Terapi af toksisk optisk neuropati via kombination af stamceller med elektromagnetisk stimulation (Magnovision)

Dette prospektive, åbne kliniske fase-3-studie blev udført på Ankara University Faculty of Medicine, Department of Ophthalmology mellem april 2019 og april 2021. Seksogtredive øjne af 18 patienter med toksisk optisk neuropati blev inkluderet i undersøgelsen. Den primære toksiske optisk neuropati (TON) diagnose blev stillet på akut- eller intensivklinikker. Patienter, der blev indlagt inden for 3 måneder efter den første intervention, blev inkluderet i undersøgelsen. Alle tilmeldte patienter gennemgik en komplet rutinemæssig oftalmisk undersøgelse, inklusive den bedst korrigerede synsskarphed (BCVA) måling med den tidlige behandling af diabetisk retinopati undersøgelse (ETDRS) diagram (Topcon CC 100 XP, Japan). Patienterne blev yderligere evalueret med optisk kohærens tomografi angiografi (OCTA) fra RTVue XR (Avanti, Optovue, Fremont, CA, USA) for at analysere og måle ændringerne i ganglioncellekomplekset (GCC) laget, der gav en typisk co-registreret en -ansigts- og tværsnits multimodal billeddannelsesplatform. Funktionel evaluering af optisk nerve blev efterfulgt af Compass 24/2 synsfelt (VF) test (Compass, CenterVue, Padova, Italien) og 120' mønster visual evoked potential (pVEP) test (man 2018F, Metrovision, Perenchies, Frankrig).

Forsøgspersoner Seksogtredive øjne fra 18 TON-patienter blev inkluderet i undersøgelsen.

Inklusionskriterier bestod af flere parametre:

• Tilfælde forgiftet med et giftigt middel inden for 3 måneder
• Patienter med BCVA bedre end 35 bogstaver
• Enhver grad af synsfelttab
• Patienter over 18 år

Eksklusionskriterier bestod af flere parametre:

• Tilfælde forgiftet med et giftigt middel mere end 3 måneder
• Patienter med BCVA mindre end 35 bogstaver: for at udføre synsfeltstesten korrekt
• Neurologiske følgesygdomme, der ikke kan samarbejdes
• Rygning

Samme behandlingsprotokol blev anvendt på alle patienter med methanolforgiftning før indlæggelse på vores klinik. Hæmodialyse, bicarbonat og ethanol blev administreret til alle patienter. Sagerne blev opdelt i 3 grupper efter lignende demografiske karakteristika.

Gruppe 1: Består af 12 øjne af 12 patienter behandlet med WJ-MSC og rEMS kombination i det ene øje. WJ-MSC blev kun anvendt én gang før rEMS ansøgninger. rEMS-applikationen blev startet 10 dage efter WJ-MSC-applikationen. rEMS-applikationen blev påført med en specialdesignet hjelm i 30 minutter efter WJ-MSC-applikationen. rEMS-applikationer blev gentaget 10 gange med 1 uges interval. Forløbet blev evalueret ved at sammenligne BCVA, FPDI, GCC tykkelse, pVEP-p100 latens og amplitude parametre før og 3. måneds applikationer.

Gruppe 2: Består af 12 øjne af 12 patienter behandlet med kun rEMS i det ene øje. rEMS blev påført med en specialdesignet hjelm i 30 minutter. rEMS-applikationer blev gentaget 10 gange med 1 uges interval. Forløbet blev evalueret ved at sammenligne BCVA, FPDI, GCC tykkelse, pVEP-p100 latens og amplitude parametre før og 3. måneds applikationer.

Gruppe 3: Består af 12 øjne af 6 patienter behandlet med kun WJ-MSC i to øjne. WJ-MSC blev kun påført én gang for begge øjne. Forløbet blev evalueret ved at sammenligne BCVA, FPDI, GCC tykkelse, pVEP-p100 latens og amplitude parametre før og 3. måneds applikationer.

