干细胞联合电磁刺激治疗中毒性视神经病变 (Magnovision)

这项前瞻性、开放标签的临床 3 期研究于 2019 年 4 月至 2021 年 4 月期间在安卡拉大学医学院眼科进行。 该研究包括 18 名中毒性视神经病变患者的 36 只眼。 原发性中毒性视神经病变 (TON) 诊断是在急诊室或重症监护室进行的。 首次干预后 3 个月内入院的患者被纳入研究。 所有入组患者均接受了完整的常规眼科检查，包括最佳矫正视力 (BCVA) 测量和糖尿病视网膜病变早期治疗研究 (ETDRS) 图表（Topcon CC 100 XP，日本）。 使用 RTVue XR（Avanti，Optovue，弗里蒙特，加利福尼亚州，美国）的光学相干断层扫描血管造影术 (OCTA) 对患者进行了进一步评估，以分析和测量神经节细胞复合体 (GCC) 层的变化，这些变化提供了典型的共同注册 en -面部和横截面多模态成像平台。 视神经的功能评估之后是 Compass 24/2 视野 (VF) 测试（Compass，CenterVue，Padova，意大利）和 120' 模式视觉诱发电位 (pVEP) 测试（Mon 2018F，Metrovision，Perenchies，France）。

受试者 18 名 TON 患者的 36 只眼睛被纳入研究。

纳入标准包括几个参数：

• 3个月内毒剂中毒个案
• BCVA 优于 35 个字母的患者
• 任何程度的视野缺损
• 18岁以上患者

排除标准包括几个参数：

• 毒剂中毒超过 3 个月的病例
• BCVA小于35个字母的患者：正确进行视野检查
• 无法合作的神经后遗症
• 抽烟

在进入我们的诊所之前，对所有甲醇中毒患者应用了相同的治疗方案。 对所有患者进行血液透析、碳酸氢盐和乙醇。 根据相似的人口统计学特征将病例分为 3 组。

第 1 组：由 12 名患者的 12 只眼组成，其中一只眼接受 WJ-MSC 和 rEMS 组合治疗。 WJ-MSC 在 rEMS 应用之前仅应用了一次。 应用 WJ-MSC 后 10 天开始应用 rEMS。应用 WJ-MSC 后，使用定制设计的头盔应用 rEMS 30 分钟。 以 1 周的间隔重复 10 次 rEMS 应用。 通过比较应用前和应用后第 3 个月的 BCVA、FPDI、GCC 厚度、pVEP-p100 潜伏期和振幅参数来评估病程。

第 2 组：由 12 名患者的 12 只眼组成，其中一只眼仅接受 rEMS 治疗。 rEMS 使用定制设计的头盔进行 30 分钟。 以 1 周的间隔重复 10 次 rEMS 应用。 通过比较应用前和应用后第 3 个月的 BCVA、FPDI、GCC 厚度、pVEP-p100 潜伏期和振幅参数来评估病程。

第 3 组：由 6 名患者的 12 只眼组成，其中两只眼仅接受 WJ-MSC 治疗。 WJ-MSC 仅对双眼应用一次。 通过比较应用前和应用后第 3 个月的 BCVA、FPDI、GCC 厚度、pVEP-p100 潜伏期和振幅参数来评估病程。

脐带沃顿氏胶质来源的间充质干细胞制剂 本研究中使用的间充质干细胞是从脐带沃顿氏胶质中分离出来的，脐带是在母亲同意的情况下从单一供体同种异体采集的。 脐带样品按照几个步骤进行处理。 简而言之，脐带组织用磷酸盐缓冲盐水（Lonza，Switzerland）洗涤两次，并使用镊子和手术刀切碎沃顿氏胶质部分。 在细胞培养皿（Greiner Bio-One，德国）中培养碎块，其中含有 Dulbecco 改良的 Eagle 培养基 F12（DMEM）-不含 L-谷氨酰胺的低葡萄糖（Bilogical Industries，以色列）和 10% 人 AB 血清（Capricorn，德国)、1% 10.000 U/mL 青霉素和 10.000 μg/mL 链霉素（Gibco，美国）。 所有细胞制备和培养程序均在当前良好生产规范 (cGMP) 认可的实验室（Onkim Stem Cell Technologies，土耳其）中进行。 使用标准冷冻保存方案将培养扩增的细胞冷冻保存在 P3，直到用于以下实验。 含有 55% 二甲基亚砜和 5% 葡聚糖 40 的 CryoSure-DEX40（WAK-Chemie Medical，德国）用作冷冻保存剂。 在冷冻保存时使用流式细胞术分析对细胞进行表征，以确定阳性簇分化 (CD) 表面标记物 CD90、CD105、CD73、CD44、CD29 和 CD34、CD45 和 CD11b 的阴性表达。 使用实时聚合酶链反应 (qPCR)，分析了几个基因的表达，例如肿瘤坏死 alpha (TNF alpha) 和波形蛋白 (VIM)。 此外，还完成了质量控制分析，例如支原体和内毒素分析（分别使用 PCR 和 LAL 检测结合无菌分析）。 细胞在准备注射前从冷冻保存中溶解。 每次治疗的平均细胞活力超过 90.0%，每位患者在 1.5 ml 盐水溶液中接受 2-6 x 106 个细胞。

脐带 WJ-MSCs 的注射培养的 WJ-MSCs 悬浮液通过冷链运送到手术室，并在 24 小时内使用。 立即将总共 1.5 毫升的 WJ-MSC 悬浮液注射到每只眼睛的眼球腱下间隙中。 该程序在局部麻醉下使用盐酸丙美卡因滴剂（Alcaine，Alcon，USA）和无菌条件进行。 5/0 无创伤牵引缝合应用于角膜缘，以便于进入和操作应用区域。 术后给予氯替泼诺和妥布霉素联合滴眼液，每天 4 次，持续 1 周，口服阿莫西林克拉维酸 (1 gr)，每天 2 次，持续 5 天

视网膜重复电磁刺激 (rEMS) rEMS 头盔（MagnovisionTM，Bioretina Biotechnology，Ankara，Turkey）以 2000 毫高斯的电磁场强度、42 赫兹的频率和 30 分钟的持续时间刺激视网膜和视觉通路。 这些值先前被确定为对其他临床和临床前研究有效。

大体时间

在几个研究时间点对患者进行了评估：

• T0（基线）：紧接申请之前
• T1：申请的第一个月
• T2：申请的第 3 个月

主要结果测量 • ETDRS 视力：使用统计测试分析和比较从 T0 和 T2 检查获得的视力分数以确定有效性。

次要结果测量

• 视野灵敏度：眼底视野偏差指数（FPDI，%） FPDI 在计算机化视野记录的24/2 视野中进行检查。 FPDI 提供的数据解释了 100 个闪光点中有多少个以及患者可以正确看到视野的百分比。 对于VF分析，为了避免在测试过程中出现错误，在应用前进行了3次练习。

• 神经节细胞复合体厚度（GCC 厚度，µm）：GCC 是中央凹区域 3x3 mm 内从内界膜到内丛状层的厚度。 测量由 OCTA 设备自动完成。 GCC是神经节细胞和视网膜神经纤维的总厚度。

• 模式视觉诱发电位(pVEP) pVEP 是一种客观测试，用于测量光通路响应光刺激的电活动。 120' 模式揭示了所有视网膜象限的反应。 测量是根据双眼的 ISCEV 标准进行的。 我们使用结合了 p100 隐式时间和振幅的 120' 模式 VEP 协议来创建数值结果。