Terapia da Neuropatia Óptica Tóxica por meio da Combinação de Células-Tronco com Estimulação Eletromagnética (Magnovision)

Este estudo clínico prospectivo e aberto de fase 3 foi conduzido na Faculdade de Medicina da Universidade de Ankara, Departamento de Oftalmologia, entre abril de 2019 e abril de 2021. Trinta e seis olhos de 18 pacientes com neuropatia óptica tóxica foram incluídos no estudo. O diagnóstico primário de neuropatia óptica tóxica (TON) foi feito em clínicas de emergência ou terapia intensiva. Os pacientes admitidos dentro de 3 meses após a primeira intervenção foram incluídos no estudo. Todos os pacientes inscritos foram submetidos a um exame oftalmológico completo de rotina, incluindo a medição da melhor acuidade visual corrigida (BCVA) com o gráfico do tratamento precoce da retinopatia diabética (ETDRS) (Topcon CC 100 XP, Japão). Os pacientes foram ainda avaliados com angiografia por tomografia de coerência óptica (OCTA) do RTVue XR (Avanti, Optovue, Fremont, CA, EUA) para analisar e medir as alterações na camada do complexo de células ganglionares (GCC) que fornecia um padrão co-registrado típico -face e plataforma de imagem multimodal transversal. A avaliação funcional do nervo óptico foi seguida pelo teste de campo visual Compass 24/2 (VF) (Compass, CenterVue, Padova, Itália) e teste de potencial evocado visual padrão de 120' (pVEP) (Mon 2018F, Metrovision, Perenchies, França).

Sujeitos Trinta e seis olhos de 18 pacientes TON foram incluídos no estudo.

Os critérios de inclusão consistiram em vários parâmetros:

• Casos de envenenamento com agente tóxico em até 3 meses
• Pacientes com BCVA melhor que 35 letras
• Qualquer grau de perda de campo visual
• Pacientes maiores de 18 anos

Os critérios de exclusão consistiam em vários parâmetros:

• Casos de intoxicação com agente tóxico há mais de 3 meses
• Pacientes com BCVA menor que 35 letras: realizar o teste de campo visual corretamente
• Sequelas neurológicas que não podem ser cooperadas
• Fumar

O mesmo protocolo de tratamento foi aplicado a todos os pacientes com intoxicação por metanol antes da admissão em nossa clínica. Hemodiálise, bicarbonato e etanol foram administrados a todos os pacientes. Os casos foram divididos em 3 grupos de acordo com características demográficas semelhantes.

Grupo 1: Consiste em 12 olhos de 12 pacientes tratados com combinação WJ-MSC e rEMS em um olho. WJ-MSC foi aplicado apenas uma vez antes das aplicações rEMS. A aplicação do rEMS foi iniciada 10 dias após a aplicação do WJ-MSC. O rEMS foi aplicado com um capacete personalizado por 30 minutos após a aplicação do WJ-MSC. As aplicações de rEMS foram repetidas 10 vezes com intervalo de 1 semana. O curso foi avaliado comparando os parâmetros BCVA, FPDI, GCC, latência e amplitude do pVEP-p100 antes e 3º mês de aplicações.

Grupo 2: Consiste em 12 olhos de 12 pacientes tratados apenas com rEMS em um olho. O rEMS foi aplicado com um capacete personalizado por 30 minutos. As aplicações de rEMS foram repetidas 10 vezes com intervalo de 1 semana. O curso foi avaliado comparando os parâmetros BCVA, FPDI, GCC, latência e amplitude do pVEP-p100 antes e 3º mês de aplicações.

Grupo 3: Composto por 12 olhos de 6 pacientes tratados apenas com WJ-MSC em dois olhos. WJ-MSC foi aplicado apenas uma vez para ambos os olhos. O curso foi avaliado comparando os parâmetros BCVA, FPDI, GCC, latência e amplitude do pVEP-p100 antes e 3º mês de aplicações.

