Wirksamkeit von Mepolizumab bei schwerem Asthma (MESILICO) (MESILICO)

Wissenschaftliche Begründung Interleukin (IL)-5 ist das Hauptzytokin, das für die Aktivierung von Eosinophilen verantwortlich ist, daher wurden therapeutische Strategien untersucht und für den klinischen Einsatz entwickelt. Biologika, die auf IL-5 und seinen Rezeptor abzielen (zunächst Mepolizumab und später Reslizumab und Benralizumab), wurden kürzlich zugelassen und als Zusatztherapie bei schwerem eosinophilem Asthma eingesetzt, was zu einer Verringerung der Anzahl zirkulierender Eosinophiler, einer Verbesserung der Lungenfunktion und Exazerbation führte Reduktion bei Patienten mit schwerem Asthma.

Das Ansprechen auf biologische Therapien bei schwerem Asthma ist unterschiedlich, wobei die Patienten entweder Non-Responder, Responder oder Super-Responder sind. Es gibt derzeit keine Erklärung für diese breite Variation der Reaktion. Es ist wichtig zu prüfen, ob diese Patienten charakteristische Merkmale aufweisen, die dem behandelnden Arzt helfen könnten, in der klinischen Praxis die richtige Diagnose zu stellen.

Ziel dieser klinischen Studie ist es, die Wirksamkeit von Mepolizumab, einem humanisierten monoklonalen IL-5-Antagonisten-Antikörper, bei Patienten mit spät einsetzendem schwerem eosinophilem Asthma mit fixierter Obstruktion zu bewerten und die Merkmale von Non-Respondern und Super-Respondern unter Mepolizumab-Behandlung zu identifizieren. Diese Studie gilt als nicht-interventionell und alle eingeschlossenen Verfahren werden in der klinischen Routine zur Diagnose und Phänotypisierung von Asthmapatienten durchgeführt.

Zur Untersuchung von Atemwegsentzündungen werden mehrere Methoden verwendet: direkte Messungen (wie Bronchialbiopsien oder bronchoalveoläre Lavagen) und indirekte Methoden (wie Symptombeurteilung, Blutprobenanalyse und Lungenfunktionstests). Die direkten Techniken haben den Vorteil, dass sie die Entzündung der Atemwege zuverlässig beurteilen können, sie sind jedoch invasiv und aufgrund der Beschwerden des Patienten und des damit verbundenen Risikos nicht im großen Maßstab durchführbar. Die indirekten Methoden korrelieren schlecht mit der direkten Beurteilung der Atemwegsentzündung.

In dieser Studie werden neben den klinischen Merkmalen der Patienten die Spirometrie, Biomarker der Entzündung (Eosinophile im Blut, FeNO, IgE-Spiegel), die Impulsoszillometrie (IOS) und die Verdickung der Basalmembran mittels Bronchoskopie bewertet. Es wird vermutet, dass Patienten mit schwerem eosinophilem Asthma mit spät einsetzendem Asthma und fixierter Obstruktion, die nicht auf die übliche Behandlung (ICS/LABA/LAMA) ansprechen, eine Zunahme der glatten Muskelmasse aufweisen. Die genauen Auswirkungen einer erhöhten glatten Muskelmasse der Atemwege auf die Verengung der Atemwege sind jedoch nicht bekannt und können je nach Schweregrad der Erkrankung variieren. Darüber hinaus werden vor und nach einer 52-wöchigen Behandlung mit Mepolizumab auch Entzündungsbiomarker in biologischen Flüssigkeiten (Serum, Sputum, Sputumüberstand und Bronchialproben) bewertet. Biomarker der Entzündung sind sehr wichtig, um Responder von Non-Respondern zu identifizieren.

Genauer gesagt wurde IOS als alternative Technik zur Beurteilung der Lungenfunktion mit besonderer Anwendung auf Asthma eingeführt. Diese Technik ist nicht invasiv, lässt sich leicht während der Atempause durchführen und erfordert nur minimale Mitarbeit des Patienten.

Die Sputumentnahme ist eine weitere Möglichkeit, Zellen aus den Atemwegen zu entnehmen und ermöglicht die direkte Beurteilung einer Atemwegsentzündung. Darüber hinaus umfassen Beispiele mit Sputumüberstand die Analyse von Mediatoren und die Bewertung der chemotaktischen Aktivität der Probe auf Eosinophile. Die Sputumzellen können auch mittels Durchflusszytometrie analysiert werden, was unter anderem eine Immunphänotypisierung und Zellsortierung ermöglicht. Darüber hinaus können Sputumzellen kultiviert und ihre Mediatorproduktion in vitro gemessen werden. Es ist erwähnenswert, dass sich der Mediatorgehalt in diesem Fall von dem unterscheidet, was im Sputumüberstand gefunden werden kann. Tatsächlich können Mediatoren im Sputum-Überstand im Gegensatz zum Sputum-Zellkulturmodell durch Sekrete von in den Atemwegen ansässigen Zellen und durch Plasmaexsudation beeinflusst werden. Schließlich können Immunzytochemie und In-situ-Hybridisierung auch unter Verwendung von Sputumzellen durchgeführt werden.

