Behandling av toksisk optisk nevropati via kombinasjon av stamceller med elektromagnetisk stimulering (Magnovision)

Denne prospektive, åpne kliniske fase-3-studien ble utført ved Ankara University Faculty of Medicine, Department of Ophthalmology mellom april 2019 og april 2021. Trettiseks øyne av 18 pasienter med toksisk optisk nevropati ble inkludert i studien. Den primære toksiske optisk nevropati (TON) diagnosen ble stilt på akutt- eller intensivklinikker. Pasienter som ble innlagt innen 3 måneder etter første intervensjon ble inkludert i studien. Alle påmeldte pasienter gjennomgikk en fullstendig rutinemessig oftalmisk undersøkelse, inkludert best korrigerte synsskarphet (BCVA) målingen med tidlig behandling av diabetisk retinopati studie (ETDRS) diagram (Topcon CC 100 XP, Japan). Pasientene ble videre evaluert med optisk koherenstomografi angiografi (OCTA) fra RTVue XR (Avanti, Optovue, Fremont, CA, USA) for å analysere og måle endringene i ganglioncellekomplekset (GCC) laget som ga en typisk samregistrert en -ansikts- og tverrsnitts multimodal avbildningsplattform. Funksjonell evaluering av synsnerven ble etterfulgt av Compass 24/2 synsfelt (VF) test (Compass, CenterVue, Padova, Italia) og 120' mønster visual evoked potential (pVEP) test (man 2018F, Metrovision, Perenchies, Frankrike).

Forsøkspersoner Trettiseks øyne av 18 TON-pasienter ble inkludert i studien.

Inkluderingskriterier besto av flere parametere:

• Tilfeller forgiftet med et giftig middel innen 3 måneder
• Pasienter med BCVA bedre enn 35 bokstaver
• Enhver grad av synsfelttap
• Pasienter over 18 år

Ekskluderingskriterier besto av flere parametere:

• Tilfeller forgiftet med et giftig middel mer enn 3 måneder
• Pasienter med BCVA mindre enn 35 bokstaver: for å utføre synsfelttesten riktig
• Nevrologiske følgetilstander som ikke kan samarbeides
• Røyking

Samme behandlingsprotokoll ble brukt på alle pasienter med metanolforgiftning før innleggelse til vår klinikk. Hemodialyse, bikarbonat og etanol ble administrert til alle pasienter. Sakene ble delt inn i 3 grupper etter lignende demografiske kjennetegn.

Gruppe 1: Består av 12 øyne av 12 pasienter behandlet med WJ-MSC og rEMS kombinasjon i ett øye. WJ-MSC ble brukt bare én gang før rEMS-søknader. rEMS-applikasjonen ble startet 10 dager etter WJ-MSC-applikasjonen. rEMS ble påført med en spesialdesignet hjelm i 30 minutter etter WJ-MSC-applikasjonen. rEMS-applikasjoner ble gjentatt 10 ganger med 1 ukes intervall. Kurset ble evaluert ved å sammenligne BCVA, FPDI, GCC tykkelse, pVEP-p100 latens og amplitude parametere før og 3. måned av applikasjoner.

Gruppe 2: Består av 12 øyne av 12 pasienter behandlet med kun rEMS i ett øye. rEMS ble brukt med en spesialdesignet hjelm i 30 minutter. rEMS-applikasjoner ble gjentatt 10 ganger med 1 ukes intervall. Kurset ble evaluert ved å sammenligne BCVA, FPDI, GCC tykkelse, pVEP-p100 latens og amplitude parametere før og 3. måned av applikasjoner.

Gruppe 3: Består av 12 øyne av 6 pasienter behandlet med kun WJ-MSC i to øyne. WJ-MSC ble kun påført én gang for begge øyne. Kurset ble evaluert ved å sammenligne BCVA, FPDI, GCC tykkelse, pVEP-p100 latens og amplitude parametere før og 3. måned av applikasjoner.

