Mepolitsumabin teho vaikeissa astmaatikoissa (MESILICO) (MESILICO)

Tieteelliset perusteet Interleukiini (IL)-5 on tärkein sytokiini, joka on vastuussa eosinofiilien aktivoinnista, joten terapeuttisia strategioita on tutkittu ja kehitetty kliiniseen käyttöön. IL-5:een ja sen reseptoriin (ensin mepolitsumabi ja sen jälkeen reslitsumabi ja benralitsumabi) kohdistuvat biologiset aineet on äskettäin hyväksytty ja niitä on käytetty lisähoitona vaikeassa eosinofiilisessä astmassa, mikä johtaa verenkierron eosinofiilien määrän vähenemiseen, keuhkojen toiminnan paranemiseen ja pahenemiseen. vaikeaa astmaa sairastavien potilaiden määrä vähenee.

Vaste biologisiin hoitoihin vaikeassa astmassa vaihtelee, ja potilaat ovat joko ei-respondereja, reagoivia tai superrespondereja. Tällä hetkellä vastausten suurelle vaihtelulle ei ole selitystä. On tärkeää tutkia, onko näillä potilailla selkeitä ominaisuuksia, jotka voisivat auttaa hoitavaa lääkäriä oikean diagnoosin tekemisessä kliinisessä käytännössä.

Tämän kliinisen tutkimuksen tavoitteena on arvioida mepolitsumabin, humanisoidun IL-5-antagonistin monoklonaalisen vasta-aineen, tehoa potilailla, joilla on myöhään alkanut vaikea eosinofiilinen astma, johon liittyy kiinteä ahtauma, ja tunnistaa mepolitsumabihoidon aikana ei-reagoivien ja superrespondereiden ominaisuudet. Tätä tutkimusta pidetän ei-interventioina, ja jokainen mukana oleva toimenpide tapahtuu kliinisessä rutiinissa astmapotilaiden diagnosoimiseksi ja fenotyypin määrittämiseksi.

Hengitystietulehduksen tutkimiseen käytetään useita menetelmiä: suoria mittauksia (kuten keuhkoputkibiopsia tai bronkoalveolaarinen huuhtelu) ja epäsuoria menetelmiä (kuten oireiden arviointi, verinäyteanalyysi ja keuhkojen toimintatestit). Suorilla tekniikoilla on se etu, että ne arvioivat luotettavasti hengitysteiden tulehdusta, mutta ne ovat invasiivisia eivätkä ole toteutettavissa suuressa mittakaavassa potilaan epämukavuuden ja riskin vuoksi. Mitä tulee epäsuoriin menetelmiin, ne korreloivat huonosti hengitystietulehduksen suoran arvioinnin kanssa.

Tässä tutkimuksessa arvioidaan potilaiden kliinisistä ominaisuuksista spirometriaa, tulehduksen biomarkkereita (veren eosinofiilit, FeNO, IgE-tasot), impulssioskilometriaa (IOS) ja tyvikalvon paksuuntumista bronkoskooppaisesti. On ehdotettu, että myöhään alkavat vakavat eosinofiiliset astmapotilaat, joilla on kiinteä tukos ja jotka eivät reagoi tavanomaiseen hoitoon (ICS/LABA/LAMA), näkyvät lisääntyneellä sileällä lihasmassalla. Lisääntyneen hengitysteiden sileän lihasmassan tarkkoja vaikutuksia hengitysteiden kaventumiseen ei kuitenkaan tunneta, ja ne voivat vaihdella sairauden vaikeusasteen mukaan. Lisäksi tulehduksen biomarkkereita arvioidaan myös ennen 52 viikon mepolitsumabihoitoa ja sen jälkeen biologisissa nesteissä (seerumi-, yskös-, yskössupernatantti- ja keuhkoputkinäytteet). Tulehduksen biomarkkerit ovat erittäin tärkeitä, jotta voidaan tunnistaa reagoimattomat henkilöt.

Tarkemmin sanottuna IOS on otettu käyttöön vaihtoehtoisena menetelmänä keuhkojen toiminnan arvioimiseksi erityisesti astman hoidossa. Tämä tekniikka on ei-invasiivinen, helppo suorittaa hengityksen aikana ja vaatii vain vähän potilasyhteistyötä.

Ysköksen kerääminen on toinen tapa ottaa solunäytteitä hengitysteistä ja mahdollistaa hengitysteiden tulehduksen suoran arvioinnin. Lisäksi esimerkkejä ysköksen supernatantista ovat välittäjien analyysi ja näytteen kemotaktisen aktiivisuuden arviointi eosinofiilien suhteen. Ysköksen solut voidaan analysoida myös virtaussytometrillä, joka mahdollistaa muun muassa immunofenotyypin määrittämisen ja solujen lajittelun. Lisäksi yskössoluja voidaan viljellä ja niiden välittäjätuotantoa voidaan mitata in vitro. On syytä huomata, että tässä tapauksessa välittäjäsisältö on erilainen kuin ysköksen supernatantissa. Itse asiassa ysköksen supernatantissa oleviin välittäjiin voivat vaikuttaa eritteet hengitysteissä asuvista soluista ja plasman erittyminen, toisin kuin yskössoluviljelymallissa. Lopuksi immunosytokemia ja in situ -hybridisaatio voidaan suorittaa myös käyttämällä yskössoluja.

