Terapia toksycznej neuropatii nerwu wzrokowego poprzez połączenie komórek macierzystych ze stymulacją elektromagnetyczną (Magnovision)

To prospektywne, otwarte badanie kliniczne fazy III przeprowadzono na Wydziale Lekarskim Uniwersytetu w Ankarze, Klinice Okulistyki w okresie od kwietnia 2019 r. do kwietnia 2021 r. Do badania włączono 36 oczu 18 pacjentów z toksyczną neuropatią nerwu wzrokowego. Pierwotne rozpoznanie toksycznej neuropatii nerwu wzrokowego (TON) stawiano w oddziałach ratunkowych lub oddziałach intensywnej terapii. Do badania włączono pacjentów, którzy przyjęli się do szpitala w ciągu 3 miesięcy od pierwszej interwencji. Wszyscy włączeni pacjenci przeszli pełne rutynowe badanie okulistyczne, w tym pomiar ostrości wzroku z najlepszą korekcją (BCVA) z wykresem badania wczesnego leczenia retinopatii cukrzycowej (ETDRS) (Topcon CC 100 XP, Japonia). Pacjenci byli dalej oceniani za pomocą angiografii optycznej koherentnej tomografii (OCTA) z RTVue XR (Avanti, Optovue, Fremont, Kalifornia, USA) w celu analizy i pomiaru zmian w warstwie kompleksu komórek zwojowych (GCC), które dostarczyły typowych współrejestrowanych en -multimodalna platforma obrazowania twarzy i przekrojów poprzecznych. Po funkcjonalnej ocenie nerwu wzrokowego wykonano test pola widzenia (VF) Compass 24/2 (Compass, CenterVue, Padova, Włochy) oraz test wzrokowego potencjału wywołanego (pVEP) wzorca 120' (poniedziałek 2018 r., Metrovision, Perenchies, Francja).

Pacjenci Do badania włączono trzydzieści sześć oczu 18 pacjentów TON.

Kryteria włączenia składały się z kilku parametrów:

• Przypadki zatrucia środkiem toksycznym w ciągu 3 miesięcy
• Pacjenci z BCVA lepszą niż 35 liter
• Dowolny stopień utraty pola widzenia
• Pacjenci powyżej 18 roku życia

Kryteria wykluczenia składały się z kilku parametrów:

• Przypadki zatrucia środkiem toksycznym przez ponad 3 miesiące
• Pacjenci z BCVA poniżej 35 liter: prawidłowo wykonać badanie pola widzenia
• Następstwa neurologiczne, z którymi nie można współpracować
• Palenie

U wszystkich pacjentów z zatruciem metanolem zastosowano ten sam protokół leczenia przed przyjęciem do naszej kliniki. Wszystkim pacjentom podawano hemodializę, wodorowęglany i etanol. Przypadki podzielono na 3 grupy według podobnych cech demograficznych.

Grupa 1: składa się z 12 oczu 12 pacjentów leczonych kombinacją WJ-MSC i rEMS w jednym oku. WJ-MSC zastosowano tylko jeden raz przed aplikacjami rEMS. Aplikacja rEMS została rozpoczęta 10 dni po aplikacji WJ-MSC. Aplikacja rEMS została zastosowana z indywidualnie zaprojektowanym kaskiem przez 30 minut po aplikacji WJ-MSC. Aplikacje rEMS powtórzono 10 razy w odstępie 1 tygodnia. Przebieg oceniano porównując parametry BCVA, FPDI, GCC, latencję i amplitudę pVEP-p100 przed i po 3 miesiącach aplikacji.

Grupa 2: składa się z 12 oczu 12 pacjentów leczonych tylko rEMS w jednym oku. System rEMS stosowano z indywidualnie zaprojektowanym kaskiem przez 30 minut. Aplikacje rEMS powtórzono 10 razy w odstępie 1 tygodnia. Przebieg oceniano porównując parametry BCVA, FPDI, GCC, latencję i amplitudę pVEP-p100 przed i po 3 miesiącach aplikacji.

Grupa 3: Składa się z 12 oczu 6 pacjentów leczonych tylko WJ-MSC w dwóch oczach. WJ-MSC zastosowano tylko jeden raz dla obu oczu. Przebieg oceniano porównując parametry BCVA, FPDI, GCC, latencję i amplitudę pVEP-p100 przed i po 3 miesiącach aplikacji.

