)에 의해 평가될 것이며, 최소 두 섹션 또는 독립적인 섹션에서 수행된 측정의 평균으로 표현됩니다. 생검 또는 동일한 생검에서 최소 20μm 떨어진 비연속 조직 절편으로. 온전하고 벗겨진 상피의 길이를 측정하여 상피 무결성을 평가합니다. 이들은 모든 망상 기저막(RBM) 길이의 백분율로 표시됩니다. 혈관 밀도는 혈관 밀도와 혈관 면적 모두의 대용인 Chalkley 계수를 사용하여 측정됩니다. Chalkley 접안 눈금선(NG52 Chalkley Point Array, Pyser-SGI Ltd, UK)을 x200에서 사용하여 겹치지 않는 4개의 혈관 핫스팟(6)에서 Chalkley 수를 측정합니다. 기도 평활근 함량은 전체 면적의 비율로 결정됩니다. 염증 세포는 유핵 세포의 수/고유층의 면적으로 표현하였다.

기관지 세척 샘플은 즉시 실험실로 이송되어 -80도에서 보관됩니다. 기관지 세척액의 검사는 여러 바이오마커를 결정하기 위해 나중 단계에서 수행됩니다.

FACS(Flow Cytometry Analysis) 또는 ELIZA를 사용한 염증 바이오마커 분석:

2개 또는 3개의 시점에서 메폴리주맙으로 치료 전후에 포함된 바이오마커(기준선, 치료 6개월 및 치료 완료 방문 후): 림프구 하위 집합, Th2/Th17 사이토카인, 케모카인, 유세포 분석 또는 ELISA로 정량화되는 마이크로RNA 발현) 생물학적 체액(혈액, 혈청, 기관지 세척액, 객담 및 객담 상층액).

패널 키트 및 적절한 항체는 제조업체의 권장 사항 및 지침에 따라 BD FACS Calibur 시스템(BD Biosciences, San Jose, CA)을 사용하여 유세포 분석기로 테스트합니다.

ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)는 펩타이드, 단백질, 항체 및 호르몬과 같은 물질을 검출하고 정량화하기 위해 고안된 플레이트 기반 분석 기술입니다. ELISA 키트는 제조업체의 권장 사항 및 지침에 따라 VICTOR X3 분광 광도계를 사용하여 분석됩니다.

알레르기 검사(해당되는 경우) 환자의 아토피 상태는 다양한 일반적인 흡입 알레르겐에 대한 총 IgE 항체를 검출하기 위한 표준 에어로알레르겐 패널에 대한 피부단자검사(SPT)에 의한 스크리닝 방문 시 평가됩니다(이용할 수 없는 경우).

데이터베이스 전자 데이터 수집 플랫폼은 이 데이터베이스에 대한 1년 후속 조치까지 3개월마다 기본적으로 사용되는 방법입니다. 치료 방문 중 종이 양식/설문지는 동료 폐전문의가 작성합니다. 각 사이트는 전자 데이터베이스에 특정 데이터를 입력합니다. 각 환자는 담당 모니터링 사이트에서 할당한 사이트 번호와 조사자가 할당한 일련 번호로 구성되는 피험자 번호로 고유하게 식별됩니다. 정보에 입각한 동의서에 서명하면 환자는 조사관에 의해 다음 일련 번호가 지정됩니다. 사이트는 중앙 연구 인력에게 연락하여 전자 데이터베이스에 등록된 환자에 대해 요청된 식별 정보를 제공해야 합니다. 치료 방문 양식은 중앙 연구 인력에게도 발송됩니다. 승인된 연구 담당자는 데이터 수집, 편집 및 자신의 사이트에서 수집되는 데이터 보호를 담당하며 데이터베이스는 매일 백업됩니다. 품질 검토/제어는 관련된 모든 개인과 중앙 연구 인력[데이터 관리자]의 공동 책임입니다.