Vaikka fenotyyppejä, veren eosinofiilejä ja seerumin IgE-tasoja on ehdotettu käytettäväksi referenssinä, veren immuunisolutason ja hengitysteiden epiteelin immuunireaktion välillä on dissosiaatio, kuten aikaisemmissa tutkimuksissa on vahvistettu. Hengitysteiden epiteelin immunohistokemiallista värjäystä kohdennetuille immuunisoluille on käytetty erityyppisten hengitysteiden tulehduksien määrittämiseen; tätä tekniikkaa käytetään kuitenkin harvoin kliinisissä olosuhteissa. Aiemmat tutkimukset ovat paljastaneet bronkoskooppisten biopsioiden suhteellisen turvallisuuden potilaille, joilla on vaikea astma. Kudosdiagnoosissa käytettävistä näytteenottotekniikoista, mukaan lukien nenäbiopsiat, nenän tai keuhkoputkien harjaus ja bronkoalveolaarinen huuhtelu, bronkoskoopialla ohjattu keuhkoputkien epiteelin näytteenotto antaa tarkempaa tietoa epiteelisoluista ja tulehdussoluista kudoskontekstissa. Se on siten tehokas työkalu sopivimpien biologisten aineiden valitsemiseen vaikeissa kliinisissä olosuhteissa.

Lisäksi astmaattiselle sairaudelle on tunnusomaista krooninen limakalvon tulehdusprosessi, joka johtaa peruuttamattomiin muutoksiin keuhkoputken seinämässä, joka tunnetaan nykyään nimellä "keuhkoputkien uusiutuminen". Rauhas- ja sileälihaskuitujen liikakasvu ja/tai liikakasvu, pikarisolujen liikakasvu ja tyvikalvon (BM) vaihteleva paksuuntuminen hengityselinten epiteelin alla ovat osa näitä morfologisia muutoksia. epiteelin ja liitoksen välisessä rajapinnassa syntyvät muutokset selittävät "adaptiivisen vasteen" tulehdukselliselle stressille ja satunnaiselle keuhkoputken supistumiselle. Nykyiset tiedot astmapotilaiden BM-reaktiivisuudesta ovat kuitenkin vielä epätäydellisiä, jotta voidaan arvioida tarkasti sen osallistuminen patogeneesiin ja erityisesti keuhkoputkien seinämän uudelleenmuodostumiseen, pääasiassa koska kollageenikertymät lamina reticulariksessa eivät korreloi sairauden vaikeusasteen kanssa.

Lisäksi on yhä selvempää, että vaikea astma ei ole yksittäinen sairaus, mistä ovat osoituksena astmapotilailla havaitut erilaiset kliiniset oireet, fysiologiset ominaisuudet ja tulokset. Tämän heterogeenisyyden ymmärtämiseksi paremmin on syntynyt käsite astman fenotyyppi ja endotyypitys. Fenotyypitys yhdistää sekä biologiset että kliiniset piirteet molekyyli-, solu-, morfologisista ja toiminnallisista potilaslähtöisistä ominaisuuksista hoidon parantamiseksi. Viime kädessä nämä fenotyypit kehittyvät astman "endotyypeiksi", jotka yhdistävät kliiniset ominaisuudet tunnistettaviin mekanistisiin reitteihin. Biomarkkerit, jotka määritellään ominaisuuksiksi, jotka voidaan mitata objektiivisesti ja jotka toimivat taustalla olevien biologisten prosessien tai patogeneesin indikaattoreina, ovat ratkaisevia fenotyyppien ja endotyyppien määrittelyssä. Astmassa geneettisiä polymorfismeja, hengitysteiden fysiologian mittauksia ja tulehdusvälittäjien tasoja virtsassa, veressä, ysköksessä, kudoksessa, uloshengitetyssä kaasussa ja hengitystiivisteessä on kaikki tutkittu mahdollisina merkkiaineina astman diagnoosin ja hoidon parantamiseksi ja objektiiviseksi tekemiseksi. Tällaisten työkalujen kehittäminen antaa meille mahdollisuuden fenotyyppiä ja endotyypittää astmassa kuvatut erilaiset kliiniset mallit, ja perimmäisenä tavoitteena on räätälöidä hoito tietyn biomarkkeriprofiilin perusteella. Biomarkkereita voidaan sitten käyttää auttamaan paremmin ymmärtämään interventioon liittyvää farmakologista vastetta ja säätämään hoitoa sen mukaisesti.

Biomarkkerit ovat olleet kriittisiä taudin patogeneesin tutkimuksissa ja uusien hoitojen kehittämisessä vaikeassa astmassa. Erityisesti tyypin 2 tulehduksen biomarkkerit ovat osoittautuneet arvokkaiksi endotyyppien määrittämisessä ja uusien biologisten aineiden kohdistamisessa. Koska tyypin 2 tulehduksen ymmärtämisessä ja merkitsemisessä on onnistuttu, tiedon puute astman ei-tyypin 2 tulehdusmekanismeista on pian suurin este uusien hoitojen ja hallintastrategioiden kehittämiselle vaikeassa astmassa. Muita mahdollisia biomarkkereita ovat synnynnäiset lymfoidisolut, IL-33 tai kateenkorvan stroomalymfopoietiini.

