幹細胞と電磁刺激の組み合わせによる中毒性視神経障害の治療 (Magnovision)

この前向き非盲検臨床第 3 相試験は、2019 年 4 月から 2021 年 4 月の間にアンカラ大学医学部眼科で実施されました。 中毒性視神経症の 18 人の患者の 36 の目が研究に含まれていました。 一次中毒性視神経症 (TON) の診断は、緊急または集中治療クリニックで行われました。 最初の介入後 3 か月以内に入院した患者が研究に含まれました。 登録されたすべての患者は、糖尿病性網膜症の早期治療研究（ETDRS）チャート（Topcon CC 100 XP、日本）を使用した最高矯正視力（BCVA）測定を含む、完全な定期的な眼科検査を受けました。 患者は、RTVue XR (Avanti、Optovue、カリフォルニア州フレモント) の光コヒーレンストモグラフィー血管造影 (OCTA) でさらに評価され、典型的な共同登録された en を提供する神経節細胞複合体 (GCC) 層の変化を分析および測定しました。 -顔と断面のマルチモーダル イメージング プラットフォーム。 視神経の機能評価に続いて、Compass 24/2 視野 (VF) テスト (Compass、CenterVue、パドバ、イタリア) および 120 フィート パターン視覚誘発電位 (pVEP) テスト (Mon 2018F、Metrovision、Perenchies、フランス) が行われました。

被験者 18 人の TON 患者の 36 眼が研究に含まれました。

包含基準は、いくつかのパラメーターで構成されていました。

• 3ヶ月以内に毒物中毒にかかった場合
• BCVAが35文字以上の患者
• あらゆる程度の視野喪失
• 18歳以上の患者

除外基準は、いくつかのパラメーターで構成されていました。

• 3か月以上の毒物による中毒の場合
• BCVAが35文字未満の患者：視野検査を正しく行うために
• 協力できない神経学的後遺症
• 喫煙

私たちの診療所に入院する前に、メタノール中毒のすべての患者に同じ治療プロトコルが適用されました。 血液透析、重炭酸塩およびエタノールがすべての患者に投与されました。 ケースは、同様の人口統計学的特徴に従って 3 つのグループに分けられました。

グループ 1: 片眼に WJ-MSC と rEMS の組み合わせで治療された 12 人の患者の 12 眼で構成されます。 WJ-MSC は、rEMS アプリケーションの前に 1 回だけ適用されました。 WJ-MSC 塗布後 10 日目に rEMS 塗布を開始した。WJ-MSC 塗布後 30 分間、カスタムデザインのヘルメットで rEMS を塗布した。 rEMS の適用は、1 週間の間隔で 10 回繰り返されました。 コースは、BCVA、FPDI、GCC の厚さ、pVEP-p100 の潜伏期および振幅パラメータを申請前および申請の 3 か月前に比較することによって評価されました。

グループ 2: 片眼のみ rEMS で治療された 12 人の患者の 12 眼で構成されます。 rEMS はカスタム デザインのヘルメットに 30 分間適用されました。 rEMS の適用は、1 週間の間隔で 10 回繰り返されました。 コースは、BCVA、FPDI、GCC の厚さ、pVEP-p100 の潜伏期および振幅パラメータを申請前および申請の 3 か月前に比較することによって評価されました。

グループ 3: 2 つの眼で WJ-MSC のみで治療された 6 人の患者の 12 眼で構成されます。 WJ-MSC は両眼に 1 回だけ適用されました。 コースは、BCVA、FPDI、GCC の厚さ、pVEP-p100 の潜伏期および振幅パラメータを申請前および申請の 3 か月前に比較することによって評価されました。