샘플 크기 계산 G 파워 분석 샘플 크기는 G*Power 소프트웨어(Die Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf, Germany)를 사용하여 계산됩니다. 후기 발병 중증 호산구성 천식 환자의 메폴리주맙 치료 전과 후의 연간 악화율의 차이가 연구의 1차 평가변수입니다. DREAM 연구(지금까지 우리의 1차 평가변수와 유사한 결과를 보고한 유일한 두 연구 중 하나)에서 중증 천식 환자의 연간 악화율이 메폴리주맙 치료 시작 후 3.6에서 1.33으로 감소한 것으로 보고되었습니다. 이 데이터와 검정력이 0.95이고 통계적 유의 수준이 0.05인 양면 테스트를 사용하여 연구자는 효과 크기를 0.556으로 계산했으며, 이는 총 표본 크기가 45명임을 나타냅니다.

통계 계획 분석 통계 분석은 SPSS(버전 21.0 IBM SPSS 통계 소프트웨어, Armonk, NY, USA)를 사용하여 수행됩니다. 범주형 변수는 숫자(n) 및 백분율(%)로, 연속 변수는 정규 분포인 경우 평균 ± SD로, 그렇지 않은 경우 중앙값 및 사분위수 범위로 표시됩니다. 정규 분포가 없는 필요한 변수는 변환됩니다. P < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 인정되었습니다. 비모수 변수와 모수 변수를 분리하기 위해 Shapiro-Wilk 테스트를 수행합니다. 파라메트릭에 대한 쌍표본 T 테스트 또는 비모수 변수에 대한 Wilcoxon Signed Ranks 테스트를 사용하여 Mepolizumab 치료 전후에 측정된 변수의 차이를 탐지합니다.

모든 환자가 자신을 제어하므로 비교기 암이 없습니다. 기준선에서, 매 3개월마다 그리고 52주 치료 완료 후에 측정될 기준선 특성(임상 및 실험실 바이오마커)이 있습니다. 연구 종점에는 비반응자와 슈퍼반응자의 특성을 식별하는 모든 바이오마커의 분석이 포함됩니다. 또한, 2차 종점에는 방법에서 평가로서 언급된 바이오마커의 평가가 포함됩니다. 52주의 치료 기간을 완료한 환자의 수로 처음에 통계 분석을 수행할 것입니다. 둘째, 52주 치료를 완료하지 않은 환자를 별도로 분석하고 마지막으로 이 두 그룹을 서로 비교합니다.

보다 구체적으로, 단변량 분석(양측 독립 표본 검사)을 통해 조사관은 메폴리주맙 치료 후(치료 1년까지 3개월마다) 모든 기본 결과와 비교하여 모든 기본 결과 간의 연관성/상관성을 테스트합니다. 가래 및 혈액의 바이오마커 , 임상 결과. 유사하게, 결과와 개인/인구학적 특성 사이의 단변량 연관성은 잠재적 교란 요인을 식별하기 위해 테스트됩니다. 그런 다음 조정된 회귀 모델을 사용하여 중요한 연관성을 테스트합니다. 연관성/상관관계는 베이스라인 임상 특성 및 치료 중 매 3개월마다, 베이스라인 및 메폴리주맙 치료 1년 후에 개별적으로 평가될 것이다. 또한 치료 반응에 대한 바이오마커 수준을 식별하기 위해 각 바이오마커에 대해 하위군 분석을 수행할 것입니다.

파라메트릭에 대한 쌍표본 T 테스트 또는 비모수 변수에 대한 Wilcoxon Signed Ranks 테스트를 사용하여 Mepolizumab 치료 전후에 측정된 변수의 차이를 탐지합니다. 구체적으로, 베이스라인에서의 바이오마커 수준은 메폴리주맙 치료 1년 후 수준과 비교될 것이다.

각 결과에 대한 1년(기준선에서 치료 개시 후 1년까지) 치료에 대한 전반적인 반응은 각 환자의 의존적 샘플의 대응 테스트(파라메트릭 및 비모수적 대응 테스트)로 측정됩니다. 그런 다음 치료에 대한 반응은 1년 동안 결과의 변화(절대 및 % 변화)로 정의됩니다. 조사관은 각 임상병리학적 결과에 대해 다중 회귀 모델을 사용하여 바이오마커와 같은 치료(변화)에 대한 반응에 영향을 미치는 예측 변수를 평가합니다. 연구 기간 동안 피험자당 2개 이상의 관찰이 있는 결과의 경우 조사자는 결과의 반복 측정을 사용하여 혼합 모델을 사용합니다. 모든 테스트는 통계적 유의 수준이 5%인 양면 테스트입니다.