Navlestreng Whartons gelé-avledede mesenkymale stamceller forberedelse De mesenkymale stamcellene som ble brukt i denne studien ble isolert fra Whartons gelé fra navlestrengen som ble samlet allogent fra en enkelt donor med morens samtykke. Navlestrengsprøven ble behandlet etter flere trinn. Kort fortalt ble ledningsvev vasket to ganger med fosfatbufret saltvann (Lonza, Sveits) og Whartons gelédel ble hakket ved bruk av tang og en skalpell. Hakkede biter ble dyrket i en cellekulturskål (Greiner Bio-One, Tyskland) med Dulbeccos modifiserte Eagle's medium F12 (DMEM)-lav glukose uten L-glutamin (Bilogical Industries, Israel) og 10% humant AB-serum (Capricorn, Tyskland) ), 1 % 10.000 U/mL penicillin og 10.000 μg/mL streptomycin (Gibco, USA). Alle cellepreparater og dyrkingsprosedyrer ble utført i et gjeldende Good Manufacturing Practice (cGMP) akkreditert laboratorium (Onkim Stem Cell Technologies, Tyrkia). De kulturekspanderte cellene ble kryokonservert ved P3 ved bruk av standard kryokonserveringsprotokoller inntil de ble brukt i følgende eksperiment. CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical, Tyskland) som inneholdt 55 % dimetylsulfoksid og 5 % dextran 40 ble brukt som kryopserveringsmiddel. Cellene ble karakterisert på tidspunktet for kryokonservering ved bruk av flowcytometrisk analyse for å bestemme uttrykket av den positive klyngen av differensiering (CD) overflatemarkører, CD90, CD105, CD73, CD44, CD29 og negativ for CD34, CD45 og CD11b. Ved å bruke sanntids polymerasekjedereaksjon (qPCR) ble uttrykkene til flere gener, som tumornekrose alfa (TNF alfa) og vimentin (VIM) analysert. I tillegg ble kvalitetskontrollanalyser, som mykoplasma- og endotoksinanalyser (ved bruk av henholdsvis PCR- og LAL-testen kombinert med sterilitetsanalyse) også fullført. Celler ble solubilisert fra kryokonservering før de ble klargjort for injeksjon. Gjennomsnittlig cellelevedyktighet for hver behandling var over 90,0 %, og hver pasient fikk 2-6 x 106 celler i en 1,5 ml saltoppløsning.

Injeksjon av navlestreng WJ-MSCs WJ-MSCs-suspensjonen fra kulturen ble levert til operasjonssalen med kjølekjede og brukt innen 24 timer. Totalt 1,5 ml av WJ-MSC-suspensjonen ble umiddelbart injisert i subtenonrommet i hvert øye. Prosedyren ble utført under topisk anestesi med proparakainhydrokloriddråper (Alcaine, Alcon, USA) og sterile forhold. 5/0 atraumatisk trekksutur ble påført limbus for enkel tilgang og manipulering til påføringsområdet. Postoperativt ble loteprednol og tobramycin kombinasjon øyedråper gitt fire ganger daglig i en uke, og oral amoxicillin clavulonat (1 gr) ble gitt to ganger daglig i fem dager

Retinal repeterende elektromagnetisk stimulering (rEMS) rEMS-hjelmen (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Ankara, Tyrkia) stimulerte netthinnen og synsbanene med en elektromagnetisk feltstyrke på 2000 miligauss, frekvens på 42 hertz og varighet 30 minutter. Disse verdiene ble tidligere fastslått å være effektive for andre kliniske og prekliniske studier.

Tidsramme

Pasientene ble evaluert ved flere studietidspunkter:

• T0 (grunnlinje): rett før søknadene
• T1: 1. søknadsmåned
• T2: 3. måned med søknader

Primært utfallsmål • ETDRS synsskarphet: Synsskarphet oppnådd fra T0- og T2-undersøkelsene ble analysert og sammenlignet ved hjelp av statistiske tester for å bestemme effektiviteten.

Sekundære utfallsmål

• Synsfeltsensitivitet: Fundus perimetri avviksindeks (FPDI, %) FPDI ble undersøkt i det 24/2 synsfeltet til de datastyrte perimetriregistrene. FPDI tilbyr data som forklarer hvor mange av de 100 blinkpunktene og hvor stor prosentandel av synsfeltet som kan ses riktig av pasienten. For VF-analyse, for å unngå feil under testen, ble det gjennomført øvingsrunder tre ganger før søknader.

• Ganglioncellekomplekstykkelse (GCC-tykkelse, µm): GCC er tykkelsen fra den indre begrensende membranen til det indre plexiforme laget i fovealområdet på 3x3 mm. Målingen utføres automatisk av OCTA-enheten. GCC er den totale tykkelsen av ganglioncellene og retinale nervefibre.

• Pattern Visual evoked potential (pVEP) pVEP er en objektiv test som måler den elektriske aktiviteten til den optiske banen som respons på en lysstimulus. 120'-mønstrene avslører responser fra alle netthinnekvadrantene. Målingene ble tatt i henhold til ISCEV-standardene for begge øyne. Vi brukte 120'pattern VEP-protokollen, som kombinerer p100 implisitt tid og amplitude, for å lage et numerisk resultat.