Obwohl Phänotypen, Eosinophile im Blut und Serum-IgE-Spiegel zur Verwendung als Referenz vorgeschlagen wurden, gibt es eine Dissoziation zwischen dem Spiegel der Blutimmunzellen und der Immunreaktion des Atemwegsepithels, wie in früheren Studien bestätigt wurde. Die immunhistochemische Färbung des Atemwegsepithels für gezielte Immunzellen wurde verwendet, um verschiedene Arten von Atemwegsentzündungen zu bestimmen; Diese Technik wird jedoch selten in einer klinischen Umgebung verwendet. Frühere Studien haben die relative Sicherheit der Durchführung von Bronchoskopie-Biopsien bei Patienten mit schwerem Asthma gezeigt. Unter den für die Gewebediagnose verwendeten Probenahmetechniken, einschließlich Nasenbiopsien, Nasen- oder Bronchialbürsten und bronchoalveolärer Lavage, liefert die bronchoskopiegeführte Bronchialepithelprobenahme genauere Informationen über die Epithel- und Entzündungszellen im Gewebekontext. Es ist somit ein leistungsstarkes Werkzeug zur Auswahl der am besten geeigneten Biologika unter schwierigen klinischen Bedingungen.

Außerdem ist eine Asthmaerkrankung durch einen chronischen Schleimhautentzündungsprozess gekennzeichnet, der zu irreversiblen Veränderungen der Bronchialwand führt, die heute als "bronchial remodeling" bekannt sind. Hyperplasie und/oder Hypertrophie der Drüsen- und glatten Muskelfasern, Hyperplasie der Becherzellen und variable Verdickung der Basalmembran (BM), die unter dem respiratorischen Epithel vorhanden ist, sind Teil dieser morphologischen Veränderungen. die an der Epithel-Bindemittel-Grenzfläche erzeugten Veränderungen erklären eine "adaptive Reaktion" auf entzündlichen Stress und sporadische Bronchokonstriktion. Die aktuellen Daten zur BM-Reaktivität bei Asthmapatienten sind jedoch immer noch unvollständig für eine genaue Bewertung ihrer Beteiligung an der Pathogenese und insbesondere am Bronchialwandumbau, hauptsächlich da Kollagenablagerungen in der Lamina reticularis nicht mit dem Schweregrad der Erkrankung korrelieren.

Darüber hinaus wird immer deutlicher, dass schweres Asthma keine einzelne Krankheit ist, wie die Vielfalt der klinischen Präsentationen, physiologischen Merkmale und Ergebnisse zeigt, die bei Patienten mit Asthma beobachtet werden. Um diese Heterogenität besser zu verstehen, wurde das Konzept der Asthma-Phänotypisierung und -Endotypisierung entwickelt. Die Phänotypisierung integriert sowohl biologische als auch klinische Merkmale, von molekularen, zellulären, morphologischen und funktionellen bis hin zu patientenorientierten Merkmalen mit dem Ziel, die Therapie zu verbessern. Letztendlich entwickeln sich diese Phänotypen zu Asthma-"Endotypen", die klinische Merkmale mit identifizierbaren mechanistischen Signalwegen kombinieren. Biomarker, definiert als Merkmale, die objektiv gemessen werden können und als Indikator für zugrunde liegende biologische Prozesse oder Pathogenese dienen, sind entscheidend für die Definition von Phänotypen und Endotypen. Bei Asthma wurden genetische Polymorphismen, Messwerte der Atemwegsphysiologie und Konzentrationen von Entzündungsmediatoren in Urin, Blut, Sputum, Gewebe, Ausatemgas und Atemkondensat als potenzielle Marker zur Verbesserung und Objektivierung der Asthmadiagnose und -behandlung untersucht. Die Entwicklung solcher Tools wird es uns ermöglichen, die verschiedenen klinischen Muster, die bei Asthma beschrieben werden, zu phänotypisieren und zu endotypisieren, mit dem ultimativen Ziel, die Therapie auf der Grundlage eines spezifischen Biomarkerprofils maßzuschneidern. Biomarker können dann verwendet werden, um die pharmakologische Reaktion auf eine Intervention besser zu verstehen und die Therapie entsprechend anzupassen.

Biomarker waren für Studien zur Pathogenese von Krankheiten und die Entwicklung neuer Therapien bei schwerem Asthma von entscheidender Bedeutung. Insbesondere Biomarker der Typ-2-Entzündung haben sich als wertvoll für die Endotypisierung und das Targeting neuer biologischer Wirkstoffe erwiesen. Aufgrund dieser Erfolge beim Verständnis und der Markierung von Typ-2-Entzündungen wird der Mangel an Wissen über Nicht-Typ-2-Entzündungsmechanismen bei Asthma bald das größte Hindernis für die Entwicklung neuer Behandlungen und Behandlungsstrategien bei schwerem Asthma sein. Andere potenzielle Biomarker umfassen angeborene lymphoide Zellen, IL-33 oder thymisches stromales Lymphopoietin.