Preparat mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących z galaretki Whartona z pępowiny Mezenchymalne komórki macierzyste użyte w tym badaniu wyizolowano z galaretki Whartona z pępowiny, którą pobrano allogenicznie od jednego dawcy za zgodą matki. Próbkę pępowiny traktowano w kilku etapach. Pokrótce, tkankę pępowinową przemyto dwukrotnie solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (Lonza, Szwajcaria) i część galaretki Whartona rozdrobniono za pomocą kleszczy i skalpela. Zmielone kawałki hodowano w szalce do hodowli komórkowej (Greiner Bio-One, Niemcy) ze zmodyfikowaną przez Dulbecco pożywką Eagle'a F12 (DMEM) - niską glukozą bez L-glutaminy (Bilogical Industries, Izrael) i 10% ludzką surowicą AB (Capricorn, Niemcy ), 1% 10 000 U/ml penicyliny i 10 000 μg/ml streptomycyny (Gibco, USA). Wszystkie preparaty komórek i procedury hodowli przeprowadzono w aktualnym laboratorium akredytowanym przez Good Manufacturing Practice (cGMP) (Onkim Stem Cell Technologies, Turcja). Komórki namnażane w hodowli były kriokonserwowane w P3 przy użyciu standardowych protokołów kriokonserwacji do czasu użycia w następnym eksperymencie. CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical, Niemcy) zawierający 55% sulfotlenku dimetylu i 5% dekstranu 40 zastosowano jako kriokonserwator. Komórki scharakteryzowano w czasie kriokonserwacji za pomocą analizy cytometrii przepływowej w celu określenia ekspresji dodatnich klasterowych markerów powierzchniowych różnicowania (CD), CD90, CD105, CD73, CD44, CD29 i negatywnych dla CD34, CD45 i CD11b. Za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (qPCR) przeanalizowano ekspresję kilku genów, takich jak martwica nowotworu alfa (TNF alfa) i wimentyna (VIM). Dodatkowo zakończono również analizy kontroli jakości, takie jak analizy mykoplazm i endotoksyn (z wykorzystaniem odpowiednio testu PCR i LAL połączonego z analizą sterylności). Komórki solubilizowano z kriokonserwacji przed przygotowaniem do wstrzyknięcia. Średnia żywotność komórek dla każdego traktowania wynosiła ponad 90,0%, a każdy pacjent otrzymał 2-6 x 106 komórek w 1,5 ml roztworu soli.

Wstrzyknięcie pępowiny WJ-MSC Zawiesina WJ-MSC z hodowli została dostarczona na salę operacyjną łańcuchem chłodniczym i zużyta w ciągu 24 godzin. Łącznie 1,5 ml zawiesiny WJ-MSC natychmiast wstrzyknięto do przestrzeni pod torebką każdego oka. Zabieg przeprowadzono w znieczuleniu miejscowym kroplami chlorowodorku proparakainy (Alcaine, Alcon, USA) w warunkach sterylnych. Na rąbek nałożono atraumatyczny szew trakcyjny 5/0 w celu ułatwienia dostępu i manipulacji w obszarze aplikacji. Po operacji krople do oczu złożone z loteprednolu i tobramycyny podawano cztery razy dziennie przez jeden tydzień, a doustnie klawulonian amoksycyliny (1 gr) podawano dwa razy dziennie przez pięć dni

Powtarzalna stymulacja elektromagnetyczna siatkówki (rEMS) Hełm rEMS (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Ankara, Turcja) stymulował siatkówkę i drogi wzrokowe polem elektromagnetycznym o sile 2000 miligausów, częstotliwości 42 Hz i czasie trwania 30 minut. Wartości te zostały wcześniej określone jako skuteczne w innych badaniach klinicznych i przedklinicznych.

Ramy czasowe

Pacjenci byli oceniani w kilku punktach czasowych badania:

• T0 (linia podstawowa): bezpośrednio przed aplikacjami
• T1: 1. miesiąc aplikacji
• T2: 3. miesiąc aplikacji

Podstawowa miara wyników • Ostrość wzroku ETDRS: Oceny ostrości wzroku uzyskane w badaniach T0 i T2 zostały przeanalizowane i porównane za pomocą testów statystycznych w celu określenia skuteczności.

Miary wyników drugorzędnych

• Czułość pola widzenia: Wskaźnik odchylenia perymetrii dna oka (FPDI, %) FPDI badano w polu widzenia 24/2 skomputeryzowanych zapisów perymetrycznych. FPDI oferuje dane wyjaśniające, ile ze 100 migających punktów i jaki procent pola widzenia może być prawidłowo widziany przez pacjenta. Do analizy VF, aby uniknąć błędów podczas testu, przed aplikacjami przeprowadzono trzy rundy próbne.

• Grubość kompleksu komórek zwojowych (grubość GCC, µm): GCC to grubość od wewnętrznej błony granicznej do wewnętrznej warstwy splotowatej w obszarze 3x3 mm dołka. Pomiar wykonywany automatycznie przez urządzenie OCTA. GCC to całkowita grubość komórek zwojowych i włókien nerwowych siatkówki.

• Wzór wzrokowego potencjału wywołanego (pVEP) pVEP jest obiektywnym testem, który mierzy aktywność elektryczną drogi optycznej w odpowiedzi na bodziec świetlny. Wzory 120' ujawniają odpowiedzi ze wszystkich ćwiartek siatkówki. Pomiary wykonano zgodnie ze standardami ISCEV dla obu oczu. Użyliśmy protokołu VEP wzorca 120', który łączy niejawny czas i amplitudę p100, aby stworzyć wynik numeryczny.