Cordão umbilical Preparação de células-tronco mesenquimais derivadas da geleia de Wharton As células-tronco mesenquimais utilizadas neste estudo foram isoladas da geleia de Wharton do cordão umbilical coletada alogênicamente de um único doador com o consentimento da mãe. A amostra de cordão umbilical foi tratada seguindo várias etapas. Resumidamente, o tecido do cordão foi lavado duas vezes com solução salina tamponada com fosfato (Lonza, Suíça) e a parte da geléia de Wharton foi picada usando uma pinça e um bisturi. Pedaços picados foram cultivados em uma placa de cultura de células (Greiner Bio-One, Alemanha) com meio de Eagle modificado por Dulbecco F12 (DMEM) - baixa glicose sem L-glutamina (Bilogical Industries, Israel) e 10% de soro humano AB (Capricórnio, Alemanha ), 1% de penicilina 10.000 U/mL e 10.000 μg/mL de estreptomicina (Gibco, EUA). Todas as preparações de células e procedimentos de cultivo foram conduzidos em um laboratório credenciado de Boas Práticas de Fabricação (cGMP) (Onkim Stem Cell Technologies, Turquia). As células expandidas em cultura foram criopreservadas em P3 usando protocolos de criopreservação padrão até serem usadas no experimento seguinte. CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical, Germany) contendo 55% de Dimetil Sulfóxido e 5% de Dextran 40 foi usado como criopreservante. As células foram caracterizadas no momento da criopreservação usando análise de citometria de fluxo para determinar a expressão dos marcadores de superfície de agrupamento positivo de diferenciação (CD), CD90, CD105, CD73, CD44, CD29 e negativo para CD34, CD45 e CD11b. Por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR), foram analisadas as expressões de vários genes, como necrose tumoral alfa (TNF alfa) e vimentina (VIM). Além disso, análises de controle de qualidade, como análises de micoplasma e endotoxinas (usando o teste de PCR e LAL combinado com análise de esterilidade, respectivamente) também foram concluídas. As células foram solubilizadas da criopreservação antes de serem preparadas para injeção. A viabilidade celular média para cada tratamento foi superior a 90,0% e cada paciente recebeu 2-6 x 106 células em 1,5 ml de solução salina.

Injeção de WJ-MSCs de cordão umbilical A suspensão de WJ-MSCs da cultura foi entregue à sala de operação por cadeia de frio e usada em 24 horas. Um total de 1,5 ml da suspensão WJ-MSC foi imediatamente injetado no espaço subtenonal de cada olho. O procedimento foi realizado sob anestesia tópica com gotas de cloridrato de proparacaína (Alcaine, Alcon, EUA) e condições estéreis. Sutura de tração atraumática 5/0 foi aplicada ao limbo para facilitar o acesso e manipulação da área de aplicação. No pós-operatório, colírios combinados de loteprednol e tobramicina foram administrados quatro vezes ao dia durante uma semana, e amoxicilina clavulonato oral (1 g) foi administrado duas vezes ao dia durante cinco dias

Estimulação eletromagnética repetitiva da retina (rEMS) O capacete rEMS (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Ancara, Turquia) estimulou a retina e as vias visuais com uma intensidade de campo eletromagnético de 2.000 miligauss, frequência de 42 hertz e duração de 30 minutos. Esses valores foram previamente determinados como eficazes para outros estudos clínicos e pré-clínicos.

Prazo

Os pacientes foram avaliados em vários momentos do estudo:

• T0 (basal): imediatamente antes das aplicações
• T1: 1º mês de aplicações
• T2: 3º mês de candidaturas

Medida de resultado primário • Acuidade visual ETDRS: Os escores de acuidade visual obtidos nos exames T0 e T2 foram analisados ​​e comparados usando testes estatísticos para determinar a eficácia.

Medidas de resultados secundários

• Sensibilidade do campo visual: Índice de desvio da perimetria do fundo (FPDI, %) O FPDI foi examinado no campo visual 24/2 dos registros computadorizados da perimetria. O FPDI oferece dados que explicam quantos dos 100 pontos de flash e que porcentagem do campo visual podem ser vistos corretamente pelo paciente. Para a análise de VF, a fim de evitar erros durante o teste, foram realizadas três rodadas de prática antes das aplicações.

• Espessura do complexo de células ganglionares (espessura GCC, µm): GCC é a espessura da membrana limitante interna até a camada plexiforme interna nos 3x3 mm da área foveal. A medição feita automaticamente pelo dispositivo OCTA. GCC é a espessura total das células ganglionares e fibras nervosas da retina.

• Potencial evocado visual padrão (pVEP) O pVEP é um teste objetivo que mede a atividade elétrica da via óptica em resposta a um estímulo luminoso. Os padrões de 120' revelam respostas de todos os quadrantes da retina. As medidas foram feitas de acordo com os padrões ISCEV para ambos os olhos. Usamos o protocolo VEP de padrão 120', que combina tempo e amplitude implícitos de p100, para criar um resultado numérico.