Terapia de neuropatía óptica tóxica mediante combinación de células madre con estimulación electromagnética (Magnovision)

Este estudio prospectivo, abierto y clínico de fase 3 se llevó a cabo en el Departamento de Oftalmología de la Facultad de Medicina de la Universidad de Ankara entre abril de 2019 y abril de 2021. Treinta y seis ojos de 18 pacientes con neuropatía óptica tóxica se incluyeron en el estudio. El diagnóstico de neuropatía óptica tóxica (TON) primaria se realizó en clínicas de emergencia o cuidados intensivos. Se incluyeron en el estudio los pacientes que ingresaron dentro de los 3 meses posteriores a la primera intervención. Todos los pacientes inscritos se sometieron a un examen oftalmológico de rutina completo, incluida la medición de la agudeza visual mejor corregida (BCVA) con el gráfico del estudio de tratamiento temprano de la retinopatía diabética (ETDRS) (Topcon CC 100 XP, Japón). Los pacientes fueron evaluados adicionalmente con angiografía por tomografía de coherencia óptica (OCTA) de RTVue XR (Avanti, Optovue, Fremont, CA, EE. UU.) para analizar y medir los cambios en la capa del complejo de células ganglionares (GCC) que proporcionó un típico registro conjunto -plataforma de imágenes multimodales de cara y sección transversal. La evaluación funcional del nervio óptico fue seguida por la prueba de campo visual (VF) Compass 24/2 (Compass, CenterVue, Padova, Italia) y la prueba de potencial evocado visual de patrón de 120 '(pVEP) (lunes de 2018F, Metrovision, Perenchies, Francia).

Sujetos Se incluyeron en el estudio treinta y seis ojos de 18 pacientes con TON.

Los criterios de inclusión consistieron en varios parámetros:

• Casos envenenados con un agente tóxico dentro de los 3 meses.
• Pacientes con BCVA mejor de 35 letras
• Cualquier grado de pérdida del campo visual.
• Pacientes mayores de 18 años

Los criterios de exclusión consistieron en varios parámetros:

• Casos de envenenamiento con un agente tóxico más de 3 meses
• Pacientes con BCVA menor de 35 letras: para realizar correctamente la prueba de campo visual
• Secuelas neurológicas que no se pueden cooperar
• De fumar

Se aplicó el mismo protocolo de tratamiento a todos los pacientes con intoxicación por metanol antes de su ingreso en nuestra clínica. A todos los pacientes se les administró hemodiálisis, bicarbonato y etanol. Los casos se dividieron en 3 grupos según características demográficas similares.

Grupo 1: consta de 12 ojos de 12 pacientes tratados con una combinación de WJ-MSC y rEMS en un ojo. WJ-MSC se aplicó solo una vez antes de las aplicaciones rEMS. La aplicación de rEMS se inició 10 días después de la aplicación de WJ-MSC. El rEMS se aplicó con un casco diseñado a medida durante 30 minutos después de la aplicación de WJ-MSC. Las aplicaciones de rEMS se repitieron 10 veces con un intervalo de 1 semana. El curso se evaluó comparando los parámetros BCVA, FPDI, GCC espesor, latencia pVEP-p100 y amplitud antes y 3er mes de aplicaciones.

Grupo 2: consta de 12 ojos de 12 pacientes tratados con solo rEMS en un ojo. El rEMS se aplicó con un casco diseñado a medida durante 30 minutos. Las aplicaciones de rEMS se repitieron 10 veces con un intervalo de 1 semana. El curso se evaluó comparando los parámetros BCVA, FPDI, GCC espesor, latencia pVEP-p100 y amplitud antes y 3er mes de aplicaciones.

Grupo 3: consta de 12 ojos de 6 pacientes tratados solo con WJ-MSC en dos ojos. WJ-MSC se aplicó solo una vez para ambos ojos. El curso se evaluó comparando los parámetros BCVA, FPDI, GCC espesor, latencia pVEP-p100 y amplitud antes y 3er mes de aplicaciones.

