줄기세포와 전자기 자극의 병용을 통한 독성 시신경병증의 치료 (Magnovision)

이 전향적 공개 임상 3상 연구는 2019년 4월부터 2021년 4월까지 앙카라 대학교 의과대학 안과에서 수행되었습니다. 독성 시신경병증 환자 18명의 36안이 연구에 포함되었습니다. 일차 독성 시신경병증(TON) 진단은 응급 또는 집중 치료 클리닉에서 이루어졌습니다. 첫 중재 후 3개월 이내에 입원한 환자를 연구에 포함시켰다. 등록된 모든 환자는 당뇨병성 망막병증 연구(ETDRS) 차트(Topcon CC 100 XP, 일본)의 조기 치료와 함께 BCVA(best-corrected visual acuity) 측정을 포함하여 완전한 일상 안과 검사를 받았습니다. RTVue XR(Avanti, Optovue, Fremont, CA, USA)의 광간섭단층혈관조영술(OCTA)로 환자를 추가로 평가하여 전형적인 공동 등록된 en을 제공하는 신경절 세포 복합체(GCC) 층의 변화를 분석하고 측정했습니다. -얼굴 및 단면 다중 모드 이미징 플랫폼. 시신경의 기능 평가는 Compass 24/2 시야(VF) 검사(Compass, CenterVue, Padova, Italy) 및 120' 패턴 시각 유발 전위(pVEP) 검사(Mon 2018F, Metrovision, Perenchies, France)로 이루어졌다.

피험자 18 TON 환자의 36안이 연구에 포함되었습니다.

포함 기준은 여러 매개변수로 구성되었습니다.

• 3개월 이내 독극물에 중독된 경우
• BCVA가 35자 이상인 환자
• 어느 정도의 시야 손실
• 18세 이상의 환자

제외 기준은 여러 매개변수로 구성되었습니다.

• 3개월 이상 독극물에 중독된 경우
• BCVA가 35자 미만인 환자: 시야 검사를 올바르게 수행하기 위해
• 협조할 수 없는 신경학적 후유증
• 흡연

우리 클리닉에 입원하기 전에 모든 메탄올 중독 환자에게 동일한 치료 프로토콜이 적용되었습니다. 모든 환자에게 혈액투석, 중탄산염 및 에탄올을 투여하였다. 유사한 인구통계학적 특성에 따라 사례를 3개 그룹으로 나누었다.

그룹 1: 한 눈에 WJ-MSC 및 rEMS 병용 치료를 받은 12명의 환자 12안으로 구성. WJ-MSC는 rEMS 적용 전에 한 번만 적용되었습니다. rEMS 적용은 WJ-MSC 적용 10일 후 시작하였다. rEMS는 WJ-MSC 적용 후 30분 동안 맞춤형 헬멧으로 적용하였다. rEMS 적용은 1주일 간격으로 10회 반복하였다. 코스는 BCVA, FPDI, GCC 두께, pVEP-p100 대기 시간 및 진폭 매개변수를 적용 전과 3개월에 비교하여 평가되었습니다.

그룹 2: 한쪽 눈에 rEMS만 치료한 12명의 환자 12안으로 구성. rEMS는 맞춤 설계된 헬멧과 함께 30분 동안 적용되었습니다. rEMS 적용은 1주일 간격으로 10회 반복하였다. 코스는 BCVA, FPDI, GCC 두께, pVEP-p100 대기 시간 및 진폭 매개변수를 적용 전과 3개월에 비교하여 평가되었습니다.

그룹 3: 2안에서 WJ-MSC만을 처리한 6명의 환자 12안으로 구성. WJ-MSC는 양쪽 눈에 한 번만 적용되었습니다. 코스는 BCVA, FPDI, GCC 두께, pVEP-p100 대기 시간 및 진폭 매개변수를 적용 전과 3개월에 비교하여 평가되었습니다.

