Терапия токсической нейропатии зрительного нерва с помощью комбинации стволовых клеток с электромагнитной стимуляцией (Magnovision)

Это проспективное открытое клиническое исследование фазы 3 проводилось на медицинском факультете Университета Анкары, факультет офтальмологии, в период с апреля 2019 года по апрель 2021 года. В исследование были включены 36 глаз 18 пациентов с токсической нейропатией зрительного нерва. Диагноз первичной токсической оптической нейропатии (ТОН) устанавливался в клиниках неотложной помощи или интенсивной терапии. В исследование были включены пациенты, поступившие в течение 3 мес после первого вмешательства. Все включенные в исследование пациенты прошли полное рутинное офтальмологическое обследование, включая измерение остроты зрения с максимальной коррекцией (BCVA) с использованием таблицы исследования раннего лечения диабетической ретинопатии (ETDRS) (Topcon CC 100 XP, Япония). Пациенты были дополнительно оценены с помощью оптической когерентной томографической ангиографии (OCTA) от RTVue XR (Avanti, Optovue, Fremont, CA, USA) для анализа и измерения изменений в слое ганглиозно-клеточного комплекса (GCC), которые обеспечили типичный совместно зарегистрированный en - Платформа мультимодальной визуализации лица и поперечного сечения. За функциональной оценкой зрительного нерва следовали тест поля зрения Compass 24/2 (VF) (Compass, CenterVue, Падуя, Италия) и тест зрительных вызванных потенциалов (pVEP) с паттерном 120' (Mon 2018F, Metrovision, Perenchies, Франция).

Субъекты В исследование были включены 36 глаз 18 пациентов с ТОН.

Критерии включения состояли из нескольких параметров:

• Случаи отравления ядовитым веществом в течение 3 мес.
• Пациенты с МКОЗ лучше 35 букв
• Любая степень потери поля зрения
• Пациенты старше 18 лет

Критерии исключения состояли из нескольких параметров:

• Случаи отравления ядовитым веществом более 3 мес.
• Пациенты с МКОЗ менее 35 букв: правильно выполнить тест поля зрения
• Неврологические последствия, с которыми невозможно сотрудничать
• Курение

Одинаковый протокол лечения применялся ко всем больным с интоксикацией метанолом до поступления в нашу клинику. Всем больным проводили гемодиализ, бикарбонат и этанол. Случаи были разделены на 3 группы по схожим демографическим характеристикам.

Группа 1: Состоит из 12 глаз 12 пациентов, получавших комбинацию WJ-MSC и rEMS в одном глазу. WJ-MSC применяли только один раз перед применением rEMS. Применение rEMS было начато через 10 дней после применения WJ-MSC. rEMS применяли с помощью специально разработанного шлема в течение 30 минут после применения WJ-MSC. Аппликации рЭМС повторяли 10 раз с интервалом в 1 неделю. Курс оценивали, сравнивая МКОЗ, FPDI, толщину GCC, параметры латентности и амплитуды pVEP-p100 до и на 3-м месяце аппликаций.

Группа 2: Состоит из 12 глаз 12 пациентов, получавших только рЭМС на одном глазу. rEMS применяли с помощью специально разработанного шлема в течение 30 минут. Аппликации рЭМС повторяли 10 раз с интервалом в 1 неделю. Курс оценивали, сравнивая МКОЗ, FPDI, толщину GCC, параметры латентности и амплитуды pVEP-p100 до и на 3-м месяце аппликаций.

Группа 3: Состоит из 12 глаз 6 пациентов, получавших только WJ-MSC в двух глазах. WJ-MSC применяли только один раз для обоих глаз. Курс оценивали, сравнивая МКОЗ, FPDI, толщину GCC, параметры латентности и амплитуды pVEP-p100 до и на 3-м месяце аппликаций.