臍帯 ウォートンゼリー由来間葉系幹細胞の調製 この研究で使用される間葉系幹細胞は、母親の同意を得て単一のドナーから同種異系で収集された臍帯のウォートンゼリーから分離されました。 臍帯サンプルは、いくつかのステップに従って処理されました。 簡単に言えば、臍帯組織をリン酸緩衝生理食塩水（Lonza、スイス）で2回洗浄し、ウォートンゼリー部分を鉗子とメスを使用して細かく刻みました。 みじん切りにした小片を細胞培養皿 (Greiner Bio-One、ドイツ) で、L-グルタミンを含まないダルベッコ改変イーグル培地 F12 (DMEM) 低グルコース (Bilogical Industries、イスラエル) および 10% ヒト AB 血清 (Capricorn、ドイツ) で培養しました。 )、1% 10.000 U/mL ペニシリン、および 10.000 μg/mL ストレプトマイシン (Gibco、USA)。 すべての細胞調製および培養手順は、現在の適正製造基準 (cGMP) 認定研究所 (Onkim Stem Cell Technologies、トルコ) で実施されました。 培養拡張細胞は、次の実験で使用するまで、標準的な凍結保存プロトコルを使用して P3 で凍結保存しました。 55% ジメチルスルホキシドおよび 5% デキストラン 40 を含む CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical、ドイツ) を凍結保存剤として使用しました。 細胞は、フローサイトメトリー分析を使用して凍結保存時に特徴付けられ、陽性の分化クラスター (CD) 表面マーカー、CD90、CD105、CD73、CD44、CD29、および CD34、CD45、および CD11b に対して陰性の発現を決定しました。 リアルタイム ポリメラーゼ連鎖反応 (qPCR) を使用して、腫瘍壊死アルファ (TNF アルファ) やビメンチン (VIM) などのいくつかの遺伝子の発現を分析しました。 さらに、マイコプラズマおよびエンドトキシン分析（それぞれ、無菌分析と組み合わせた PCR および LAL テストを使用）などの品質管理分析も完了しました。 注射用に調製する前に、細胞を凍結保存から可溶化した。 各治療の平均細胞生存率は 90.0% を超え、各患者は 1.5 ml 生理食塩水中の 2 ～ 6 x 106 細胞を受け取りました。

臍帯 WJ-MSC の注入 培養物からの WJ-MSC 懸濁液は、コールド チェーンによって手術室に運ばれ、24 時間以内に使用されました。 合計 1.5 ml の WJ-MSC 懸濁液を各眼のテノン嚢下腔に直ちに注入しました。 この手順は、プロパラカイン塩酸塩滴（アルカイン、アルコン、米国）による局所麻酔および無菌条件下で実施されました。 5/0 非外傷性牽引縫合糸を輪部に適用して、適用領域へのアクセスと操作を容易にしました。 術後、ロテプレドノールとトブラマイシンの配合点眼薬を 1 日 4 回、1 週間投与し、経口アモキシシリン クラブロン酸塩 (1 g) を 1 日 2 回、5 日間投与しました。

網膜反復電磁刺激 (rEMS) rEMS ヘルメット (MagnovisionTM、Bioretina Biotechnology、アンカラ、トルコ) は、2000 ミリガウスの電磁界強度、42 ヘルツの周波数、および持続時間 30 分間で、網膜および視覚経路を刺激しました。 これらの値は、他の臨床および前臨床研究で有効であることが以前に決定されていました。

時間枠

患者は、いくつかの研究時点で評価されました。

• T0 (ベースライン): アプリケーションの直前
• T1: 申請の最初の月
• T2: アプリケーションの 3 か月目

主要アウトカム指標 • ETDRS 視力: T0 および T2 検査から得られた視力スコアを分析し、有効性を判断するために統計テストを使用して比較しました。

二次結果の測定

• 視野感度: 眼底周辺測定偏差指数 (FPDI、%) FPDI は、コンピュータ化された周辺測定記録の 24/2 視野で検査されました。 FPDI は、100 個の点滅点のうちのいくつが、患者が正しく見ることができた視野の割合を説明するデータを提供します。 VF解析では、試験中のミスを避けるため、申請前に3回の練習ラウンドを実施しました。

• ガングリオン細胞複合体の厚さ (GCC の厚さ、µm): GCC は、3x3 mm の中心窩領域における内境界膜から内網状層までの厚さです。 OCTA デバイスによって自動的に行われる測定。 GCC は、神経節細胞と網膜神経線維の合計の厚さです。

• パターン視覚誘発電位 (pVEP) pVEP は、光刺激に反応した光経路の電気的活動を測定する客観的なテストです。 120 ' パターンは、すべての網膜象限からの応答を明らかにします。 測定は、両眼の ISCEV 基準に従って行われました。 数値結果を作成するために、p100 暗黙の時間と振幅を組み合わせた 120' パターン VEP プロトコルを使用しました。