Jüngste Veröffentlichungen bestätigten die entscheidende regulatorische Rolle von miRNAs im Pathomechanismus von Asthma. Einige einzelne miRNAs oder ihre Sets versprechen ihre Verwendung als Asthma-Biomarker, die die Diagnose oder Vorhersage von Behandlungsergebnissen erleichtern. Sie sind auch mögliche Angriffspunkte zukünftiger Therapien. Die Studien auf diesem Gebiet fehlen jedoch. Kürzlich wurde gezeigt, dass die meisten der beteiligten miRNAs die Sekretion von Th2-Zytokinen erhöhen, die Sekretion von Th1-Zytokinen verringern, die Differenzierung von T-Zellen zu Th2 fördern oder eine Rolle bei der Hyperplasie und Hypertrophie glatter Bronchialmuskelzellen spielen. Die Profile von miRNAs korrelieren mit klinischen Merkmalen, einschließlich Lungenfunktion, Phänotyp und Schweregrad von Asthma.

Die meisten von der Industrie gesponserten biologischen klinischen Studien haben den obigen Ansatz effektiv genutzt, indem sie Studienteilnehmer ausgewählt haben, die den klinischen Phänotypen von SARP mit schwerem Asthma ähneln (hochintensive kontrollierte Medikationsschemata, häufige Exazerbationen und niedrige Lungenfunktion), dann aber einen erhöhten Biomarker (in Blut, ausgeatmetes Gas oder Sputum), die Patienten identifizieren sollten, die am wahrscheinlichsten auf einen spezifischen Immunmodulator innerhalb dieser klinischen Phänotypen ansprechen. Die Biologika in kürzlich veröffentlichten klinischen Studien zielen auf Typ-2-Entzündungswege ab und beschränken die Teilnahme auf Probanden mit erhöhten Typ-2-Biomarkern (Blut- oder Sputum-Eosinophile oder FeNO). Post-hoc-Responder-Analysen zur „Gruppierung“ von Biomarkern, um besser zu verstehen, welche Patienten den größten Nutzen von einem biologischen Immunmodulator haben, werden zu dem Verständnis führen, dass gleichzeitige Erhöhungen von mehr als einem Typ-2-Entzündungsbiomarker „High-Responder“-Patienten weiter identifizieren können.

Die Hypothese umfasst die Wirksamkeit der Behandlung mit Mepolizumab bei Patienten mit schwerem eosinophilem Asthma mit spätem Ausbruch und fixierter Obstruktion sowie die Beziehung zu klinischen und entzündlichen Biomarkern.

Forschungsfragen Gibt es eine Verbesserung der Exazerbationsrate bei Patienten mit spät einsetzendem schwerem eosinophilem Asthma unter Mepolizumab-Behandlung während ihres 1. Behandlungsjahres, und was sind die Merkmale von Non-Responder und Super-Responder? Gibt es eine Verbesserung beim Umbau glatter Muskelzellen? Gibt es Biomarker, um das Ansprechen auf die Behandlung mit Mepolizumab bei Patienten mit schwerem eosinophilem Asthma mit spätem Ausbruch vorherzusagen? Gibt es eine Verbesserung der Atmungsparameter? Gibt es eine Verbesserung der Asthmakontrolle und der Lebensqualität der Patienten? Ziele

Die Hauptziele dieser Studie sind:

1. Nachweis der Wirkung einer Behandlung mit Mepolizumab auf die Exazerbationsrate bei Patienten mit schwerem eosinophilem Asthma mit spätem Ausbruch und fixierter Obstruktion.
2. Merkmale von Non-Respondern und Super-Respondern zu identifizieren.

Die wichtigsten sekundären Ziele dieser Studie sind:

1. Jegliche Verbesserung des Umbaus (Verdickung der glatten Muskelzellen der Bronchien).
2. Alle möglichen Biomarker der Reaktion.
3. Jegliche Verbesserung der Atmungsparameter bei der Asthmakontrolle und der Lebensqualität der Patienten während der Behandlung mit Mepolizumab bei Patienten mit schwerem eosinophilem Asthma mit spätem Ausbruch und fixierter Obstruktion.

Design und Methoden der Studie Die Patienten werden aus den ambulanten Kliniken für Bronchialasthma an jedem Ort (8 an der Zahl) gesammelt, die die Bevölkerung Griechenlands abdecken. Alle diese Kliniken werden einbezogen, um die Rekrutierung zu verstärken und um Bronchoskopiker mit internationalem Einfluss einzubeziehen. Aufgrund der aktuellen Situation bezüglich der Covid-19-Pandemie gehen die Prüfärzte davon aus, dass diese klinische Studie die Arbeitsbelastung in unseren Kliniken nicht beeinträchtigt.

Insgesamt handelt es sich um eine prospektive multizentrische Studie mit acht Lungenkliniken. Fünf Pulmonary University Clinics, zwei des National Health System und ein Army General Hospital.

Die Studie wird einen Screening-Zeitraum von bis zu 2 Wochen umfassen, um die Eignung zu beurteilen und eine schriftliche Zustimmung nach Aufklärung einzuholen, eine Mepolizumab-Behandlungsdauer von 52 Wochen, einmal alle 4 Wochen, einschließlich Nachsorgeuntersuchungen alle 3 Monate während der Behandlung.