Viimeaikaiset julkaisut vahvistivat miRNA:iden ratkaisevan säätelyn roolin astman patomekanismissa. Jotkut yksittäiset miRNA:t tai niiden sarjat lupaavat käyttää niitä astman biomarkkereina, jotka helpottavat diagnoosia tai hoidon tulosten ennustamista. Ne ovat myös mahdollinen tulevaisuuden hoitojen kohde. Tämän alan tutkimukset ovat kuitenkin puutteellisia. Äskettäin on osoitettu, että useimmat mukana olevat miRNA:t lisäävät Th2-sytokiinien eritystä, vähentävät Th1-sytokiinien eritystä, edistävät T-solujen erilaistumista Th2:ksi tai niillä on rooli keuhkoputkien sileiden lihassolujen hyperplasiassa ja hypertrofiassa. MiRNA:iden profiilit korreloivat kliinisten ominaisuuksien kanssa, mukaan lukien keuhkojen toiminta, fenotyyppi ja astman vaikeusaste.

Useimmat teollisuuden sponsoroimat biologiset kliiniset tutkimukset ovat käyttäneet tehokkaasti yllä olevaa lähestymistapaa valitsemalla tutkimuskohteita, jotka muistuttavat SARP:n vaikean astman kliinisiä fenotyyppejä (korkean intensiteetin kontrollerilääkitysohjelmat, toistuvat pahenemisvaiheet ja alhainen keuhkojen toiminta), mutta vaativat sitten kohonneen biomarkkerin (in veri, uloshengityskaasu tai yskös), joiden pitäisi tunnistaa potilaat, jotka todennäköisimmin reagoivat tietylle immunomodulaattorille kyseisten kliinisten fenotyyppien sisällä. Äskettäin julkaistuissa kliinisissä tutkimuksissa biologiset aineet kohdistuvat tyypin 2 tulehdusreitteihin ja rajoittavat osallistumisen potilaisiin, joilla on kohonneet tyypin 2 biomarkkerit (veren tai ysköksen eosinofiilit tai FeNO). Post hoc -vasteanalyysit "ryhmittelevät" biomarkkereita ymmärtääkseen paremmin, mitkä potilaat hyötyvät eniten biologisesta immunomodulaattorista, johtavat ymmärrykseen, että useamman kuin yhden tyypin 2 tulehduksellisen biomarkkerin samanaikainen nousu voi edelleen tunnistaa "korkeasti reagoivia" potilaita.

Hypoteesi sisältää mepolitsumabihoidon tehokkuuden myöhään alkaneilla vaikealla eosinofiilisillä astmapotilailla, joilla on kiinteä tukkeuma ja jotka liittyvät kliinisiin ja tulehduksellisiin biomarkkereihin.

Tutkimuskysymykset Onko pahenemisasteessa parannusta myöhään alkaneilla vaikean eosinofiilisen astman potilailla, jotka saavat mepolitsumabihoitoa ensimmäisen hoitovuoden aikana, ja mitkä ovat ei-responder- ja superresponder-potilaiden ominaisuudet? Onko sileiden lihassolujen uudistumisessa parannusta? Onko olemassa biomarkkereita, jotka ennustavat vastetta mepolitsumabihoitoon myöhään alkaneilla vaikea-asteisilla eosinofiilisillä astmapotilailla? Onko hengitysparametreissa parannusta? Onko astman hallinnassa ja potilaiden elämänlaadussa parannusta? Tavoitteet

Tämän tutkimuksen ensisijaiset tavoitteet ovat:

1. Havainnollistaa mepolitsumabihoidon vaikutus pahenemisasteeseen myöhään alkaneilla vaikea-asteisilla eosinofiilisilla astmapotilailla, joilla on kiinteä tukos.
2. Tunnistaa ei-vastaajien ja supervastaajien ominaisuudet.

Tämän tutkimuksen keskeiset toissijaiset tavoitteet ovat:

1. Kaikki parannukset uusiutumiseen (keuhkoputkien sileiden lihassolujen paksuuntuminen).
2. Kaikki mahdolliset vasteen biomarkkerit.
3. Hengitysparametrien parantuminen astman hallinnassa ja potilaiden elämänlaadussa mepolitsumabihoidon aikana myöhään alkaneilla vaikea-asteisilla eosinofiilisilla astmapotilailla, joilla on kiinteä tukos.

Tutkimuksen suunnittelu ja menetelmät Potilaita kerätään keuhkoastman poliklinikoilta jokaiselta Kreikan väestön kattavalta paikalta (määrä 8). Kaikki nämä klinikat ovat mukana vahvistamaan rekrytointia sekä sisällyttämään mukaan kansainvälisesti vaikuttavia bronkoskooppiasiantuntijoita. Vallitsevan Covid-19-pandemiatilanteen vuoksi tutkijat olettavat, että tämä kliininen tutkimus ei vaikuta klinikkamme työmäärään.

