Toksisen optisen neuropatian hoito kantasolujen yhdistelmällä sähkömagneettisen stimulaation avulla (Magnovision)

Tämä prospektiivinen, avoin kliininen vaiheen 3 tutkimus suoritettiin Ankaran yliopiston lääketieteellisessä tiedekunnassa, oftalmologian laitoksella huhtikuun 2019 ja huhtikuun 2021 välisenä aikana. Tutkimukseen osallistui 36 silmää 18 potilaasta, joilla oli toksinen optinen neuropatia. Ensisijainen toksinen optinen neuropatia (TON) -diagnoosi tehtiin ensiapu- tai tehohoitoklinikoilla. Potilaat, jotka saapuivat 3 kuukauden sisällä ensimmäisestä interventiosta, otettiin mukaan tutkimukseen. Kaikille ilmoittautuneille potilaille tehtiin täydellinen rutiininomainen oftalminen tutkimus, mukaan lukien parhaiten korjatun näöntarkkuuden (BCVA) mittaus diabeettisen retinopatian aikaisen hoidon tutkimuksen (ETDRS) kaaviolla (Topcon CC 100 XP, Japani). Potilaita arvioitiin edelleen optisella koherenssitomografia-angiografialla (OCTA) RTVue XR:ltä (Avanti, Optovue, Fremont, CA, USA) niiden muutosten analysoimiseksi ja mittaamiseksi gangliosolukompleksikerroksen (GCC) kerroksessa, joka antoi tyypillisen yhteisrekisteröidyn en. -kasvo- ja poikkileikkausmultimodaalinen kuvantamisalusta. Näköhermon toiminnallista arviointia seurasi Compass 24/2 -näkökenttätesti (VF) (Compass, CenterVue, Padova, Italia) ja 120' kuvion visuaalinen herätyspotentiaali (pVEP) -testi (ma 2018F, Metrovision, Perenchies, Ranska).

Koehenkilöt Tutkimukseen osallistui 36 silmää 18 TON-potilaasta.

Sisällyttämiskriteerit koostuivat useista parametreista:

• Tapaukset, joissa myrkyllinen aine on myrkytetty 3 kuukauden sisällä
• Potilaat, joilla on yli 35 kirjainta BCVA
• Kaikenasteinen näkökentän menetys
• Yli 18-vuotiaat potilaat

Poissulkemiskriteerit koostuivat useista parametreista:

• Tapaukset, joissa myrkyllinen aine on myrkytetty yli 3 kuukautta
• Potilaat, joiden BCVA on alle 35 kirjainta: suorittaa näkökenttätesti oikein
• Neurologiset seuraukset, joita ei voida tehdä yhteistyössä
• Tupakointi

Samaa hoitokäytäntöä sovellettiin kaikkiin metanolimyrkytyspotilaisiin ennen vastaanottoa klinikallemme. Kaikille potilaille annettiin hemodialyysi, bikarbonaatti ja etanoli. Tapaukset jaettiin 3 ryhmään samanlaisten demografisten ominaisuuksien mukaan.

Ryhmä 1: Koostuu 12 silmästä 12 potilaalla, joita hoidettiin WJ-MSC- ja rEMS-yhdistelmällä yhdessä silmässä. WJ-MSC:tä käytettiin vain kerran ennen rEMS-sovelluksia. rEMS-sovellus aloitettiin 10 päivää WJ-MSC-sovelluksen jälkeen. rEMS levitettiin rEMS-kypärän kanssa 30 minuutin ajan WJ-MSC-sovelluksen jälkeen. rEMS-sovellukset toistettiin 10 kertaa 1 viikon välein. Kurssi arvioitiin vertaamalla BCVA-, FPDI-, GCC-paksuus-, pVEP-p100-latenssi- ja amplitudiparametreja ennen ja 3. hoitokuukautta.

Ryhmä 2: Koostuu 12 silmästä 12 potilaalla, joita hoidettiin vain rEMS:llä yhdessä silmässä. rEMS:ää käytettiin mittatilaustyönä suunnitellulla kypärällä 30 minuutin ajan. rEMS-sovellukset toistettiin 10 kertaa 1 viikon välein. Kurssi arvioitiin vertaamalla BCVA-, FPDI-, GCC-paksuus-, pVEP-p100-latenssi- ja amplitudiparametreja ennen ja 3. hoitokuukautta.

Ryhmä 3: Koostuu 12 silmästä 6 potilaalla, joita hoidettiin vain WJ-MSC:llä kahdessa silmässä. WJ-MSC:tä levitettiin vain kerran molempiin silmiin. Kurssi arvioitiin vertaamalla BCVA-, FPDI-, GCC-paksuus-, pVEP-p100-latenssi- ja amplitudiparametreja ennen ja 3. hoitokuukautta.