Cordón umbilical Preparación de células madre mesenquimales derivadas de la gelatina de Wharton Las células madre mesenquimales utilizadas en este estudio se aislaron de la gelatina de Wharton del cordón umbilical que se recolectó alogénicamente de un solo donante con el consentimiento de la madre. La muestra de cordón umbilical se trató siguiendo varios pasos. Brevemente, el tejido del cordón se lavó dos veces con solución salina tamponada con fosfato (Lonza, Suiza) y la parte de gelatina de Wharton se trituró con unas pinzas y un bisturí. Los trozos picados se cultivaron en una placa de cultivo celular (Greiner Bio-One, Alemania) con medio Eagle modificado de Dulbecco F12 (DMEM) bajo en glucosa sin L-glutamina (Bilogical Industries, Israel) y suero AB humano al 10% (Capricornio, Alemania). ), penicilina 10.000 U/mL al 1% y estreptomicina 10.000 μg/mL (Gibco, EE. UU.). Todas las preparaciones de células y los procedimientos de cultivo se llevaron a cabo en un laboratorio acreditado por buenas prácticas de fabricación (cGMP) actual (Onkim Stem Cell Technologies, Turquía). Las células expandidas en cultivo se crioconservaron en P3 usando protocolos estándar de crioconservación hasta que se usaron en el siguiente experimento. Como crioconservante se usó CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical, Alemania) que contenía 55 % de dimetilsulfóxido y 5 % de dextrano 40. Las células se caracterizaron en el momento de la crioconservación mediante análisis de citometría de flujo para determinar la expresión de los marcadores de superficie de grupo de diferenciación (CD) positivos, CD90, CD105, CD73, CD44, CD29, y negativos para CD34, CD45 y CD11b. Utilizando la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR), se analizaron las expresiones de varios genes, como tumor necrosis alfa (TNF alfa) y vimentina (VIM). Además, también se completaron análisis de control de calidad, como análisis de micoplasma y endotoxinas (utilizando la prueba PCR y LAL combinada con análisis de esterilidad, respectivamente). Las células se solubilizaron a partir de la crioconservación antes de prepararlas para la inyección. La viabilidad celular promedio para cada tratamiento fue superior al 90,0%, y cada paciente recibió de 2 a 6 x 106 células en una solución salina de 1,5 ml.

Inyección de WJ-MSC de cordón umbilical La suspensión de WJ-MSC del cultivo se llevó al quirófano mediante cadena de frío y se usó en 24 horas. Se inyectó inmediatamente un total de 1,5 ml de la suspensión de WJ-MSC en el espacio subtenoniano de cada ojo. El procedimiento se realizó bajo anestesia tópica con gotas de clorhidrato de proparacaína (Alcaine, Alcon, EE. UU.) y condiciones estériles. Se aplicó sutura de tracción atraumática 5/0 al limbo para facilitar el acceso y la manipulación al área de aplicación. En el postoperatorio se administró colirio combinado de loteprednol y tobramicina cuatro veces al día durante una semana y amoxicilina clavulonato oral (1 gr) dos veces al día durante cinco días.

Estimulación electromagnética repetitiva de la retina (rEMS) El casco rEMS (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Ankara, Turquía) estimuló la retina y las vías visuales con un campo electromagnético de 2000 miligauss, una frecuencia de 42 hercios y una duración de 30 minutos. Estos valores se determinaron previamente como efectivos para otros estudios clínicos y preclínicos.

Periodo de tiempo

Los pacientes fueron evaluados en varios momentos del estudio:

• T0 (línea de base): inmediatamente antes de las aplicaciones
• T1: 1er mes de aplicaciones
• T2: 3er mes de aplicaciones

Medida de resultado primaria • Agudeza visual de ETDRS: las puntuaciones de agudeza visual obtenidas de los exámenes T0 y T2 se analizaron y compararon mediante pruebas estadísticas para determinar la eficacia.

Medidas de resultado secundarias

• Sensibilidad del campo visual: Índice de desviación de la perimetría del fondo de ojo (FPDI, %) La FPDI se examinó en el campo visual 24/2 de los registros perimétricos computarizados. El FPDI ofrece datos que explican cuántos de los 100 puntos de parpadeo y qué porcentaje del campo visual podría ver correctamente el paciente. Para el análisis de VF, con el fin de evitar errores durante la prueba, se realizaron rondas de práctica tres veces antes de las aplicaciones.

• Espesor del complejo de células ganglionares (espesor GCC, µm): GCC es el espesor desde la membrana limitante interna hasta la capa plexiforme interna en los 3x3 mm del área foveal. La medición realizada automáticamente por el dispositivo OCTA. GCC es el grosor total de las células ganglionares y las fibras nerviosas de la retina.

• Patrón de potencial evocado visual (pVEP) pVEP es una prueba objetiva que mide la actividad eléctrica de la vía óptica en respuesta a un estímulo de luz. Los patrones de 120' revelan respuestas de todos los cuadrantes de la retina. Las medidas se tomaron según los estándares ISCEV para ambos ojos. Utilizamos el protocolo VEP de patrón de 120', que combina el tiempo y la amplitud implícitos de p100, para crear un resultado numérico.