Kaiken kaikkiaan tämä on tuleva monikeskustutkimus, johon kuuluu kahdeksan keuhkoklinikkaa. Viisi keuhkoyliopiston klinikkaa, kaksi National Health Systemista ja yksi armeijan yleissairaala.

Tutkimukseen sisältyy enintään 2 viikon seulontajakso kelpoisuuden arvioimiseksi ja kirjallisen tietoisen suostumuksen saamiseksi, 52 viikon mepolitsumabihoitojakso 4 viikon välein, mukaan lukien seurantakäynnit 3 kuukauden välein hoidon aikana.

Tutkimuspopulaatio koostuu 45 potilaasta, joilla on myöhään alkanut vaikea eosinofiilinen astma ja kiinteä tukos ja jotka saavat mepolitsumabia vähintään 20-vuotiaista.

Opintoihin osallistuminen, arviointi ja seuranta:

Seulonta: Tutkijat seulovat valitut kohteet osallistuville klinikoille (vaikean astman poliklinikat). Koehenkilöt tulevat sisään allekirjoittamaan suostumuksensa. Kliininen arviointi ja toimenpiteet sekä rakennehaastattelut suoritetaan seulonnan aikana. Koehenkilöt, jotka ovat kelvollisia/pystyvät suorittamaan seulontakäynnin, voivat tehdä sen samana päivänä, ja tarvittaessa he suorittavat perusarvioinnin 2 viikon kuluessa. Potilaiden, joilla astman paheneminen on meneillään, seulonta- ja hoidon aloituskäyntiä tulee lykätä, kunnes tutkija katsoo, että potilas on palannut astman perustilaansa. Jos 2 viikon seulontajakso on kulunut umpeen, potilaan on katsottava epäonnistuneen seulonnassa. Koehenkilöt jatkavat nykyistä ylläpitohoitoaan seulontajaksojen ajan. Potilaiden kelpoisuus perustuu seuraavissa osioissa lueteltuihin kriteereihin.

Astman pahenemishistoria viimeisen 12 kuukauden ajalta raportoidaan seulontakäynnillä. Myös pahenemisvaiheet arvioidaan jokaisella käynnillä raportoitujen mukaisesti.

Elintoiminnot suoritetaan seulontakäynnillä, lähtötilanteessa ja 3 kuukauden välein. Mittaukset sisältävät systolisen ja diastolisen verenpaineen, pulssin ja kehon lämpötilan.

Seulontakäynneillä mitataan pituus senttimetreinä (cm) ja paino kilogrammoina (kg). Painoindeksi (BMI) lasketaan jaettuna painona kg:lla pituuden neliöllä

Laboratorioarviointi (hematologia, veren kemia, virtsan analyysi):

Laskimoveri ja virtsa kerätään lähtötilanteessa. Hematologia: Hemoglobiini, hematokriitti, punasolujen määrä, valkoisten verisolujen määrä erotuksella ja verihiutaleet mitataan kunkin sairaalan laboratoriossa. Kliinisen kemian perustiedot ja virtsan analyysit arvioidaan. Naishenkilöiden virtsan kerääminen arvioi myös raskauden.

IgE-tasot arvioidaan seulontakäynnillä käyttämällä immunoCAP-testejä, ja ne raportoidaan IU/ml:na.

Seuraavat kyselylomakkeet annetaan: 1) astmakontrollikysely (ACQ-5) ja astmakontrollitesti (ACT) nykyisen astman hallinnan arvioimiseksi; 2) Asthma Quality of Life Questionnaire (AQLQ+12) elämänlaadun ja psyykkisen sairastuvuuden arvioimiseksi. Unenlaadun arvioimiseksi edelleen 1) Ateenan unettomuusasteikko (AIS), 2) Epworth Sleepiness Scale (ESS), 3) St. George's Respiratory Questionnaire (SGRQ) ja 4) WHO (viisi) hyvinvointiindeksi (WHO-5), 5) Väsymyksen vakavuusasteikko (FSS).

Uloshengitetyn typpioksidin (NO) määrä mitataan lähtötilanteessa ja 3 kuukauden välein American Thoracic Societyn ohjeiden ja valmistajan ohjeiden mukaisesti. FeNO-pitoisuudet ilmoitetaan osina miljardia kohti. Mittaukset tehdään ennen spirometriaa.

Laskimoverinäytteet otetaan klo 8.00–10.00 lähtötilanteessa ja 3 kuukauden välein 52 viikon ajan mepolitsumabihoidon aikana. Absoluuttinen veren eosinofiilien määrä ilmoitetaan soluina/μl.

Spirometria: Spirometria A suoritetaan käynneillä (perustilanteessa ja 3 kuukauden välein) paikan omilla laitteilla. Kaikkien klinikkakäyntien tulee tapahtua aamulla. Hoitojakson aikana spirometria täyttää nykyiset ATS/ERS-suositukset ja spirometrin on tulostettava kaikista syntyneistä tiedoista, jotka tulee tallentaa potilaan muistiinpanoihin. Spirometri kalibroidaan valmistajan ohjeiden mukaisesti. Spirometria tulee tehdä samaan aikaan (±1 tunti) Visit 0 -spirometrian kanssa. Koehenkilöiden tulee mahdollisuuksien mukaan estää lyhytvaikutteisia beeta-2-agonisteja (SABA) ≥ 4 tuntia ja LABA:ta ≥ 15 tuntia ennen klinikkakäyntiä (GINA 2019). Tallennettavia arvioita ovat FEV1, FVC, FEV1/FVC, PEF ja FEF25-75. Bronkodilaattorin jälkeiset mittaukset tehdään jokaisella käynnillä käyttäen 200-400 mcg albuterolia tai vastaavaa.

