Therapie van toxische optische neuropathie via combinatie van stamcellen met elektromagnetische stimulatie (Magnovision)

Deze prospectieve, open-label klinische fase 3-studie werd tussen april 2019 en april 2021 uitgevoerd aan de medische faculteit van de universiteit van Ankara, afdeling oogheelkunde. Zesendertig ogen van 18 patiënten met toxische optische neuropathie werden in het onderzoek opgenomen. De diagnose primaire toxische optische neuropathie (TON) werd gesteld in klinieken voor spoedeisende hulp of intensive care. Patiënten die binnen 3 maanden na de eerste interventie werden opgenomen, werden in de studie opgenomen. Alle deelnemende patiënten ondergingen een volledig routinematig oogheelkundig onderzoek, inclusief de best-corrected visual acuity (BCVA)-meting met de early treatment of diabetic retinopathy study (ETDRS)-kaart (Topcon CC 100 XP, Japan). De patiënten werden verder geëvalueerd met optische coherentietomografie-angiografie (OCTA) van RTVue XR (Avanti, Optovue, Fremont, CA, VS) om de veranderingen in de ganglioncelcomplex (GCC) -laag te analyseren en te meten die een typische co-geregistreerde en - multimodaal beeldvormingsplatform voor gezicht en dwarsdoorsnede. Functionele evaluatie van de oogzenuw werd gevolgd door de Compass 24/2 visual field (VF)-test (Compass, CenterVue, Padova, Italië) en de 120' pattern visual evoked potential (pVEP)-test (Mon 2018F, Metrovision, Perenchies, Frankrijk).

Proefpersonen Zesendertig ogen van 18 TON-patiënten werden in het onderzoek opgenomen.

Inclusiecriteria bestonden uit verschillende parameters:

• Gevallen vergiftigd met een giftig middel binnen 3 maanden
• Patiënten met BCVA beter dan 35 letters
• Elke mate van gezichtsveldverlies
• Patiënten ouder dan 18 jaar

Uitsluitingscriteria bestonden uit verschillende parameters:

• Gevallen vergiftigd met een giftig middel gedurende meer dan 3 maanden
• Patiënten met BCVA minder dan 35 letters: om de gezichtsveldtest correct uit te voeren
• Neurologische gevolgen waaraan niet kan worden meegewerkt
• Roken

Voor opname in onze kliniek werd hetzelfde behandelprotocol toegepast op alle patiënten met methanolintoxicatie. Hemodialyse, bicarbonaat en ethanol werden aan alle patiënten toegediend. De gevallen werden verdeeld in 3 groepen op basis van vergelijkbare demografische kenmerken.

Groep 1: Bestaat uit 12 ogen van 12 patiënten behandeld met WJ-MSC en rEMS-combinatie in één oog. WJ-MSC werd slechts één keer toegepast vóór reEMS-toepassingen. De rEMS-applicatie werd 10 dagen na de WJ-MSC-applicatie gestart. De rEMS werd gedurende 30 minuten na de WJ-MSC-applicatie aangebracht met een speciaal ontworpen helm. rEMS-toepassingen werden 10 keer herhaald met een interval van 1 week. Het verloop werd geëvalueerd door de BCVA-, FPDI-, GCC-dikte-, pVEP-p100-latentie- en amplitudeparameters vóór en 3e maand van toepassing te vergelijken.

Groep 2: bestaat uit 12 ogen van 12 patiënten die in één oog alleen met reEMS zijn behandeld. De reEMS werd aangebracht met een op maat gemaakte helm gedurende 30 minuten. rEMS-toepassingen werden 10 keer herhaald met een interval van 1 week. Het verloop werd geëvalueerd door de BCVA-, FPDI-, GCC-dikte-, pVEP-p100-latentie- en amplitudeparameters vóór en 3e maand van toepassing te vergelijken.

Groep 3: Bestaat uit 12 ogen van 6 patiënten behandeld met alleen WJ-MSC in twee ogen. WJ-MSC werd slechts één keer toegepast voor beide ogen. Het verloop werd geëvalueerd door de BCVA-, FPDI-, GCC-dikte-, pVEP-p100-latentie- en amplitudeparameters vóór en 3e maand van toepassing te vergelijken.

