성인의 폐렴구균성 비인두 및 구강인두 캐리지

연구 센터:

연구는 다음에 의해 수행됩니다.

1. 보이보디나 공중 보건 연구소

   • 질병 통제 예방 센터 및 미생물 센터

2. Novi Sad 건강 관리 센터

   • 일반 의학과.

샘플 처리 NP 및 OP 캐리지를 확인하기 위해 샘플링에는 NP 및 OP 면봉이 포함됩니다. 면봉은 Novi Sad 건강 관리 센터의 일반의가 수집하여 수집 후 24시간 이내에 Novi Sad Vojvodina 공중 보건 연구소의 미생물학 센터로 운반됩니다. 멸균 면봉 와이어 스왑을 전방 콧구멍에 삽입하고 NP 스왑 벽을 부드럽게 문지른 후 즉시 운송 매체(Copan Venturi Transystem, Brescia, Italy)에 넣습니다.

실험실 절차 실험실 내에서 NP 면봉은 200μl의 면봉으로 접종된 STGG 배지로 분석됩니다. 0.5% 효모 추출물(THY)과 1ml의 토끼 혈청이 함유된 5.0ml Todd Hewitt 액체 배지로 옮겨지고 35-37℃에서 배양됩니다. 6시간 동안 °C. 배양된 국물은 양 혈액 한천에 도금되고 35-37 °C에서 5% CO2에서 배양됩니다. 배양 18-24시간 후, 연쇄상구균과 유사한 알파-용혈 콜로니의 출현에 대해 플레이트를 검사할 것입니다. 양성 검체를 배양하고 광인두판 및 담즙 용해도 검사를 시행합니다.

분자 혈청형

DNA 추출 PCR 반응을 위한 DNA 추출물을 얻기 위해 혈액 한천 플레이트의 하룻밤 성장을 0.85% NaCl 300μl에 현탁하고 70°C에서 15분 동안 가열한 다음 2분 동안 회전시키고 상층액을 제거합니다. 펠릿은 10 μl mutanolysin 및 8 μl 히알루로니다아제가 첨가된 50 μl TE 완충액에 현탁되고, 37°C에서 30분 동안(밤새까지) 유지되고, 100°C에서 10분 동안 가열되고, 4분 동안 회전됩니다. 2.5 μl 이하의 상층액이 DNA 템플릿으로 사용됩니다. 추출물은 PCR 테스트 전까지 -20°C에서 보관됩니다(9).

S. pneumoniae의 식별 S. pneumoniae의 식별은 CDC 및 Quanta Biosciences PerfeCTa1 qPCR ToughMix1, Low RoxTM(Quanta Biosciences, Beverly, USA)에서 권장하는 프라이머 및 프로브를 사용하여 lytA 유전자를 증폭함으로써 달성됩니다(10). LytA 양성 샘플은 혈청형 식별을 위해 추가로 분석됩니다.

혈청형 식별 기존의 다중 PCR 분석은 폐렴구균 혈청형 추론을 위한 CDC 권장 계획 및 프라이머 및 2X PCR 버퍼 - QIAGEN 다중 PCR 키트(Qiagen, Hilden, 독일)를 사용하여 일련의 다중 반응으로 수행됩니다. PCR 산물은 에티디움 브로마이드로 염색된 2% NuSieve 아가로즈 겔(Cambrex Bio Science, Inc., Rockland, ME)에서 분석될 것입니다. 젤 이미지는 BioDocAnalyze 시스템(Analytik Jena, Jena, Germany)으로 기록됩니다.

Real Time PCR은 기존 PCR에 어려움이 있는 경우 선택적으로 수행됩니다. IT는 혈청형의 지리적 유병률을 기반으로 CDC 권장 계획을 사용하여 21개의 혈청형을 포함하는 일련의 21개의 모노플렉스 분석으로 수행될 것입니다. 분석법은 FAM, Rox(또는 Cy5) 및 Hex 채널에서 각각 표적을 검출하는 순차적 삼중 형식(한 반응에서 3개의 표적/혈청형)으로 다중화됩니다. 반응은 특정 프라이머 및 프로브 및 Invitrogen-Platinum Quantitive PCR SuperMix(Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA)를 사용하여 ABI 7500 Instruments(Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA)에서 수행됩니다.