Spirometria B suoritetaan käyttämällä paikan omia laitteita käynneillä (perustilanne, 6 kuukauden kuluttua ja hoidon jälkeen 52 viikon aikapisteessä). Spirometria B sisältää diffuusion, keuhkojen tilavuudet ja kapasiteetit.

Impulssioskilometria (valinnainen):

Impulssiosillometria (IOS) suoritetaan lähtötilanteessa ja 52 viikon hoidon jälkeen. IOS sisältää resistanssin 5 Hz:n resistanssilla 20 Hz:llä (R5-R20), mitta, joka heijastaa pienten ja keskikokoisten johtavien ja perifeeristen hengitysteiden hengitysvastusta, AX, mitta, joka heijastaa ääreiskeuhkojen (eli parenkyymin ja pienten perifeeristen hengitysteiden) laajenemista. ja hengityselinten reaktanssi (X5), mitta, joka heijastaa inertanssia ja elastisuutta tai kapasitanssia (mukaan lukien pienet perifeeriset hengitystiet).

Hoito biologisilla lääkkeillä:

Seulontakäyntien päätyttyä osallistuja voi aloittaa hoidon biologisella terapialla (mepolitsumabi) kuukauden sisällä. Hoidon aikana koehenkilöt ovat keuhkolääkärin hoidossa, joka on lähettänyt heidät tutkimusryhmään tutkimukseen osallistumista varten. Näitä keuhkolääkäreitä kutsutaan "associate pulmonologists". Hoito suoritetaan tuotteen valmistajan ohjeiden mukaan.

Tutkimuksen aikana biologista hoitoa antavan keuhkolääkärin tulee allekirjoittaa sopimus tutkimuksen suorittamisesta protokollan mukaisesti, tunnustaa olevansa vastuussa lääketieteellisestä käytöksestä ja tutkimuksen suorittamisesta sekä varmistaa, että työntekijä (ja hänen kollegansa) ja työntekijät) saavat tietoa heidän velvollisuuksistaan. Käytössä on mekanismit, joilla varmistetaan, että apulaishenkilöstö saa asianmukaista tietoa ja tukea tutkimusryhmältä koko tutkimuksen ajan.

Seuranta biologisen terapian aikana: Aloitusvaiheessa ja jokaisella biologisen hoidon käynnillä tiedonkeruun suorittaa apulaiskeuhkolääkäri ja tutkimusryhmän tuella, jos apulaiskeuhkolääkäri sitä pyytää, esim. tutkijat puhelimitse tai kasvokkain. kasvokontakti haastattelee potilasta. Lisäksi hoitomyöntyvyys kirjataan lääkäriltä potilaan suullisen vahvistuksen perusteella. Lääkkeen antopäivämäärä kirjataan jokaisella käynnillä, samoin kuin välittömät ja viivästyneet haittavaikutukset.

Turvallisuusvalvonta:

Rekisteröityjä haittatapahtumia (AE) seurataan ja kootaan tutkimusraporttien mukaisesti. Haittatapahtuma on minkä tahansa ei-toivotun merkin, oireen tai lääketieteellisen tilan ilmaantuminen tai paheneminen, joka ilmenee tutkimuksen aloittamisen jälkeen. Ennen tutkimuslääkkeen aloittamista esiintyviä lääketieteellisiä tiloja/sairauksia pidetään haittatapahtumina vain, jos ne pahenevat tutkimuslääkkeen aloittamisen jälkeen. Poikkeavat laboratorioarvot tai testitulokset ovat haittatapahtumia vain, jos ne aiheuttavat kliinisiä merkkejä tai oireita, katsotaan kliinisesti merkittäviksi tai vaativat hoitoa. Mukana ovat myös Covid-19:ään liittyvät haittatapahtumat. Jos yhteistyökumppani keuhkolääkäri tai tutkimushenkilöstö saa tietää tuotteeseen liittyvästä haittavaikutuksesta, se voidaan ilmoittaa valmistajalle paikallisen spontaanien AE-raportointikäytännön mukaisesti. Kopio raportista tulee lähettää myös tutkimuksen koordinaattorille. Vakavista haittatapahtumista (SAE) ilmoitetaan eCRF-sivuilla, ja 24 tunnin sisällä kaikkien tutkijoiden on ilmoitettava niistä Thessalonikin keskuskomitealle. Sitten keskuskomitea ilmoittaa tieteelliselle lautakunnalle ja Kreikan lääketieteelliselle virastolle. Lisäksi kunkin keskuksen päätutkija käyttää keskuskomitean kanssa lääketieteellistä ja tieteellistä harkintaa päättäessään, tuleeko potilaan lopettaa hoito vai ei.

