Behandling av toxisk optisk neuropati via kombination av stamceller med elektromagnetisk stimulering (Magnovision)

Denna prospektiva, öppna kliniska fas-3-studie genomfördes vid Ankara University Faculty of Medicine, Department of Ophthalmology mellan april 2019 och april 2021. Trettiosex ögon av 18 patienter med toxisk optisk neuropati inkluderades i studien. Den primära toxiska optisk neuropati (TON) diagnosen gjordes på akutmottagningar eller intensivvårdskliniker. Patienter som lades in inom 3 månader efter den första interventionen inkluderades i studien. Alla inkluderade patienter genomgick en fullständig rutinmässig oftalmisk undersökning, inklusive mätningen av bäst korrigerad synskärpa (BCVA) med den tidiga behandlingen av diabetisk retinopati (ETDRS) diagram (Topcon CC 100 XP, Japan). Patienterna utvärderades ytterligare med optisk koherenstomografi angiografi (OCTA) från RTVue XR (Avanti, Optovue, Fremont, CA, USA) för att analysera och mäta förändringarna i skiktet av ganglioncellkomplex (GCC) som gav en typisk samregistrerad en - multimodal bildplattform för ansikte och tvärsnitt. Funktionell utvärdering av synnerven följdes av Compass 24/2 synfältstest (VF) (Compass, CenterVue, Padova, Italien) och 120' mönster visuellt framkallad potential (pVEP) test (mån 2018F, Metrovision, Perenchies, Frankrike).

Försökspersoner Trettiosex ögon från 18 TON-patienter inkluderades i studien.

Inklusionskriterier bestod av flera parametrar:

• Fall förgiftade med ett giftigt ämne inom 3 månader
• Patienter med BCVA bättre än 35 bokstäver
• Vilken grad av synfältsförlust som helst
• Patienter över 18 år

Uteslutningskriterier bestod av flera parametrar:

• Fall förgiftade med ett giftigt medel mer än 3 månader
• Patienter med BCVA mindre än 35 bokstäver: att utföra synfältstestet korrekt
• Neurologiska följdsjukdomar som inte går att samverka
• Rökning

Samma behandlingsprotokoll tillämpades på alla patienter med metanolförgiftning före inläggning på vår klinik. Hemodialys, bikarbonat och etanol administrerades till alla patienter. Fallen delades in i 3 grupper enligt liknande demografiska egenskaper.

Grupp 1: Består av 12 ögon av 12 patienter behandlade med WJ-MSC och rEMS kombination i ett öga. WJ-MSC applicerades endast en gång före rEMS-ansökningar. rEMS-applikationen startade 10 dagar efter WJ-MSC-applikationen. rEMS applicerades med en specialdesignad hjälm i 30 minuter efter WJ-MSC-applikationen. rEMS-applikationer upprepades 10 gånger med 1 veckas intervall. Kursen utvärderades genom att jämföra parametrarna för BCVA, FPDI, GCC-tjocklek, pVEP-p100-latens och amplitudparametrar före och 3:e månadens applikationer.

Grupp 2: Består av 12 ögon av 12 patienter behandlade med endast rEMS i ett öga. rEMS applicerades med en specialdesignad hjälm i 30 minuter. rEMS-applikationer upprepades 10 gånger med 1 veckas intervall. Kursen utvärderades genom att jämföra parametrarna för BCVA, FPDI, GCC-tjocklek, pVEP-p100-latens och amplitudparametrar före och 3:e månadens applikationer.

Grupp 3: Består av 12 ögon av 6 patienter behandlade med endast WJ-MSC i två ögon. WJ-MSC applicerades endast en gång för båda ögonen. Kursen utvärderades genom att jämföra parametrarna för BCVA, FPDI, GCC-tjocklek, pVEP-p100-latens och amplitudparametrar före och 3:e månadens applikationer.

