Thérapie de la neuropathie optique toxique via une combinaison de cellules souches avec une stimulation électromagnétique (Magnovision)

Cette étude clinique prospective de phase 3 en ouvert a été menée à la Faculté de médecine de l'Université d'Ankara, Département d'ophtalmologie, entre avril 2019 et avril 2021. Trente-six yeux de 18 patients atteints de neuropathie optique toxique ont été inclus dans l'étude. Le diagnostic primaire de neuropathie optique toxique (TON) a été posé dans des cliniques d'urgence ou de soins intensifs. Les patients admis dans les 3 mois suivant la première intervention ont été inclus dans l'étude. Tous les patients inscrits ont subi un examen ophtalmique de routine complet, y compris la mesure de la meilleure acuité visuelle corrigée (MAVC) avec le tableau de l'étude de traitement précoce de la rétinopathie diabétique (ETDRS) (Topcon CC 100 XP, Japon). Les patients ont ensuite été évalués avec une angiographie par tomographie par cohérence optique (OCTA) de RTVue XR (Avanti, Optovue, Fremont, CA, USA) pour analyser et mesurer les changements dans la couche du complexe de cellules ganglionnaires (GCC) qui a fourni une co-enregistrement typique en Plate-forme d'imagerie multimodale faciale et transversale. L'évaluation fonctionnelle du nerf optique a été suivie d'un test de champ visuel (VF) Compass 24/2 (Compass, CenterVue, Padoue, Italie) et d'un test de potentiel évoqué visuel (pVEP) à 120' (Mon 2018F, Metrovision, Perenchies, France).

Sujets Trente-six yeux de 18 patients TON ont été inclus dans l'étude.

Les critères d'inclusion comprenaient plusieurs paramètres :

• Cas empoisonnés par un agent toxique dans les 3 mois
• Patients avec MAVC supérieur à 35 lettres
• Tout degré de perte de champ visuel
• Patients de plus de 18 ans

Les critères d'exclusion comprenaient plusieurs paramètres :

• Cas empoisonnés par un agent toxique plus de 3 mois
• Patients avec MAVC inférieur à 35 lettres : pour réaliser correctement le test du champ visuel
• Séquelles neurologiques qui ne peuvent pas être coopérées
• Fumeur

Le même protocole de traitement a été appliqué à tous les patients intoxiqués au méthanol avant leur admission dans notre clinique. L'hémodialyse, le bicarbonate et l'éthanol ont été administrés à tous les patients. Les cas ont été divisés en 3 groupes selon des caractéristiques démographiques similaires.

Groupe 1 : se compose de 12 yeux de 12 patients traités avec une combinaison WJ-MSC et rEMS dans un œil. WJ-MSC n'a été appliqué qu'une seule fois avant les applications rEMS. L'application rEMS a été lancée 10 jours après l'application WJ-MSC. Le rEMS a été appliqué avec un casque conçu sur mesure pendant 30 minutes après l'application WJ-MSC. Les applications de rEMS ont été répétées 10 fois avec un intervalle d'une semaine. L'évolution a été évaluée en comparant les paramètres BCVA, FPDI, GCC épaisseur, pVEP-p100 latence et amplitude avant et 3ème mois d'application.

Groupe 2 : se compose de 12 yeux de 12 patients traités avec un seul rEMS dans un œil. Le rEMS a été appliqué avec un casque conçu sur mesure pendant 30 minutes. Les applications de rEMS ont été répétées 10 fois avec un intervalle d'une semaine. L'évolution a été évaluée en comparant les paramètres BCVA, FPDI, GCC épaisseur, pVEP-p100 latence et amplitude avant et 3ème mois d'application.

Groupe 3 : se compose de 12 yeux de 6 patients traités avec seulement WJ-MSC dans deux yeux. WJ-MSC a été appliqué une seule fois pour les deux yeux. L'évolution a été évaluée en comparant les paramètres BCVA, FPDI, GCC épaisseur, pVEP-p100 latence et amplitude avant et 3ème mois d'application.