Raskausraportti:

Aluksi seulonnassa olevien naispotilaiden on tehtävä raskaustesti. Hoidon aikana, jos naispuolinen koehenkilö ilmoittaa meille raskaudesta, häntä pyydetään vetäytymään tutkimuksesta (vinoutumisen estämiseksi). Tämän jälkeen häneltä kysytään, haluaako hän jatkaa hoitoa tämän protokollan ulkopuolella ja häntä seurataan kunkin keskuksen poliklinikalla.

Esiseulonta ja seulontavirheet:

Koehenkilöille annetaan tutkimusnumero suostumuksen allekirjoittamisen yhteydessä. Koehenkilöt, jotka allekirjoittivat, mutta eivät edenneet seulontakäyntiarviointiin, katsotaan epäonnistuneiksi ennen seulontaan. Tietokantaan ei tallenneta tietoja näistä aiheista.

Koehenkilöt, jotka suorittavat vähintään yhden kahdesta seulontakäynnistä, mutta eivät aloita biologista hoitoa, luokitellaan seulonnan epäonnistuneiksi. Esitarkastuksia ja seulontavirheitä varten kerättävät tiedot ilmoitetaan yksityiskohtaisesti tietokannan lopussa.

Kotiutuskäynti:

Jos osallistuja päättää vetäytyä tutkimuksesta seurannan aikana (jostakin muusta syystä kuin seurannan puuttumisesta), häntä voidaan pyytää osallistumaan peruutuskäynnille (jos tutkija katsoo sen tarpeelliseksi ja suostumuksella). Vierailun aikana osallistujalta voidaan esittää kysymyksiä hänen nykyisestä tilastaan ​​osana kliinistä tiedonkeruuta, kuten astma ja nenäoireet, pahenemisvaiheet ja hoidon eteneminen.

Verinäytteiden kerääminen ja käsittely:

Verinäytteet otetaan lähtötilanteessa, 6 kuukauden kuluttua ja hoidon päätyttyä. Verinäytteiden keräämisen jälkeen ne jätetään häiritsemättä noin puoleksi tunniksi, jotta hyytymä muodostuu täydellisesti. Näyte sentrifugoidaan sitten seerumin erottamiseksi hyytymisestä. Sentrifugoinnin jälkeen seerumia säilytetään -20 °C:ssa eppendorf-putkissa, kunnes analyysi on tehty. Veren fenotyyppiä arvioidaan myös virtaussytometrialla.

Indusoitunut yskös (valinnainen):

Indusoitu yskös suoritetaan lähtötasolla ennen hoidon aloittamista ja hoidon päätyttyä ERS-työryhmän raportin mukaisesti, jossa ehdotetaan yksityiskohtaista asiantuntijakonsensukseen perustuvaa suositusta indusoidulle ysköksen käsittelylle.

Käynneillä ysköksen induktio suoritetaan rutiininomaisten spirometristen arvioiden jälkeen.

Indusoitu yskös käsitellään kahden tunnin sisällä induktiotoimenpiteen päättymisestä tutkimuspaikalla. Yskössolut ja solususpension supernatantti säilytetään -80 ºC:ssa analyysiä varten. Indusoidun ysköksen keräämisen jälkeen näytteen supernatanttia säilytetään -20 °C:ssa eppendorf-putkissa, kunnes analyysi on tehty. Näiden toimenpiteiden jälkeen ysköksen laboratorioarviointi on seuraava ohjeiden mukaan.

Bronkoskopia, keuhkoputkien biopsiat ja pesunäytteiden keräys ja käsittely (valinnainen): Käynnillä tehdään endoskopia keuhkoputkien biopsioilla, keuhkoputkien pesunäyte (käynti 0b) potilaan kirjallisella suostumuksella. Erityisesti jokaiselta potilaalta liitetään erillinen suostumus, joka allekirjoitetaan. Bronkoskopia suoritetaan kahdessa vaiheessa (perustila ennen hoidon aloittamista ja hoidon päätyttyä). Joustava bronkoskoopia ja diagnostiset tekniikat suoritettiin valvotussa anestesiahoidossa American Thoracic Societyn ja British Thoracic Societyn suosittelemalla tavalla.

Kudosnäytteet kiinnitetään inflaatioon tai upotukseen formaldehydillä tai glutaraldehydillä ja upotetaan parafiiniin. Hengitystiet otetaan systemaattisesti näytteitä tai hankitaan diagnostisen dissektion aikana patologin harkinnan mukaan. Jokaisesta lohkosta leikattiin peräkkäiset 0,5, 5 ja 30 μm:n paksuiset leikkeet ja värjättiin käyttäen Massonin trikromitekniikkaa, hematoksyliiniä ja eosiinia sekä hematoksyliiniä, vastaavasti. Immunohistokemiallinen värjäys tehdään seuraavilla mAb:illa: anti-syöttösolutryptaasiklooni AA1 (Dako UK), anti-alfa sileän lihaksen aktiiniklooni 1A4 (Dako UK), anti-eosinofiilin pääperusproteiiniklooni BMK-13 (Monosan, Alankomaat) ), käytettiin anti-neutrofiilielastaasiklonia NP57 (Dako UK) ja anti-endoteeliklonia EN4 (Monosan, Alankomaat) tai sopivia isotyyppikontrolleja.