Die Studienpopulation besteht aus 45 Patienten mit spät einsetzendem schwerem eosinophilem Asthma und fixierter Obstruktion, die Mepolizumab im Alter von mindestens 20 Jahren erhalten.

Studienteilnahme, Bewertung und Nachbereitung:

Screening: Die Ermittler werden ausgewählte Probanden in den teilnehmenden Kliniken (Ambulanzen für schweres Asthma) screenen. Die Probanden kommen herein, um die Zustimmung zu unterzeichnen. Klinische Beurteilung und Verfahren sowie strukturelle Interviews werden während des Screenings durchgeführt. Probanden, die berechtigt/in der Lage sind, den Screening-Besuch abzuschließen, können dies am selben Tag tun, und falls erforderlich, werden sie ihre Ausgangsbewertung innerhalb von 2 Wochen abschließen. Bei Probanden mit anhaltender Asthma-Exazerbation sollte der Screening- und Behandlungsbeginn verschoben werden, bis der Prüfarzt der Ansicht ist, dass der Proband seinen Asthma-Ausgangsstatus wieder erreicht hat. Wenn die 2-wöchige Screening-Periode verstrichen ist, sollte der Proband als Screening-Versager betrachtet werden. Die Probanden bleiben während der Screening-Perioden auf ihrer aktuellen Erhaltungstherapie. Die Eignung der Patienten basiert auf den in den nächsten Abschnitten aufgeführten Kriterien.

Die Asthma-Exazerbationsgeschichte der letzten 12 Monate wird beim Screening-Besuch gemeldet. Außerdem werden Exazerbationen bei jedem Besuch wie gemeldet ausgewertet.

Vitalfunktionen werden beim Screening-Besuch, zu Studienbeginn und alle 3 Monate durchgeführt. Gemessen werden systolischer und diastolischer Blutdruck, Pulsfrequenz und Körpertemperatur.

Die Körpergröße in Zentimetern (cm) und das Körpergewicht in Kilogramm (kg) werden bei Screening-Besuchen gemessen. Der Body-Mass-Index (BMI) errechnet sich aus dem Gewicht in kg dividiert durch die Körpergröße in Metern zum Quadrat

Laborauswertung (Hämatologie, Blutchemie, Urinanalyse):

Venöses Blut und Urin werden zu Studienbeginn gesammelt. Hämatologie: Hämoglobin, Hämatokrit, Anzahl der roten Blutkörperchen, Anzahl der weißen Blutkörperchen mit Differential und Blutplättchen werden im Labor des Krankenhauses an jedem Standort gemessen. Grundlegende klinische Chemie und Urinanalyse werden bewertet. Das Sammeln von Urin für weibliche Probanden bewertet auch die Schwangerschaft.

Die IgE-Spiegel werden beim Screening-Besuch mit immunoCAP-Tests bewertet und als IE/ml angegeben.

Die folgenden Fragebögen werden verabreicht: 1) der Fragebogen zur Asthmakontrolle (ACQ-5) und der Asthmakontrolltest (ACT) zur Beurteilung der aktuellen Asthmakontrolle; 2) der Asthma Quality of Life Questionnaire (AQLQ+12) zur Beurteilung der Lebensqualität und der psychischen Morbidität. Zur weiteren Beurteilung der Schlafqualität 1) Athens Insomnia Scale (AIS), 2) Epworth Sleepiness Scale (ESS), 3) St. George's Respiratory Questionnaire (SGRQ) und 4) WHO (Five) Well-Being Index (WHO-5), 5) Schweregradskala der Ermüdung (FSS).

Ausgeatmetes Stickstoffmonoxid (NO) wird zu Studienbeginn und alle 3 Monate gemäß den Richtlinien der American Thoracic Society und den Angaben des Herstellers gemessen. Die FeNO-Konzentrationen werden als Teile pro Milliarde angegeben. Vor der Spirometrie werden Messungen durchgeführt.

Venöse Blutproben werden zu Studienbeginn zwischen 8 und 10 Uhr morgens und während der 52-wöchigen Behandlung mit Mepolizumab alle 3 Monate entnommen. Die absolute Eosinophilenzahl im Blut wird als Zellen/μl angegeben.

Spirometrie: Spirometrie A wird unter Verwendung der standorteigenen Ausrüstung bei den Besuchen durchgeführt (Baseline und alle 3 Monate). Alle Klinikbesuche müssen morgens erfolgen. Während des Behandlungszeitraums entspricht die Spirometrie den aktuellen ATS/ERS-Richtlinien und das Spirometer muss einen Ausdruck aller erzeugten Daten erstellen, der in den Notizen des Probanden gespeichert werden sollte. Das Spirometer wird gemäß den Anweisungen des Herstellers kalibriert. Die Spirometrie muss gleichzeitig (±1 Stunde) mit der Spirometrie von Besuch 0 durchgeführt werden. Die Probanden sollten versuchen, kurz wirksame Beta-2-Agonisten (SABAs) für ≥ 4 Stunden und LABAs für ≥ 15 Stunden vor dem Klinikbesuch auszusetzen, wenn möglich (GINA 2019). Zu den aufzuzeichnenden Bewertungen gehören FEV1, FVC, FEV1/FVC%, PEF und FEF25-75. Post-Bronchodilatator-Messungen werden bei jedem Besuch mit 200–400 mcg Albuterol oder Äquivalent durchgeführt.