Navelstreng Wharton's gelei-afgeleide mesenchymale stamcellen preparaat De mesenchymale stamcellen die in deze studie werden gebruikt, werden geïsoleerd uit Wharton's gelei van de navelstreng die allogeen was verzameld van een enkele donor met toestemming van de moeder. Het navelstrengmonster werd volgens verschillende stappen behandeld. In het kort werd het navelstrengweefsel twee keer gewassen met fosfaatgebufferde zoutoplossing (Lonza, Zwitserland) en het geleigedeelte van Wharton werd fijngehakt met behulp van een tang en een scalpel. Gehakte stukjes werden gekweekt in een celkweekschaal (Greiner Bio-One, Duitsland) met Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium F12 (DMEM) -lage glucose zonder L-glutamine (Bilogical Industries, Israël) en 10% humaan AB-serum (Steenbok, Duitsland ), 1% 10.000 E/ml penicilline en 10.000 μg/ml streptomycine (Gibco, VS). Alle celpreparaten en kweekprocedures werden uitgevoerd in een actueel Good Manufacturing Practice (cGMP) geaccrediteerd laboratorium (Onkim Stem Cell Technologies, Turkije). De in cultuur geëxpandeerde cellen werden gecryopreserveerd op P3 met behulp van standaard cryopreservatieprotocollen totdat ze in het volgende experiment werden gebruikt. CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical, Duitsland) met 55% dimethylsulfoxide en 5% dextran 40 werd gebruikt als cryopreservatiemiddel. De cellen werden gekarakteriseerd op het moment van cryopreservatie met behulp van flowcytometrische analyse om de expressie te bepalen van de positieve cluster van differentiatie (CD) oppervlaktemarkers, CD90, CD105, CD73, CD44, CD29 en negatief voor CD34, CD45 en CD11b. Met behulp van real-time polymerasekettingreactie (qPCR) werden de expressies van verschillende genen, zoals tumornecrose-alfa (TNF-alfa) en vimentine (VIM), geanalyseerd. Daarnaast werden ook kwaliteitscontroleanalyses uitgevoerd, zoals mycoplasma- en endotoxine-analyses (met behulp van respectievelijk de PCR- en LAL-test in combinatie met steriliteitsanalyse). Cellen werden oplosbaar gemaakt uit cryopreservatie voordat ze werden voorbereid voor injectie. De gemiddelde levensvatbaarheid van de cellen voor elke behandeling was meer dan 90,0% en elke patiënt ontving 2-6 x 106 cellen in een zoutoplossing van 1,5 ml.

Injectie van navelstreng WJ-MSC's De WJ-MSC's-suspensie uit de kweek werd via een koelketen naar de operatiekamer gebracht en binnen 24 uur gebruikt. Een totaal van 1,5 ml van de WJ-MSC-suspensie werd onmiddellijk in de subtenonruimte van elk oog geïnjecteerd. De procedure werd uitgevoerd onder plaatselijke verdoving met druppels proparacaïnehydrochloride (Alcaine, Alcon, VS) en steriele omstandigheden. 5/0 atraumatische tractiehechtdraad werd aangebracht op de limbus voor gemakkelijke toegang en manipulatie van het aanbrenggebied. Postoperatief werden oogdruppels met loteprednol en tobramycine gedurende één week vier keer per dag gegeven en gedurende vijf dagen tweemaal daags oraal amoxicilline-clavulonaat (1 gr).

Repetitieve elektromagnetische stimulatie van het netvlies (rEMS) De rEMS-helm (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Ankara, Turkije) stimuleerde het netvlies en de visuele banen met een elektromagnetische veldsterkte van 2000 miligauss, een frequentie van 42 hertz en een duur van 30 minuten. Van deze waarden was eerder vastgesteld dat ze effectief waren voor andere klinische en preklinische studies.

Tijdsspanne

De patiënten werden geëvalueerd op verschillende studietijdstippen:

• T0 (baseline): direct voor de toepassingen
• T1: 1e maand van aanvragen
• T2: 3e maand van aanvragen

Primaire uitkomstmaat • ETDRS-gezichtsscherpte: de gezichtsscherptescores verkregen uit de T0- en T2-onderzoeken werden geanalyseerd en vergeleken met behulp van statistische tests om de effectiviteit te bepalen.

Secundaire uitkomstmaten

• Gezichtsveldgevoeligheid: Fundus perimetry deviatie-index (FPDI, %) FPDI werd onderzocht in het 24/2 gezichtsveld van de geautomatiseerde perimetrierecords. De FPDI biedt gegevens die verklaren hoeveel van de 100 flitspunten en welk percentage van het gezichtsveld correct door de patiënt kan worden gezien. Voor VF-analyse werden, om fouten tijdens de test te voorkomen, drie keer oefenrondes uitgevoerd voorafgaand aan de toepassingen.

• Ganglioncelcomplexdikte (GCC-dikte, µm): GCC is de dikte van het interne beperkende membraan tot de binnenste plexiforme laag in het foveale gebied van 3x3 mm. De meting wordt automatisch uitgevoerd door het OCTA-apparaat. GCC is de totale dikte van de ganglioncellen en zenuwvezels van het netvlies.

• Pattern visual evoked potential (pVEP) pVEP is een objectieve test die de elektrische activiteit van het optische pad meet als reactie op een lichtstimulus. De 120'-patronen onthullen reacties van alle kwadranten van het netvlies. De metingen zijn uitgevoerd volgens de ISCEV-normen voor beide ogen. We gebruikten het 120'pattern VEP-protocol, dat p100 impliciete tijd en amplitude combineert, om een ​​numeriek resultaat te creëren.