감수성 시험 Optochin, Oxacilin, Norfloxacin, Erytromycin, Clindamycin, Tetracycline 및 Trimetroprim-sulfometoxazole에 대한 Spn 분리주의 감수성은 European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing(EUCAST, www.eucast.org)에 따라 Diffusion 방법으로 결정됩니다.

이 기준선 평가는 설명적인 현재 결과만 제시하기 위해 고려하고 있지만 비교 분석을 위해 별도로 고려하지는 않습니다.

각 환자에 대해 수행된 실험실 테스트 결과는 환자 재료의 샘플링을 지시한 선출된 의사에게 전달됩니다.

연구 절차 성인은 Novi Sad 건강 관리 센터에서 건강 검진 중에 선출된 의사에 의해 모집됩니다.

연구 목적에 대한 구두 및 서면 설명(부록 1)을 제공한 후, 등록 전에 피험자로부터 정보에 입각한 동의(부록 2)를 받습니다. 참가자로부터 얻은 개인 및 기밀 정보는 제거됩니다. 단, 샘플링 날짜, 연령, 성별, 이전 상기도 감염 데이터, 참가자의 가구에 거주하는 0-10세 자녀(형제) 수를 포함한 인구 통계학적 정보를 제외하고 폐렴구균 및 인플루엔자 예방접종 이력(인플루엔자 예방접종은 폐렴구균 중복감염을 예방할 수 있기 때문), 참가자 및 가족 구성원의 흡연 습관 및 거주지에 대한 정보(설문지 설문지 - 부록 3).

샘플은 연구 대상당 하나의 NP 면봉으로 제공됩니다. 모든 참가자는 한 번만 할당됩니다.

확진 사례는 테스트(PCR 또는 ELISA) 후 양성 결과를 얻은 모든 실험실 테스트 참가자입니다.

통계 분석 및 샘플 크기 타당성 데이터 수집 Novi Sad의 설문으로 얻은 모든 응답자의 특성, 참가자 샘플의 실험실 테스트 테스트 결과 및 Spn 혈청형의 최종 특성은 특별히 설계된 데이터베이스에 입력됩니다. 참가자의 개인 정보는 삭제됩니다.

조사관은 통계학자와 함께 수집된 데이터를 분석합니다.

샘플 크기 타당성 모집단 유병률을 추정하는 연구(11)의 샘플 크기 계산에 따라 350~500개의 샘플을 수집할 계획입니다. 우리는 Spn에 대해 최대 10% PCR 양성인 폐렴구균을 검출하는 것으로 추정합니다. 50세 이상 성인의 총 수는 약 120,000명이므로 전체 대상 인구의 0.4%까지 표본을 수집할 것으로 예상합니다.

예상 결과 신중하게 연구를 수행한 후, 우리는 50세 이상의 성인 중 Spn 보균자가 전체 인구의 10% 미만에 존재할 것으로 예상했습니다. 또한 PPV 또는 PCV에 포함되는 Spn 혈청형이 검사 대상자 사이의 전체 분포에서 혈청형의 60% 및 50% 이상을 나타낼 것으로 추정합니다.

통계적 방법 우리는 50세 이상의 참가자에서 위험 요인과 폐렴구균의 NP 및 OP 보균 사이의 연관성을 조사할 것입니다. 대상 인구에서 가능한 위험 요인으로 다음 요인을 조사합니다: 연령, 성별, 이전 상기도 감염 데이터, 폐렴구균 및 인플루엔자 예방접종 이력이 있는 참가자의 가구에 거주하는 0-10세 어린이(형제) 수, 참가자 및 가족 구성원의 흡연 습관 및 거주지에 대한 정보. 이러한 요인은 단변량 및 다변량 분석(적절한 경우)으로 분석됩니다. 또한, 비인두 배양이 Spn에 대해 양성인 참가자의 비율로서 NP 및 OP 캐리지의 유병률 및 상응하는 95% 신뢰 구간이 추정될 것이다. 모든 기술 분석은 SPSS Statistics 소프트웨어 버전 21.0(IBM Corp., Armonk, NY, USA)을 사용하여 수행됩니다.