Spirometrie B wird unter Verwendung der eigenen Ausrüstung des Zentrums bei den Besuchen durchgeführt (Basislinie, nach 6 Monaten und nach der Behandlung zum Zeitpunkt 52 Wochen). Spirometrie B umfasst Diffusion, Lungenvolumen und -kapazitäten.

Impulsoszillometrie (optional):

Impulsosillometrie (IOS) wird zu Studienbeginn und nach 52 Behandlungswochen durchgeführt. IOS umfasst den Widerstand bei 5 Hz – den Widerstand bei 20 Hz (R5-R20), ein Maß, das den Atemwiderstand kleiner bis mittlerer leitfähiger und peripherer Atemwege widerspiegelt, AX, ein Maß, das die Dehnbarkeit der peripheren Lungen (nämlich des Parenchyms und der kleinen peripheren Atemwege) widerspiegelt. , und die Reaktanz des Atmungssystems (X5), ein Maß, das Trägheit und Elastizität oder Kapazität widerspiegelt (einschließlich kleiner peripherer Atemwege).

Therapie mit Biologika:

Nach Abschluss der Screening-Besuche kann der Teilnehmer innerhalb eines Monats eine Behandlung mit einer biologischen Therapie (Mepolizumab) beginnen. Während der Therapie werden die Probanden von dem Pneumologen betreut, der sie zur Teilnahme an der Studie an die Forschungsgruppe überwiesen hat. Diese Lungenfachärzte werden als „assoziierte Lungenfachärzte“ bezeichnet. Die Behandlung erfolgt gemäß den Anweisungen des Produktherstellers.

Assoziierte Pneumologen, die während der Studie eine biologische Behandlung durchführen, müssen eine Vereinbarung zur Durchführung der Studie in Übereinstimmung mit dem Protokoll unterzeichnen, anerkennen, dass sie für die medizinische und die Studiendurchführung verantwortlich sind, und sicherstellen, dass der Assoziierte (und ihre Kollegen und Mitarbeiter), die an der Durchführung der Studie mitwirken, werden über ihre Pflichten informiert. Es werden Mechanismen vorhanden sein, um sicherzustellen, dass das assoziierte Personal während der gesamten Studie die entsprechenden Informationen und Unterstützung durch die Forschungsgruppe erhält.

Nachsorge während der biologischen Therapie: Zu Beginn und bei jedem Besuch zur Verabreichung der biologischen Therapie erfolgt die Sammlung von Informationen durch den assoziierten Pneumologen und mit Unterstützung durch die Forschungsgruppe, falls vom assoziierten Pneumologen angefordert, z. B. Forscher per Telefon oder persönlich. Gesichtskontakt wird den Patienten befragen. Darüber hinaus wird die Compliance vom Arzt auf der Grundlage der mündlichen Bestätigung des Patienten aufgezeichnet. Das Datum der Arzneimittelverabreichung sowie die unmittelbaren und verzögerten Nebenwirkungen werden bei jedem Besuch aufgezeichnet.

Sicherheitsüberwachung:

Aufgezeichnete unerwünschte Ereignisse (AEs) werden überwacht und nach Bedarf in Studienberichten zusammengestellt. Ein unerwünschtes Ereignis ist das Auftreten oder die Verschlechterung eines unerwünschten Anzeichens, Symptoms oder medizinischen Zustands, der nach Beginn des Studieneintritts auftritt. Beschwerden/Erkrankungen, die vor Beginn der Studienmedikation vorhanden waren, gelten nur dann als unerwünschte Ereignisse, wenn sie sich nach Beginn der Studienmedikation verschlechtern. Abnormale Laborwerte oder Testergebnisse stellen nur dann unerwünschte Ereignisse dar, wenn sie klinische Anzeichen oder Symptome hervorrufen, als klinisch signifikant gelten oder eine Therapie erfordern. Auch unerwünschte Ereignisse im Zusammenhang mit Covid-19 sind enthalten. Wenn einem Partner-Pneumologen oder Forschungspersonal ein mit einem Produkt verbundenes UE bekannt wird, kann es dem Hersteller gemäß seiner lokalen Standardpraxis für spontane UE-Meldungen gemeldet werden. Eine Kopie des Berichts sollte auch an den Studienkoordinator gesendet werden. Schwerwiegende unerwünschte Ereignisse (SAE) werden auf den eCRF-Seiten gemeldet, und innerhalb von 24 Stunden sind alle Prüfer dafür verantwortlich, das Zentralkomitee in Thessaloniki zu informieren. Dann informiert das Zentralkomitee den wissenschaftlichen Beirat und die griechische medizinische Agentur. Außerdem wird der Hauptforscher jedes Zentrums zusammen mit dem Zentralkomitee medizinisches und wissenschaftliches Urteil fällen, um zu entscheiden, ob der Patient die Behandlung abbrechen soll oder nicht.