Beredning av navelsträngen Whartons geléhärledda mesenkymala stamceller De mesenkymala stamcellerna som användes i denna studie isolerades från Whartons gelé från navelsträngen som samlades in allogent från en enda donator med moderns samtycke. Navelsträngsprovet behandlades efter flera steg. Kortfattat tvättades navelvävnad två gånger med fosfatbuffrad saltlösning (Lonza, Schweiz) och Whartons gelédel maldes med hjälp av pincett och en skalpell. Hackade bitar odlades i en cellodlingsskål (Greiner Bio-One, Tyskland) med Dulbeccos modifierade Eagle's medium F12 (DMEM)-lågglukos utan L-glutamin (Bilogical Industries, Israel) och 10% humant AB-serum (Capricorn, Tyskland) ), 1 % 10 000 U/ml penicillin och 10 000 μg/ml streptomycin (Gibco, USA). Alla cellpreparat och odlingsprocedurer genomfördes i ett aktuellt god tillverkningssed (cGMP) ackrediterat laboratorium (Onkim Stem Cell Technologies, Turkiet). De kulturexpanderade cellerna kryokonserverades vid P3 med användning av standardiserade kryokonserveringsprotokoll tills de användes i följande experiment. CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical, Tyskland) innehållande 55 % dimetylsulfoxid och 5 % Dextran 40 användes som kryokonserveringsmedel. Cellerna karakteriserades vid tidpunkten för kryokonservering med användning av flödescytometrisk analys för att bestämma uttrycket av de positiva klustret av differentiering (CD) ytmarkörer, CD90, CD105, CD73, CD44, CD29 och negativ för CD34, CD45 och CD11b. Med hjälp av realtidspolymeraskedjereaktion (qPCR) analyserades uttrycken av flera gener, såsom tumörnekros alfa (TNF alfa) och vimentin (VIM). Dessutom slutfördes kvalitetskontrollanalyser, såsom mykoplasma- och endotoxinanalyser (med PCR- respektive LAL-test kombinerat med sterilitetsanalys). Celler solubiliserades från kryokonservering innan de förbereddes för injektion. Genomsnittlig cellviabilitet för varje behandling var över 90,0 %, och varje patient fick 2-6 x 106 celler i en 1,5 ml saltlösning.

Injektion av navelsträngs-WJ-MSCs WJ-MSCs-suspensionen från odlingen levererades till operationssalen med kylkedja och användes inom 24 timmar. Totalt 1,5 ml av WJ-MSC-suspensionen injicerades omedelbart i subtenonutrymmet i varje öga. Proceduren utfördes under topisk anestesi med proparakainhydrokloriddroppar (Alcaine, Alcon, USA) och sterila förhållanden. 5/0 atraumatisk dragsutur applicerades på limbus för enkel åtkomst och hantering till appliceringsområdet. Postoperativt gavs loteprednol och tobramycin kombinationsögondroppar fyra gånger per dag under en vecka, och oralt amoxicillin clavulonat (1 g) gavs två gånger om dagen i fem dagar

Repetitiv elektromagnetisk stimulering i näthinnan (rEMS) rEMS-hjälmen (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Ankara, Turkiet) stimulerade näthinnan och synvägarna med en elektromagnetisk fältstyrka på 2000 miligauss, frekvens på 42 hertz och varaktighet 30 minuter. Dessa värden har tidigare fastställts vara effektiva för andra kliniska och prekliniska studier.

Tidsram

Patienterna utvärderades vid flera studietillfällen:

• T0 (baslinje): omedelbart före ansökningarna
• T1: 1:a ansökningsmånaden
• T2: 3:e månaden av ansökningar

Primärt utfallsmått • ETDRS-synskärpa: Synskärpans poäng erhållna från T0- och T2-undersökningarna analyserades och jämfördes med statistiska tester för att fastställa effektiviteten.

Sekundära utfallsmått

• Synfältskänslighet: Fundus perimetri deviation index (FPDI, %) FPDI undersöktes i 24/2 synfältet i de datoriserade perimetriposterna. FPDI erbjuder data som förklarar hur många av de 100 blinkpunkterna och vilken procentandel av synfältet som kunde ses korrekt av patienten. För VF-analys, för att undvika misstag under testet, genomfördes övningsrundor tre gånger före applikationer.

• Gangliecellkomplextjocklek (GCC-tjocklek, µm): GCC är tjockleken från det inre begränsande membranet till det inre plexiformade lagret i fovealområdet på 3x3 mm. Mätningen görs automatiskt av OCTA-enheten. GCC är den totala tjockleken av ganglioncellerna och retinala nervfibrer.

• Pattern Visual evoked potential (pVEP) pVEP är ett objektivt test som mäter den elektriska aktiviteten hos den optiska vägen som svar på en ljusstimulus. 120'-mönstren avslöjar svar från alla näthinnekvadranter. Mätningarna gjordes enligt ISCEV-standarderna för båda ögonen. Vi använde 120'pattern VEP-protokollet, som kombinerar p100 implicit tid och amplitud, för att skapa ett numeriskt resultat.