Napanuora Whartonin hyytelöperäinen mesenkymaalisten kantasolujen valmistus Tässä tutkimuksessa käytetyt mesenkymaaliset kantasolut eristettiin Whartonin napanuoran hyytelöstä, joka kerättiin allogeenisesti yhdeltä luovuttajalta äidin suostumuksella. Napanuoranäyte käsiteltiin useiden vaiheiden mukaisesti. Lyhyesti sanottuna napanuorakudos pestiin kahdesti fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (Lonza, Sveitsi) ja Whartonin hyytelöosa jauhettiin pihdeillä ja skalpellilla. Jauhettuja paloja viljeltiin soluviljelymaljassa (Greiner Bio-One, Saksa) Dulbeccon modifioidulla Eagle's mediumilla F12 (DMEM) - matalaglukoosi ilman L-glutamiinia (Bilogical Industries, Israel) ja 10 % ihmisen AB-seerumia (Capricorn, Saksa) ), 1 % 10 000 U/ml penisilliiniä ja 10 000 µg/ml streptomysiiniä (Gibco, USA). Kaikki soluvalmisteet ja viljelytoimenpiteet suoritettiin nykyisessä Good Manufacturing Practice (cGMP) -akkreditoidussa laboratoriossa (Onkim Stem Cell Technologies, Turkki). Viljelmällä laajennetut solut kylmäsäilytettiin P3:ssa käyttämällä tavanomaisia ​​kylmäsäilytysmenetelmiä, kunnes niitä käytettiin seuraavassa kokeessa. Kryosäilöntäaineena käytettiin CryoSure-DEX40:tä (WAK-Chemie Medical, Saksa), joka sisälsi 55 % dimetyylisulfoksidia ja 5 % dekstraani 40:tä. Solut karakterisoitiin kylmäsäilöntähetkellä käyttämällä virtaussytometristä analyysiä positiivisen differentiaatioklusterin (CD) pintamarkkerien, CD90, CD105, CD73, CD44, CD29 ja CD34:n, CD45:n ja CD11b:n negatiivisen ilmentymisen määrittämiseksi. Käyttämällä reaaliaikaista polymeraasiketjureaktiota (qPCR) analysoitiin useiden geenien, kuten tuumorinekroosi alfa (TNF-alfa) ja vimentiini (VIM), ilmentymät. Lisäksi suoritettiin myös laadunvalvontaanalyysit, kuten mykoplasma- ja endotoksiinianalyysit (käyttäen PCR- ja LAL-testiä yhdistettynä steriiliysanalyysiin, vastaavasti). Solut liuotettiin kylmäsäilytyksestä ennen kuin ne valmistettiin injektiota varten. Keskimääräinen solujen elinkelpoisuus kussakin hoidossa oli yli 90,0 %, ja jokainen potilas sai 2-6 x 106 solua 1,5 ml:n suolaliuoksessa.

Napanuoran injektio WJ-MSC:t Viljelmästä saatu WJ-MSC-suspensio toimitettiin leikkaussaliin kylmäketjulla ja käytettiin 24 tunnin sisällä. Yhteensä 1,5 ml WJ-MSC-suspensiota injektoitiin välittömästi kunkin silmän subtenon-tilaan. Toimenpide suoritettiin paikallispuudutuksessa proparakaiinihydrokloridipisaroilla (Alcaine, Alcon, USA) ja steriileissä olosuhteissa. 5/0 atraumaattinen vetoompelu asetettiin limbukseen helpon pääsyn ja levitysalueen käsiksi tekemiseen. Leikkauksen jälkeen annettiin loteprednolin ja tobramysiinin yhdistelmäsilmätippoja neljä kertaa päivässä viikon ajan ja oraalista amoksisilliiniklavulonaattia (1 g) kahdesti päivässä viiden päivän ajan.

Verkkokalvon toistuva sähkömagneettinen stimulaatio (rEMS) rEMS-kypärä (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Ankara, Turkki) stimuloi verkkokalvoa ja näköreittejä sähkömagneettisen kentän voimakkuudella 2000 miligauss, taajuudella 42 hertsiä ja kestolla 30 minuuttia. Näiden arvojen määritettiin aiemmin olevan tehokkaita muissa kliinisissä ja prekliinisissä tutkimuksissa.

Aikaikkuna

Potilaat arvioitiin useissa tutkimuksen aikapisteissä:

• T0 (perustaso): välittömästi ennen hakemuksia
• T1: hakemusten ensimmäinen kuukausi
• T2: 3. hakemuskuukausi

Ensisijainen tulosmittaus • ETDRS-näöntarkkuus: T0- ja T2-tutkimuksista saadut näöntarkkuuspisteet analysoitiin ja verrattiin tilastollisilla testeillä tehokkuuden määrittämiseksi.

Toissijaiset tulosmittaukset

• Näkökentän herkkyys: Silmänpohjan perimetrian poikkeamaindeksi (FPDI, %) FPDI tutkittiin 24/2-näkökentässä tietokoneistetuissa perimetriatietueissa. FPDI tarjoaa tietoja siitä, kuinka monta sadasta vilkkumispisteestä ja kuinka monta prosenttia näkökentästä potilas pystyi näkemään oikein. VF-analyysiä varten suoritettiin harjoituskierrokset kolme kertaa ennen hakemusten tekemistä virheiden välttämiseksi testin aikana.

• Gangliosolukompleksin paksuus (GCC paksuus, µm): GCC on paksuus sisäisestä rajoittavasta kalvosta sisempään pleksimuotoiseen kerrokseen 3x3 mm foveaalialueella. Mittaus suoritetaan automaattisesti OCTA-laitteella. GCC on gangliosolujen ja verkkokalvon hermosäikeiden kokonaispaksuus.

• Pattern visuaalinen herätetty potentiaali (pVEP) pVEP on objektiivinen testi, joka mittaa optisen reitin sähköistä aktiivisuutta vasteena valoärsykkeelle. 120' kuviot paljastavat vasteet kaikista verkkokalvon kvadranteista. Mittaukset tehtiin ISCEV-standardien mukaisesti molemmille silmille. Käytimme 120'-mallin VEP-protokollaa, joka yhdistää p100 implisiittisen ajan ja amplitudin, luodaksemme numeerisen tuloksen.