Schwangerschaftsbericht:

Zunächst müssen Patientinnen beim Screening einen Schwangerschaftstest machen. Wenn eine weibliche Probandin uns während der Behandlung eine Schwangerschaft meldet, wird sie gebeten, sich von der Studie zurückzuziehen (um Verzerrungen zu vermeiden). Anschließend wird sie gefragt, ob sie die Behandlung außerhalb dieses Protokolls fortsetzen und überwacht werden möchte die Ambulanz des jeweiligen Zentrums.

Pre-Screening und Screening-Fehler:

Den Probanden wird zum Zeitpunkt der Unterzeichnung der Einwilligung eine Studiennummer zugewiesen. Probanden, die unterschrieben haben, aber nicht zur Bewertung der Screening-Besuche kommen, werden als Vor-Screen-Fehler angesehen. Für diese Fächer werden keine Daten in der Datenbank erfasst.

Probanden, die mindestens einen der beiden Screening-Besuche absolvieren, aber keine biologische Therapie einleiten, werden als Screening-Versagen bezeichnet. Informationen, die für das Vorscreening und Screening-Fehler gesammelt werden müssen, werden in der Datenbankvervollständigung aufgeführt.

Entzugsbesuch:

Wenn sich ein Teilnehmer während der Nachbeobachtung entscheidet, die Studie abzubrechen (aus anderen Gründen als dem Verlust der Nachverfolgung), kann er gebeten werden, an einem Abbruchbesuch teilzunehmen (falls vom Prüfer als notwendig erachtet und mit Zustimmung). Während des Besuchs können dem Teilnehmer im Rahmen der Sammlung klinischer Informationen Fragen zu seinem aktuellen Zustand gestellt werden, z. B. zu Asthma und nasalen Symptomen, Exazerbationen und dem Fortschreiten der erhaltenen Behandlung.

Entnahme und Verarbeitung von Blutproben:

Blutproben werden bei der Grunduntersuchung, nach 6 Monaten und nach Abschluss der Behandlung entnommen. Nach der Entnahme der Blutproben werden diese für eine vollständige Gerinnselbildung etwa eine halbe Stunde lang ungestört gelassen. Die Probe wird dann zentrifugiert, um das Serum vom Gerinnsel zu trennen. Nach der Zentrifugation wird das Serum bis zur Analyse bei -20° C in Eppendorf-Röhrchen gelagert. Die Blutphänotypisierung wird auch durch Durchflusszytometrie bewertet.

Induziertes Sputum (optional):

Induziertes Sputum wird zu Studienbeginn vor Beginn der Behandlung und nach Abschluss der Behandlung gemäß dem Bericht der ERS-Task Force durchgeführt, in dem eine detaillierte, auf Expertenkonsens basierende Empfehlung für die Verarbeitung von induziertem Sputum vorgeschlagen wird.

Bei den Besuchen wird nach Abschluss der routinemäßigen spirometrischen Untersuchungen eine Sputuminduktion durchgeführt.

Das induzierte Sputum wird innerhalb von zwei Stunden nach Ende des Induktionsverfahrens am Forschungszentrum verarbeitet. Sputumzellen und Zellsuspensionsüberstand werden zur Analyse bei -80 °C gelagert. Nach Sammeln des induzierten Sputums wird der Überstand der Probe bis zur Analyse bei -20° C in Eppendorf-Röhrchen gelagert. Im Anschluss an diese Verfahren erfolgt gemäß den Richtlinien als nächstes die Laborauswertung des Sputums.

Bronchoskopie, Entnahme und Verarbeitung von Bronchialbiopsien und Waschproben (optional): Bei den Visiten wird nach schriftlicher Zustimmung des Patienten eine Endoskopie mit Bronchialbiopsien, Bronchialwaschprobe (Visite 0b) durchgeführt. Insbesondere wird eine separate Einverständniserklärung beigefügt, die von jedem Patienten zu unterzeichnen ist. Eine Bronchoskopie wird zu zwei Zeitpunkten durchgeführt (Basislinie vor Beginn der Behandlung und nach Abschluss der Behandlung). Flexible Bronchoskopie und diagnostische Techniken wurden unter überwachter Anästhesie durchgeführt, wie von der American Thoracic Society und der British Thoracic Society empfohlen.

Gewebeproben werden mittels Formaldehyd oder Glutaraldehyd im Aufblas- oder Tauchverfahren fixiert und in Paraffin eingebettet. Atemwege werden nach Ermessen des Pathologen während der diagnostischen Dissektion systematisch entnommen oder entnommen. Aufeinanderfolgende Schnitte mit einer Dicke von 0,5, 5 und 30 &mgr;m wurden aus jedem Block geschnitten und unter Verwendung der Trichrom-Technik von Masson, Hämatoxylin und Eosin bzw. Hämatoxylin gefärbt. Die immunhistochemische Färbung wird mit den folgenden mAbs durchgeführt: Anti-Mastzell-Tryptase-Klon AA1 (Dako UK), Anti-Alpha-Glattmuskel-Aktin-Klon 1A4 (Dako UK), Anti-Eosinophilen-Major-Basic-Protein-Klon BMK-13 (Monosan, Niederlande). ), Anti-Neutrophilen-Elastase-Klon NP57 (Dako UK) und Anti-Endothelium-Klon EN4 (Monosan, Niederlande) oder geeignete Isotypkontrollen verwendet.

