중증 천식 환자의 호산구 유세포 분석

자격 기준을 충족하는 피험자는 연구 참여를 요청받게 됩니다. 모든 사람은 연구의 성격, 목표 및 목표에 대한 자세한 설명을 받게 됩니다. 정보에 입각한 동의서에 서명한 후 환자는 임상 상태에 따라 조절된 천식 그룹(그룹 A)과 중증 천식 그룹(그룹 B)의 두 그룹으로 나뉩니다. 1차 및 2차 치료를 최적화하고 중증 천식 진단을 확인하기 위한 준비 기간(3개월) 후 채용 시 방문이 계획됩니다. 준비 기간이 지나면 환자를 재평가하고 적절한 의료 요법을 맞춤화합니다(T0). B군은 표준지침에 따라 메폴리주맙 또는 오말리주맙을 투여한다. T0에서 혈액 샘플을 수집하여(3ml) 유세포 분석으로 호산구 표현형을 평가합니다(아래 참조). 6개월(T1/2) 및 12개월(T1) 후 환자를 다시 방문하고 유세포 분석을 위해 혈액 샘플을 채취합니다. 모든 샘플은 최선의 관행과 최신 기술에 따라 분석을 위해 적절하게 보관 및 배송됩니다. 기준, 시료 채취 후 6시간 이내. 데이터는 GDPR(일반 데이터 보호 규정, EU 2016/679)에 따라 수집 및 저장됩니다. 수집된 생물학적 물질은 지정된 분석에만 사용되며 초과 물질은 배출됩니다.

• 기본 평가(T'0) 수락의 경우 사전 동의서에 서명한 후 참가자는 알레르기 및 천식 관련 합병증을 포함하여 완전한 병력을 수집해야 합니다. 다음으로 구성된 포괄적인 신체 검사 및 호흡 기능 검사: 유량-폐활량계와 잔량 및 DLCO 결정. 천식의 첫 번째 진단의 경우 기관지확장제 반응 또는 메타콜린 유발 검사를 받게 됩니다. 기존에 천식 진단을 받은 경우 진단을 확인하고 입증하는 이전 검사를 수집합니다.
• 평가 도구 다음 데이터는 T'0, T'1/2(6개월) 및 T'1(12개월)에서 수집됩니다. 임상 평가: ACT, 주문형 또는 구조 요법, 급성 악화, 의료 방문, 결근 , 병원 입원. 기능 평가: 유량 곡선, 잔류 부피, Ig E 및 호산구 수, FeNO, 6분 도보 테스트.
• 유세포분석 조사관은 전혈 염색 프로토콜을 사용하여 다색 유세포분석을 통해 호산구 막의 분자 발현을 평가하여 혈액 샘플을 최소한으로 조작하여 아티팩트 가능성을 줄입니다. 간단히 말해서, 말초 혈액 샘플은 철회 후 6시간 이내에 처리됩니다. 샘플은 처리될 때까지 실온에서 보관됩니다. 혈액 샘플은 호산구의 표면 분자를 향한 형광색소 접합체 항체를 사용하여 염색됩니다. 특히, 연구자들은 다른 백혈구 사이의 호산구를 식별하는 데 사용될 CD45, CD66, CD15, CD16 및 Siglec-8에 대한 항체를 사용할 것입니다. CD63, CD294(CRTH2, 프로스타글란딘 D2 수용체), CD125(IL-5 수용체), CD193(예를 들어 RANTES, Eotaxin, MCP-3, MIP1α와 같은 여러 케모카인에 대한 수용체) 및 HLA-DR: 이러한 분자는 호산구 활성화, 그래서 중증 천식 환자에서 변경된 발현을 가질 수 있습니다. 4°C에서 30분간 배양한 후 제조업체의 지침에 따라 FACS 용해 용액(BD Bioscience)을 사용하여 적혈구를 제거합니다. 샘플은 인산염 완충 식염수(PBS)에 재현탁되고 4개의 레이저가 장착된 LSRFortessa X-20(BD Bioscience) 유세포 분석기에서 수집됩니다.