Пуповина Получение мезенхимальных стволовых клеток, полученных из желе Вартона Мезенхимальные стволовые клетки, используемые в этом исследовании, были выделены из желе Вартона из пуповины, полученной аллогенно от одного донора с согласия матери. Образец пуповины обрабатывали в несколько этапов. Вкратце, ткань пуповины дважды промывали фосфатно-солевым буфером (Lonza, Швейцария) и желеобразную часть Уортона измельчали ​​с помощью щипцов и скальпеля. Кусочки фарша культивировали в чашке для клеточных культур (Greiner Bio-One, Германия) с модифицированной Дульбекко средой Игла F12 (DMEM) с низким содержанием глюкозы без L-глютамина (Bilogical Industries, Израиль) и 10% сывороткой АВ человека (Capricorn, Германия). ), 1% 10 000 ЕД/мл пенициллина и 10 000 мкг/мл стрептомицина (Gibco, США). Все процедуры подготовки клеток и процедуры культивирования проводились в лаборатории, аккредитованной в соответствии с действующей надлежащей производственной практикой (cGMP) (Onkim Stem Cell Technologies, Турция). Размноженные в культуре клетки криоконсервировали на P3 с использованием стандартных протоколов криоконсервации до использования в следующем эксперименте. В качестве криоконсерванта использовали CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical, Германия), содержащий 55 % диметилсульфоксида и 5 % декстрана 40. Клетки были охарактеризованы во время криоконсервации с использованием проточного цитометрического анализа для определения экспрессии положительных маркеров поверхности кластера дифференцировки (CD), CD90, CD105, CD73, CD44, CD29, и отрицательных для CD34, CD45 и CD11b. С помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (КПЦР) была проанализирована экспрессия нескольких генов, таких как альфа-некроз опухоли (TNF-альфа) и виментин (VIM). Кроме того, были проведены анализы контроля качества, такие как анализы на микоплазму и эндотоксины (с использованием ПЦР и ЛАЛ-теста в сочетании с анализом на стерильность, соответственно). Клетки солюбилизировали после криоконсервации перед подготовкой к инъекции. Средняя жизнеспособность клеток для каждой обработки составляла более 90,0%, и каждый пациент получил 2-6 х 106 клеток в 1,5 мл физиологического раствора.

Инъекция МСК ВЯ пуповины Суспензию МСК ВЯ из культуры доставляли в операционную холодовой цепью и использовали в течение 24 часов. Всего 1,5 мл суспензии WJ-MSC сразу вводили в субтеноново пространство каждого глаза. Процедуру проводили под местной анестезией каплями пропаракаина гидрохлорида (Alcaine, Alcon, США) в стерильных условиях. На лимб накладывали атравматический шов-держалку 5/0 для облегчения доступа и манипуляций в области аппликации. В послеоперационном периоде комбинированные глазные капли лотепреднола и тобрамицина закапывались четыре раза в день в течение одной недели, а клавулонат амоксициллина (1 г) перорально вводился два раза в день в течение пяти дней.

Повторяющаяся электромагнитная стимуляция сетчатки (rEMS) Шлем rEMS (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Анкара, Турция) стимулировал сетчатку и зрительные пути электромагнитным полем напряженностью 2000 мГс, частотой 42 Гц и продолжительностью 30 минут. Ранее было установлено, что эти значения являются эффективными для других клинических и доклинических исследований.

Временные рамки

Пациентов оценивали в несколько моментов времени исследования:

• T0 (базовый уровень): непосредственно перед применением
• T1: первый месяц подачи заявок
• T2: 3-й месяц приложений

Критерий первичного исхода • Острота зрения по ETDRS. Оценки остроты зрения, полученные в результате тестов T0 и T2, были проанализированы и сопоставлены с использованием статистических тестов для определения эффективности.

Вторичные показатели результатов

• Чувствительность поля зрения: Индекс отклонения периметрии глазного дна (FPDI, %) FPDI исследовали в поле зрения 24/2 компьютеризированных записей периметрии. FPDI предлагает данные, объясняющие, сколько из 100 мигающих точек и какой процент поля зрения может быть правильно виден пациенту. Для анализа ВФ, во избежание ошибок при тестировании, перед подачей заявок были проведены тренировочные раунды.

• Толщина комплекса ганглиозных клеток (толщина GCC, мкм): GCC – толщина от внутренней пограничной мембраны до внутреннего плексиформного слоя в фовеальной области 3x3 мм. Измерение выполняется автоматически устройством OCTA. GCC — общая толщина ганглиозных клеток и нервных волокон сетчатки.

• Паттерн зрительных вызванных потенциалов (pVEP) pVEP — это объективный тест, который измеряет электрическую активность оптического пути в ответ на световой раздражитель. 120-футовые паттерны показывают ответы всех квадрантов сетчатки. Измерения проводились в соответствии со стандартами ISCEV для обоих глаз. Мы использовали 120-футовый протокол VEP, который сочетает в себе неявное время и амплитуду p100, чтобы получить числовой результат.