Die endobronchialen Biopsien werden von einem einzigen Beobachter beurteilt, der für die klinischen Merkmale blind ist (ZEN 2012 Bildanalysesoftware für Lichtmikroskopie, Carl Zeiss AG, Deutschland) und als Mittelwert von Messungen ausgedrückt, die von mindestens zwei Schnitten entweder von unabhängigen durchgeführt wurden Biopsien oder als nicht zusammenhängende Gewebeschnitte mindestens 20 μm von derselben Biopsie entfernt. Die Integrität des Epithels wird durch Messung der Länge des intakten und desudierten Epithels beurteilt. Diese werden als Prozentsatz der gesamten Länge der retikulären Basalmembran (RBM) ausgedrückt. Die Vaskularität wird anhand der Chalkley-Zählung gemessen, einem Ersatzwert sowohl für die Gefäßdichte als auch für die Gefäßfläche. Ein Chalkley-Okularraster (NG52 Chalkley Point Array, Pyser-SGI Ltd, UK) wird bei x200 verwendet, um Chalkley-Zählungen in vier nicht überlappenden vaskulären Hotspots (6) zu messen. Der Gehalt an glatter Atemwegsmuskulatur wird als Anteil an der Gesamtfläche bestimmt. Entzündungszellen wurden als Anzahl kernhaltiger Zellen/Fläche der Lamina propria ausgedrückt.

Bronchialwaschproben werden umgehend ins Labor transportiert und bei -80 Grad gelagert. Die Untersuchung von Bronchialwaschflüssigkeiten wird zu einem späteren Zeitpunkt durchgeführt, um mehrere Biomarker zu bestimmen.

Analyse von Entzündungsbiomarkern mit Flow Cytometry Analysis (FACS) oder ELIZA:

Eingeschlossene Biomarker vor und nach der Behandlung mit Mepolizumab zu zwei oder drei Zeitpunkten (zu Studienbeginn, nach 6 Monaten Behandlung und nach dem Besuch nach Abschluss der Behandlung): Lymphozyten-Untergruppen, Th2/Th17-Zytokine, Chemokine, mikroRNA-Expression, die durch Durchflusszytometrie oder ELISA quantifiziert werden muss) in biologischen Flüssigkeiten (Blut, Serum, Bronchialspülungen, Sputum und Sputumüberstand).

Panel-Kits und geeignete Antikörper werden durch Durchflusszytometer-Analyse unter Verwendung eines BD FACS Calibur-Systems (BD Biosciences, San Jose, CA) gemäß den Empfehlungen und Anweisungen des Herstellers getestet.

ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) ist eine plattenbasierte Assay-Technik zum Nachweis und zur Quantifizierung von Substanzen wie Peptiden, Proteinen, Antikörpern und Hormonen. ELISA-Kits werden mit dem Spektrophotometer VICTOR X3 gemäß den Empfehlungen und Anweisungen des Herstellers analysiert.

Allergietest (falls zutreffend) Der atopische Status des Patienten wird (falls nicht verfügbar) beim Screening-Besuch durch den Haut-Prick-Test (SPT) mit einem Standardpanel von Aeroallergenen zum Nachweis von Gesamt-IgE-Antikörpern gegen verschiedene häufige inhalative Allergene bewertet.

Datenbank Eine elektronische Datenerfassungsplattform wird die Methode sein, die von der Baseline alle 3 Monate bis zur 1-Jahres-Follow-up für diese Datenbank verwendet wird. Während der Behandlungsbesuche werden Papierformulare/Fragebögen vom assoziierten Pneumologen ausgefüllt. Jeder Standort wird spezifische Daten in eine elektronische Datenbank eingeben. Jeder Patient wird eindeutig durch eine Probandennummer identifiziert, die sich aus der von der zuständigen Überwachungsstelle zugewiesenen Standortnummer und einer vom Prüfarzt zugewiesenen fortlaufenden Nummer zusammensetzt. Nach Unterzeichnung der Einwilligungserklärung erhält der Patient vom Prüfarzt die nächste fortlaufende Nummer. Der Standort muss sich mit dem zentralen Forschungspersonal in Verbindung setzen und die angeforderten Identifizierungsinformationen für den in der elektronischen Datenbank registrierten Patienten bereitstellen. Die Behandlungsbesuchsformulare werden auch an das zentrale Forschungspersonal gesendet. Das autorisierte Studienpersonal ist für die Datenerhebung, Bearbeitung und auch den Schutz der gesammelten Daten an seinem eigenen Standort verantwortlich, und die Datenbank wird täglich gesichert. Die Qualitätsprüfung/-kontrolle liegt in der gemeinsamen Verantwortung aller beteiligten Personen und des zentralen Forschungspersonals [Datentreuhänder].