Endobronkiaaliset biopsiat arvioi yksi kliinisille ominaisuuksille sokeutunut tarkkailija (ZEN 2012 -kuva-analyysiohjelmisto valomikroskopiaan, Carl Zeiss AG, Saksa), ja ne ilmaistaan ​​mittausten keskiarvona, jotka on suoritettu vähintään kahdesta riippumattomasta jaksosta. biopsiat tai ei-vierekkäiset kudosleikkeet vähintään 20 μm:n etäisyydellä samasta biopsiasta. Epiteelin eheys arvioidaan mittaamalla ehjän ja paljastuneen epiteelin pituudet. Nämä ilmaistaan ​​prosentteina kaikesta verkkokalvon (RBM) pituudesta. Verisuonisuus mitataan käyttämällä Chalkley-laskentaa, joka on sekä suonen tiheyden että verisuonialueen korvike. Chalkley-okulaariristikkoa (NG52 Chalkley Point Array, Pyser-SGI Ltd, UK) käytetään x200:ssa Chalkley-lukujen mittaamiseen neljässä ei-päällekkäisessä vaskulaarisessa hotspotissa (6). Hengitysteiden sileiden lihasten pitoisuus määritetään osuutena kokonaispinta-alasta. Tulehdussolut ilmaistiin tumallisten solujen lukumääränä lamina proprian pinta-alaa kohti.

Keuhkoputkien pesunäytteet kuljetetaan välittömästi laboratorioon säilytettäväksi -80 asteessa. Keuhkoputkien pesunesteiden tutkiminen suoritetaan myöhemmässä vaiheessa useiden biomarkkerien määrittämiseksi.

Tulehduksen biomarkkerien analyysi virtaussytometriaanalyysillä (FACS) tai ELIZAlla:

Biomarkkerit sisältyivät ennen mepolitsumabihoitoa ja sen jälkeen kahdessa tai kolmessa aikapisteessä (lähtötilanteessa, 6 kuukauden hoidon jälkeen ja hoidon päätyttyä): lymfosyyttien alajoukot, Th2/Th17-sytokiinit, kemokiinit, mikroRNA:iden ilmentyminen, joka määritetään virtaussytometrillä tai ELISA:lla) biologisissa nesteissä (veri, seerumi, keuhkoputkien pesu, yskös ja ysköksen supernatantti).

Paneelisarjat ja sopivat vasta-aineet testataan Flow Cytometer Analysisillä käyttämällä BD FACS Calibur -järjestelmää (BD Biosciences, San Jose, CA) valmistajan suositusten ja ohjeiden mukaisesti.

ELISA (entsyymi-immunosorbenttimääritys) on levypohjainen määritystekniikka, joka on suunniteltu havaitsemaan ja määrittämään aineita, kuten peptidejä, proteiineja, vasta-aineita ja hormoneja. ELISA-sarjat analysoidaan käyttämällä VICTOR X3 -spektrofotometriä valmistajan suositusten ja ohjeiden mukaisesti.

Allergiatestaus (jos sovellettavissa) Potilaiden atooppinen tila arvioidaan (jos ei ole saatavilla) seulontakäynnillä ihopistotestillä (SPT) standardilla aeroallergeenien paneelilla, jotta voidaan havaita kokonais-IgE-vasta-aineet eri yleisiä inhaloitavia allergeeneja vastaan.

Tietokanta Sähköistä tiedonkeruualustaa käytetään lähtötilanteessa 3 kuukauden välein, kunnes tämän tietokannan seuranta kestää vuoden. Hoitokäyntien aikana apulaiskeuhkolääkäri täyttää paperilomakkeet/kyselylomakkeet. Jokainen sivusto syöttää tietyt tiedot sähköiseen tietokantaan. Jokainen potilas tunnistetaan yksilöllisesti kohdenumerolla, joka muodostuu vastuullisen seurantapaikan osoittamasta paikan numerosta ja tutkijan antamasta järjestysnumerosta. Allekirjoitettuaan tietoisen suostumuslomakkeen, potilas antaa tutkijalta seuraavan järjestysnumeron. Sivuston tulee ottaa yhteyttä keskustutkimukseen ja toimittaa pyydetyt potilaan tunnistetiedot sähköiseen tietokantaan rekisteröityneenä. Hoitokäyntilomakkeet lähetetään myös keskustutkimushenkilöstölle. Valtuutettu tutkimushenkilöstö vastaa tiedon keräämisestä, muokkaamisesta sekä myös kerättävien tietojen suojaamisesta omalla sivustollaan ja tietokannasta varmuuskopioidaan päivittäin. Laaduntarkastelu/-valvonta on kaikkien mukana olevien henkilöiden ja keskeisen tutkimushenkilöstön [tietojen ylläpitäjä] yhteinen vastuu.