Navlestreng Whartons gelé-afledte mesenkymale stamceller præparation De mesenchymale stamceller, der blev brugt i denne undersøgelse, blev isoleret fra Whartons gelé fra navlestrengen, der blev indsamlet allogent fra en enkelt donor med moderens samtykke. Navlestrengsprøven blev behandlet efter flere trin. Kort fortalt blev ledningsvæv vasket to gange med phosphatbufret saltvand (Lonza, Schweiz), og Wharton's gelédelen blev hakket under anvendelse af en pincet og en skalpel. Hakkede stykker blev dyrket i en cellekulturskål (Greiner Bio-One, Tyskland) med Dulbeccos modificerede Eagle's medium F12 (DMEM)-lav glukose uden L-glutamin (Bilogical Industries, Israel) og 10% humant AB-serum (Stenbukken, Tyskland) ), 1 % 10.000 U/ml penicillin og 10.000 μg/ml streptomycin (Gibco, USA). Alle celleforberedelser og dyrkningsprocedurer blev udført i et akkrediteret laboratorium for god fremstillingspraksis (cGMP) (Onkim Stem Cell Technologies, Tyrkiet). De kulturekspanderede celler blev kryokonserveret ved P3 under anvendelse af standard kryokonserveringsprotokoller, indtil de blev brugt i det følgende eksperiment. CryoSure-DEX40 (WAK-Chemie Medical, Tyskland) indeholdende 55 % dimethylsulfoxid og 5 % dextran 40 blev brugt som kryopreserveringsmiddel. Cellerne blev karakteriseret på tidspunktet for kryokonservering ved anvendelse af flowcytometrisk analyse for at bestemme ekspressionen af ​​den positive klynge af differentiering (CD) overflademarkører, CD90, CD105, CD73, CD44, CD29 og negativ for CD34, CD45 og CD11b. Ved hjælp af real-time polymerase kædereaktion (qPCR) blev udtryk for flere gener, såsom tumor nekrose alfa (TNF alfa) og vimentin (VIM) analyseret. Derudover blev kvalitetskontrolanalyser, såsom mycoplasma- og endotoksinanalyser (ved hjælp af henholdsvis PCR- og LAL-testen kombineret med sterilitetsanalyse), også gennemført. Celler blev solubiliseret fra kryokonservering, før de blev klargjort til injektion. Gennemsnitlig cellelevedygtighed for hver behandling var over 90,0 %, og hver patient modtog 2-6 x 106 celler i en 1,5 ml saltvandsopløsning.

Injektion af navlestrengs-WJ-MSCs WJ-MSCs-suspensionen fra kulturen blev leveret til operationsstuen ved hjælp af en kølekæde og anvendt inden for 24 timer. I alt 1,5 ml af WJ-MSC-suspensionen blev straks injiceret i subtenonrummet i hvert øje. Proceduren blev udført under topisk anæstesi med proparacainhydrochloriddråber (Alcaine, Alcon, USA) og sterile forhold. 5/0 atraumatisk træksutur blev påført limbus for nem adgang og manipulation til påføringsområdet. Postoperativt blev loteprednol og tobramycin kombination øjendråber givet fire gange dagligt i en uge, og oral amoxicillin clavulonat (1 g) blev givet to gange dagligt i fem dage

Retinal repetitiv elektromagnetisk stimulation (rEMS) rEMS-hjelmen (MagnovisionTM, Bioretina Biotechnology, Ankara, Tyrkiet) stimulerede nethinden og synsbanerne med en elektromagnetisk feltstyrke på 2000 miligauss, frekvens på 42 hertz og varighed 30 minutter. Disse værdier blev tidligere bestemt til at være effektive til andre kliniske og prækliniske undersøgelser.

Tidsramme

Patienterne blev evalueret på flere undersøgelsestidspunkter:

• T0 (baseline): umiddelbart før ansøgningerne
• T1: 1. ansøgningsmåned
• T2: 3. måneds ansøgninger

Primært resultatmål • ETDRS synsstyrke: Synsscorerne opnået fra T0- og T2-undersøgelserne blev analyseret og sammenlignet ved hjælp af statistiske tests for at bestemme effektiviteten.

Sekundære resultatmål

• Synsfeltsfølsomhed: Fundus perimetri afvigelsesindeks (FPDI, %) FPDI blev undersøgt i 24/2 synsfeltet i de computeriserede perimetriregistreringer. FPDI tilbyder data, der forklarer, hvor mange af de 100 blinkpunkter og hvilken procentdel af synsfeltet, der kunne ses korrekt af patienten. Til VF-analyse, for at undgå fejl under testen, blev der gennemført øvelsesrunder tre gange før påføring.

• Gangliecellekomplekstykkelse (GCC-tykkelse, µm): GCC er tykkelsen fra den indre begrænsende membran til det indre plexiforme lag i det 3x3 mm foveale område. Målingen udføres automatisk af OCTA-enheden. GCC er den samlede tykkelse af gangliecellerne og retinale nervefibre.

• Pattern Visual evoked potential (pVEP) pVEP er en objektiv test, der måler den elektriske aktivitet af den optiske vej som reaktion på en lysstimulus. 120'-mønstrene afslører svar fra alle retinale kvadranter. Målingerne blev taget i henhold til ISCEV-standarderne for begge øjne. Vi brugte 120'pattern VEP-protokollen, som kombinerer p100 implicit tid og amplitude, for at skabe et numerisk resultat.