Berechnung der Stichprobengröße G-Power-Analyse Die Stichprobengröße wird unter Verwendung der G*Power-Software (Die Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf, Deutschland) berechnet. Der Unterschied in der jährlichen Exazerbationsrate der Patienten mit spät einsetzendem schwerem eosinophilem Asthma vor und nach der Behandlung mit Mepolizumab ist der primäre Endpunkt der Studie. In der DREAM-Studie (eine der beiden einzigen Studien, die bisher ähnliche Ergebnisse wie unser primärer Endpunkt gemeldet hat) wurde berichtet, dass die jährliche Exazerbationsrate von Patienten mit schwerem Asthma nach Beginn der Behandlung mit Mepolizumab von 3,6 auf 1,33 zurückging. Unter Verwendung dieser Daten und eines zweiseitigen Tests mit einer Power von 0,95 und einem statistischen Signifikanzniveau von 0,05 berechneten die Forscher eine Effektgröße von 0,556, was auf eine Gesamtstichprobengröße von 45 Teilnehmern hinweist.

Statistische Plananalyse Die statistische Analyse wird unter Verwendung von SPSS (Version 21.0 der Statistiksoftware IBM SPSS, Armonk, NY, USA) durchgeführt. Kategoriale Variablen werden als Zahlen (n) und Prozentsätze (%) angegeben, kontinuierliche Variablen als Mittelwert ± SD, falls normalverteilt, oder Median- und Interquartilsbereiche, falls andernfalls. Gegebenenfalls werden Variablen ohne Normalverteilung transformiert. P < 0,05 wurde als statistisch signifikant akzeptiert. Der Shapiro-Wilk-Test wird durchgeführt, um parametrische von nichtparametrischen Variablen zu trennen. Der T-Test bei gepaarten Stichproben für parametrische oder der Wilcoxon-Vorzeichen-Rang-Test für nicht-parametrische Variablen wird verwendet, um Unterschiede in den vor und nach der Mepolizumab-Behandlung gemessenen Variablen zu erkennen.

Es gibt keinen Vergleichsarm, da jeder Patient die Kontrolle über sich selbst hat. Es gibt Baseline-Merkmale (klinische und Labor-Biomarker), die zu Beginn, alle 3 Monate und nach 52-wöchigem Behandlungsabschluss gemessen werden. Studienendpunkte umfassen die Analyse all dieser Biomarker sowie die Identifizierung der Merkmale von Non-Respondern und Super-Respondern. Zu den sekundären Endpunkten gehört auch die Bewertung der in den Methoden genannten Biomarker als Assessments. Die statistische Analyse wird zunächst anhand der Anzahl der Patienten durchgeführt, die den 52-wöchigen Behandlungszeitraum abgeschlossen haben. Zweitens werden Patienten, die die 52-wöchige Behandlung nicht abgeschlossen haben, separat analysiert und schließlich werden diese beiden Gruppen miteinander verglichen.

Genauer gesagt werden die Prüfärzte mit einer univariaten Analyse (zweiseitige unabhängige Stichprobentests) Assoziationen/Korrelationen zwischen allen Ausgangsergebnissen im Vergleich zu denen nach Mepolizumab-Behandlungen (alle 3 Monate bis 1 Jahr Behandlung) testen: Biomarker im Sputum und im Blut , klinische Ergebnisse. In ähnlicher Weise werden univariate Assoziationen zwischen Ergebnissen und persönlichen/demografischen Merkmalen getestet, um potenzielle Confounder zu identifizieren. Signifikante Assoziationen werden dann mit angepassten Regressionsmodellen getestet. Assoziationen/Korrelationen werden zu Studienbeginn separat bewertet und alle 3 Monate während der Behandlung sowie zu Studienbeginn und nach 1 Jahr Mepolizumab-Behandlung nachuntersucht. Außerdem wird für jeden Biomarker eine Untergruppierungsanalyse durchgeführt, um die Biomarker-Ebene für das Ansprechen auf die Behandlung zu identifizieren.

Der T-Test bei gepaarten Stichproben für parametrische oder der Wilcoxon-Vorzeichen-Rang-Test für nicht-parametrische Variablen wird verwendet, um Unterschiede in den vor und nach der Mepolizumab-Behandlung gemessenen Variablen zu erkennen. Insbesondere werden die Biomarkerwerte zu Studienbeginn mit den Werten nach 1-jähriger Behandlung mit Mepolizumab verglichen.

Das Gesamtansprechen auf die Behandlung in einem Jahr (von der Baseline bis 1 Jahr nach Behandlungsbeginn) für jeden Endpunkt wird bei jedem Patienten mit einem Paartest abhängiger Stichproben (parametrische und nicht-parametrische Paartests) gemessen. Dann wird das Ansprechen auf die Behandlung als Veränderung (absolute und prozentuale Veränderung) des Ergebnisses in einem Jahr definiert. Die Prüfärzte bewerten Prädiktoren, die das Ansprechen auf die Behandlung (Veränderung) beeinflussen, wie z. B. Biomarker, indem sie mehrere Regressionsmodelle für jedes klinisch-pathologische Ergebnis verwenden. Für Ergebnisse mit mehr als 2 Beobachtungen pro Person während des Studienzeitraums verwenden die Prüfärzte gemischte Modelle unter Verwendung der wiederholten Messungen des Ergebnisses. Alle Tests sind zweiseitig mit einem statistischen Signifikanzniveau von 5 %.