탯줄 Wharton 젤리 유래 중간엽 줄기세포 제제 본 연구에 사용된 중간엽 줄기세포는 모체의 동의하에 단일 기증자로부터 동종이계로 수집된 탯줄의 Wharton 젤리로부터 분리되었다. 탯줄 샘플은 여러 단계에 따라 처리되었습니다. 간략하게, 제대 조직을 인산염 완충 식염수(Lonza, Switzerland)로 2회 세척하고 Wharton's jelly 부분을 집게와 메스를 사용하여 잘게 썰었다. L-글루타민(Bilogical Industries, Israel) 및 10% 인간 AB 혈청(Capricorn, 독일)이 없는 Dulbecco's modified Eagle's medium F12(DMEM)-저포도당이 있는 세포 배양 접시(Greiner Bio-One, 독일)에서 다진 조각을 배양했습니다. ), 1% 10.000 U/mL 페니실린 및 10.000 μg/mL 스트렙토마이신(Gibco, USA). 모든 세포 준비 및 배양 절차는 현재 cGMP(Good Manufacturing Practice) 인증 실험실(Onkim Stem Cell Technologies, 터키)에서 수행되었습니다. 배양-확장된 세포를 다음 실험에 사용될 때까지 표준 동결보존 프로토콜을 사용하여 P3에서 동결보존하였다. 동결보존제로는 Dimethyl Sulfoxide 55%와 Dextran 40 5%를 함유한 CryoSure-DEX40(WAK-Chemie Medical, Germany)을 사용하였다. 세포는 분화(CD) 표면 마커의 양성 클러스터, CD90, CD105, CD73, CD44, CD29 및 CD34, CD45 및 CD11b에 대한 음성의 발현을 결정하기 위해 유세포 분석을 사용하여 동결 보존 시점에 특성화되었습니다. 실시간 중합효소연쇄반응(qPCR)을 이용하여 종양괴사알파(TNF알파), 비멘틴(VIM) 등 여러 유전자의 발현을 분석했다. 또한 마이코플라스마 및 엔도톡신 분석(각각 멸균 분석과 결합된 PCR 및 LAL 테스트 사용)과 같은 품질 관리 분석도 완료되었습니다. 주입을 위해 준비되기 전에 동결 보존으로부터 세포를 용해시켰다. 각 치료에 대한 평균 세포 생존율은 90.0% 이상이었고, 각 환자는 1.5ml 식염수에서 2-6 x 106 세포를 받았습니다.

제대 WJ-MSC 주입 배양액의 WJ-MSC 현탁액은 콜드 체인을 통해 수술실로 전달되어 24시간 이내에 사용되었습니다. 총 1.5ml의 WJ-MSC 현탁액을 각 눈의 테논낭하 공간에 즉시 주입했습니다. 절차는 proparacaine hydrochloride drop (Alcaine, Alcon, USA) 및 멸균 조건으로 국소 마취하에 수행되었습니다. 5/0 무외상성 견인 봉합사는 적용 부위에 쉽게 접근하고 조작할 수 있도록 윤부에 적용되었습니다. 수술 후 로테프레드놀과 토브라마이신 복합 점안액을 1주일 동안 하루 4회, 경구용 amoxicillin clavulonate(1gr)를 5일 동안 하루 2회 점안하였다.

망막 반복 전자기 자극(rEMS) rEMS 헬멧(MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, 앙카라, 터키)은 2000 밀리가우스의 전자기장 강도, 42 헤르츠의 주파수, 30분 동안 지속되는 전자기장으로 망막과 시각 경로를 자극했습니다. 이 값은 이전에 다른 임상 및 전임상 연구에 효과적인 것으로 결정되었습니다.

기간

환자들은 여러 연구 시점에서 평가되었습니다:

• T0(기준선): 적용 직전
• T1: 지원 첫 달
• T2: 신청 3개월차

1차 결과 측정 • ETDRS 시력: T0 및 T2 검사에서 얻은 시력 ​​점수를 분석하고 통계 테스트를 사용하여 비교하여 효율성을 결정했습니다.

이차 결과 측정

• 시야 민감도: 안저 시야 편차 지수(FPDI, %) FPDI는 전산화된 시야 측정 기록의 24/2 시야에서 검사되었습니다. FPDI는 100개의 깜박이는 점 중 몇 개와 환자가 올바르게 볼 수 있는 시야의 백분율을 설명하는 데이터를 제공합니다. VF 분석을 위해 테스트 중 실수를 피하기 위해 적용 전에 연습 라운드를 세 번 수행했습니다.

• 신경절 세포 복합체 두께(GCC 두께, µm): GCC는 중심와 영역 3x3mm에서 내부 제한막에서 내부 망상층까지의 두께입니다. OCTA 장치에 의해 자동으로 수행되는 측정입니다. GCC는 신경절 세포와 망막 신경 섬유의 총 두께입니다.

• 패턴 시각 유발 전위(pVEP) pVEP는 빛 자극에 반응하는 광 경로의 전기적 활동을 측정하는 객관적인 테스트입니다. 120' 패턴은 모든 망막 사분면의 반응을 나타냅니다. 측정은 양쪽 눈에 대한 ISCEV 표준에 따라 수행되었습니다. p100 암시적 시간과 진폭을 결합한 120' 패턴 VEP 프로토콜을 사용하여 수치 결과를 생성했습니다.