Cordon ombilical Préparation de cellules souches mésenchymateuses dérivées de la gelée de Wharton Les cellules souches mésenchymateuses utilisées dans cette étude ont été isolées de la gelée de Wharton du cordon ombilical qui a été prélevée de manière allogénique auprès d'un seul donneur avec le consentement de la mère. L'échantillon de cordon ombilical a été traité en plusieurs étapes. En bref, le tissu du cordon a été lavé deux fois avec une solution saline tamponnée au phosphate (Lonza, Suisse) et la partie de gelée de Wharton a été hachée à l'aide de forceps et d'un scalpel. Les morceaux hachés ont été cultivés dans une boîte de culture cellulaire (Greiner Bio-One, Allemagne) avec du milieu d'aigle modifié de Dulbecco F12 (DMEM) à faible teneur en glucose sans L-glutamine (Bilogical Industries, Israël) et 10 % de sérum AB humain (Capricorn, Allemagne ), 1 % de pénicilline 10 000 U/mL et 10 000 μg/mL de streptomycine (Gibco, États-Unis). Toutes les préparations cellulaires et les procédures de culture ont été menées dans un laboratoire accrédité par les bonnes pratiques de fabrication (cGMP) (Onkim Stem Cell Technologies, Turquie). Les cellules développées en culture ont été cryoconservées à P3 en utilisant des protocoles de cryoconservation standard jusqu'à leur utilisation dans l'expérience suivante. CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical, Allemagne) contenant 55 % de diméthylsulfoxyde et 5 % de dextran 40 a été utilisé comme cryoconservateur. Les cellules ont été caractérisées au moment de la cryoconservation à l'aide d'une analyse par cytométrie en flux pour déterminer l'expression du groupe positif de marqueurs de surface de différenciation (CD), CD90, CD105, CD73, CD44, CD29 et négatif pour CD34, CD45 et CD11b. À l'aide de la réaction en chaîne par polymérase en temps réel (qPCR), les expressions de plusieurs gènes, tels que la nécrose tumorale alpha (TNF alpha) et la vimentine (VIM) ont été analysées. De plus, des analyses de contrôle de la qualité, telles que des analyses de mycoplasmes et d'endotoxines (utilisant respectivement les tests PCR et LAL combinés à l'analyse de la stérilité) ont également été réalisées. Les cellules ont été solubilisées à partir de la cryoconservation avant d'être préparées pour l'injection. La viabilité cellulaire moyenne pour chaque traitement était supérieure à 90,0 % et chaque patient a reçu 2 à 6 x 106 cellules dans une solution saline de 1,5 ml.

Injection de WJ-MSCs de cordon ombilical La suspension de WJ-MSCs issue de la culture a été livrée au bloc opératoire par chaîne du froid et utilisée dans les 24 heures. Un total de 1,5 ml de la suspension WJ-MSC a été immédiatement injecté dans l'espace sous-tenon de chaque œil. La procédure a été réalisée sous anesthésie topique avec des gouttes de chlorhydrate de proparacaïne (Alcaine, Alcon, USA) et des conditions stériles. Une suture de traction atraumatique 5/0 a été appliquée au limbe pour faciliter l'accès et la manipulation à la zone d'application. En postopératoire, des gouttes ophtalmiques combinées de lotéprednol et de tobramycine ont été administrées quatre fois par jour pendant une semaine, et du clavulonate d'amoxicilline par voie orale (1 gr) a été administré deux fois par jour pendant cinq jours.

Stimulation électromagnétique répétitive rétinienne (rEMS) Le casque rEMS (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Ankara, Turquie) a stimulé la rétine et les voies visuelles avec une force de champ électromagnétique de 2000 miligauss, une fréquence de 42 hertz et une durée de 30 minutes. Ces valeurs ont été précédemment déterminées comme étant efficaces pour d'autres études cliniques et précliniques.

Plage de temps

Les patients ont été évalués à plusieurs moments de l'étude :

• T0 (baseline) : immédiatement avant les applications
• T1 : 1er mois d'applications
• T2 : 3ème mois d'applications

Principal critère de jugement • Acuité visuelle ETDRS : Les scores d'acuité visuelle obtenus aux examens T0 et T2 ont été analysés et comparés à l'aide de tests statistiques pour déterminer l'efficacité.

Mesures de résultats secondaires

• Sensibilité du champ visuel : Indice de déviation périmétrique du fond d'œil (FPDI, %) Le FPDI a été examiné dans le champ visuel 24/2 des enregistrements périmétriques informatisés. Le FPDI offre des données expliquant combien des 100 points clignotants et quel pourcentage du champ visuel peuvent être correctement vus par le patient. Pour l'analyse VF, afin d'éviter les erreurs lors du test, des tours d'entraînement ont été effectués trois fois avant les applications.

• Épaisseur du complexe de cellules ganglionnaires (épaisseur GCC, µm) : GCC est l'épaisseur entre la membrane limitante interne et la couche plexiforme interne dans les 3x3 mm de la zone fovéale. La mesure est effectuée automatiquement par l'appareil OCTA. GCC est l'épaisseur totale des cellules ganglionnaires et des fibres nerveuses rétiniennes.

• Modèle de potentiel évoqué visuel (pVEP) Le pVEP est un test objectif qui mesure l'activité électrique de la voie optique en réponse à un stimulus lumineux. Les modèles de 120' révèlent les réponses de tous les quadrants rétiniens. Les mesures ont été prises selon les normes ISCEV pour les deux yeux. Nous avons utilisé le protocole VEP 120'pattern, qui combine le temps implicite et l'amplitude p100, pour créer un résultat numérique.