Näytteen koon laskeminen G-tehoanalyysi Näytteen koko lasketaan G*Power-ohjelmistolla (Die Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf, Saksa). Ero vuotuisessa pahenemisasteessa potilailla, joilla on myöhään alkanut vaikea eosinofiilinen astma ennen ja jälkeen mepolitsumabihoidon, on tutkimuksen ensisijainen päätetapahtuma. DREAM-tutkimuksessa (yksi ainoista kahdesta tutkimuksesta, jotka ovat raportoineet toistaiseksi ensisijaisen päätepisteemme kaltaisia ​​tuloksia) raportoitiin, että vaikeaa astmaa sairastavien potilaiden vuotuinen pahenemisaste laski 3,6:sta 1,33:een mepolitsumabihoidon aloittamisen jälkeen. Käyttämällä näitä tietoja ja kaksipuolista testiä, jonka teho oli 0,95 ja tilastollinen merkitsevyystaso 0,05, tutkijat laskivat vaikutuskoon 0,556, mikä osoitti 45 osallistujan kokonaisotoskoon.

Tilastosuunnitelman analyysi Tilastollinen analyysi suoritetaan käyttämällä SPSS:ää (versio 21.0 IBM SPSS Statistical Software, Armonk, NY, USA). Kategoriset muuttujat ilmoitetaan numeroina (n) ja prosentteina (%), jatkuvat muuttujat keskiarvona ± SD, jos ne jakautuvat normaalisti, tai mediaani- ja kvartiilivälit, jos toisin ei ole. Tarvittaessa muuttujat, joilla ei ole normaalijakaumaa, muunnetaan. P < 0,05 hyväksyttiin tilastollisesti merkitseväksi. Shapiro-Wilk-testi suoritetaan parametristen muuttujien erottamiseksi ei-parametrisista muuttujista. Paired-Samples T-testi parametrisille tai Wilcoxon Signed Ranks -testille ei-parametrisille muuttujille käytetään erojen havaitsemiseen muuttujissa, jotka on mitattu ennen ja jälkeen mepolitsumabihoidon.

Vertailevaa käsivartta ei ole, koska jokainen potilas hallitsee itseään. On olemassa lähtötilanteen ominaisuuksia (kliiniset ja laboratoriobiomarkkerit), jotka mitataan lähtötilanteessa, 3 kuukauden välein ja 52 viikon hoidon päätyttyä. Tutkimuksen päätepisteisiin kuuluu kaikkien näiden biomarkkerien analyysi reagoimattomien ja superrespondereiden ominaisuuksien tunnistamiseksi. Toissijaisia ​​päätepisteitä ovat myös menetelmissä arvioinneina mainittujen biomarkkerien arviointi. Tilastollinen analyysi tehdään aluksi niiden potilaiden lukumäärällä, jotka ovat suorittaneet 52 viikon hoitojakson. Toiseksi potilaat, jotka eivät ole suorittaneet 52 viikon hoitoa, analysoidaan erikseen ja lopuksi näitä kahta ryhmää verrataan keskenään.

Tarkemmin sanottuna yksimuuttuja-analyysillä (kaksipuoliset riippumattomat näytetestit) tutkijat testaavat kaikkien lähtötilanteen tulosten välisiä assosiaatioita/korrelaatioita verrattuna mepolitsumabihoidon jälkeisiin tuloksiin (3 kuukauden välein 1 vuoden hoidon jälkeen): biomarkkereita ysköksessä ja veressä. , kliiniset tulokset. Samoin tulosten ja henkilökohtaisten/demografisten ominaisuuksien välisiä yksimuuttujaisia ​​assosiaatioita testataan mahdollisten sekaannusten tunnistamiseksi. Merkittävät assosiaatiot testataan sitten säädetyillä regressiomalleilla. Assosiaatiot/korrelaatiot arvioidaan erikseen lähtötason kliinisissä ominaisuuksissa ja joka 3. kuukauden seuranta hoidon aikana sekä lähtötilanteessa ja 1 vuoden mepolitsumabihoidon jälkeen. Lisäksi jokaiselle biomarkkerille suoritetaan alaryhmäanalyysi biomarkkerin tason tunnistamiseksi hoitovasteeseen.

Paired-Samples T-testi parametrisille tai Wilcoxon Signed Ranks -testille ei-parametrisille muuttujille käytetään erojen havaitsemiseen muuttujissa, jotka on mitattu ennen ja jälkeen mepolitsumabihoidon. Erityisesti biomarkkerien tasoja lähtötilanteessa verrataan tasoihin yhden vuoden mepolitsumabihoidon jälkeen.

Kokonaisvaste hoitoon yhden vuoden aikana (perustilanteesta 1 vuoteen hoidon aloittamisen jälkeen) kunkin tuloksen osalta mitataan riippuvaisten näytteiden paritestillä (parametriset ja ei-parametriset paritestit) kullakin potilaalla. Tällöin hoitovaste määritellään tuloksen muutokseksi (absoluuttinen ja prosentuaalinen muutos) yhden vuoden aikana. Tutkijat arvioivat hoitovasteeseen (muutokseen) vaikuttavia ennustajia, kuten biomarkkereita, käyttämällä useita regressiomalleja kullekin kliinisatologiselle tulokselle. Tuloksissa, joissa on tutkimusjakson aikana enemmän kuin 2 havaintoa henkilöä kohden, tutkijat käyttävät sekamalleja käyttämällä tulosten toistuvia mittauksia. Kaikki testit ovat kaksipuolisia ja niiden tilastollinen merkitsevyystaso on 5 %.