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Analyse par cytométrie en flux des éosinophiles chez les patients asthmatiques sévères.

5 août 2021 mis à jour par: Scarlata, Simone, M.D.

Analyse par cytométrie en flux de l'activité des éosinophiles et de l'expression des récepteurs membranaires chez les patients asthmatiques sévères : caractérisation basale et évaluation des changements induits par les médicaments biologiques.

L'asthme est une maladie hétérogène, caractérisée par une obstruction réversible des voies respiratoires, une hyperréactivité des voies respiratoires et une inflammation des voies respiratoires, dans laquelle 40 % des patients présentent une pathobiologie induite par les éosinophiles. Le principal traitement de l'asthme est l'utilisation de corticostéroïdes, dont l'utilisation induit une réduction des éosinophiles qui est considéré comme un puissant prédicteur de la réponse au traitement. Les corticostéroïdes sont restés le traitement de base de l'asthme et la réduction des éosinophiles est restée le prédicteur sans équivoque de la réponse aux stéroïdes. La prévalence de l'asthme, qui devrait augmenter, est d'environ 300 millions de personnes dans le monde. Environ 5 à 10 % des patients asthmatiques ont une maladie grave, qui est définie comme un asthme qui nécessite des corticostéroïdes inhalés à forte dose (CSI) plus un deuxième contrôleur pour l'empêcher de devenir « non contrôlé » ou qui reste « non contrôlé » malgré cette thérapie. Les patients atteints d'une maladie grave ont une moins bonne qualité de vie et une morbidité, une mortalité et une utilisation des ressources de soins de santé disproportionnellement élevées par rapport à leurs pairs dont la maladie est bien contrôlée. La physiopathologie de l'asthme est complexe et hétérogène entre les patients, tout comme la maladie elle-même ; cependant, sur la base de l'implication du système immunitaire, il est possible de définir 2 sous-types - ou endotypes - d'asthme. Ces endotypes sont nommés T2 (pour les cellules de type 2) haut ou bas, et sont définis par les niveaux d'expression des cytokines T2, IL-4, IL-5 et IL-13 produites par les lymphocytes T helper 2, et lymphoïdes innés les patients à haut endotype cell-2.T2 présentent une augmentation du nombre d'éosinophiles dans le sang et les expectorations, et ont une meilleure réponse aux thérapies biologiques actuellement disponibles, telles que l'administration de mépolizumab (anticorps anti IL-5). L'asthme éosinophile est associé à un phénotype clinique plus sévère, mais les patients porteurs d'un endotype T2 répondent mieux aux thérapies biologiques. L'hypothèse de la présente proposition est que l'état d'activation de ces cellules, analysé par l'expression de marqueurs d'activation, peut être utilisé pour définir un nouvel endotype différent, dans lequel les éosinophiles, bien que quantitativement faibles ou normaux, sont qualitativement plus actifs et agressif, et pourrait donc agir comme un indicateur de la progression vers un endotype T2 élevé. De plus, les chercheurs vérifieront si une expression différente de ces molécules à la surface des éosinophiles pourrait être associée à une réponse clinique différente aux médicaments biologiques.

Aperçu de l'étude

Statut

Recrutement

Les conditions

Intervention / Traitement

Description détaillée

Le sujet satisfaisant aux critères d'éligibilité sera invité à participer à l'étude ; tous recevront une explication détaillée de la nature de l'étude, des buts et des objectifs. Après avoir signé un consentement éclairé, les patients seront divisés en deux groupes, en fonction de leur état clinique : groupe asthme contrôlé (groupe A) et groupe asthme sévère (groupe B). Des visites seront prévues au recrutement, après une période de rodage (3 mois), destinée à optimiser la prise en charge médicale de 1ère et 2ème lignes et à confirmer le diagnostic d'asthme sévère. Après la période de rodage, les patients seront réévalués et un traitement médical approprié sera adapté (T0). Au groupe B, un traitement par mépolizumab ou omalizumab sera administré, conformément aux directives standard. A T0 un échantillon de sang sera prélevé (3ml) pour évaluer le phénotype des éosinophiles par cytométrie en flux (voir ci-dessous). Après 6 mois (T1/2) et 12 mois (T1), les patients seront à nouveau visités et un échantillon de sang sera prélevé pour une analyse par cytométrie en flux. Tous les échantillons seront correctement stockés et expédiés pour analyse, conformément aux meilleures pratiques et à l'état de l'art. critères, dans les 6 heures suivant le prélèvement de l'échantillon. Les données seront collectées et stockées conformément au RGPD (Règlement général sur la protection des données, UE 2016/679). Le matériel biologique collecté sera utilisé uniquement pour le test indiqué et le matériel excédentaire sera rejeté.

  • Évaluation de base (T'0) En cas d'acceptation, et après avoir signé un consentement éclairé, les participants seront invités à recueillir un historique médical complet, y compris les allergies et les comorbidités liées à l'asthme ; un examen physique complet et des tests de la fonction respiratoire comprenant : une spirométrie débit-volume plus le volume résiduel et la détermination de la DLCO. En cas de premier diagnostic d'asthme, une réponse bronchodilatatrice ou un test de provocation à la méthacholine sera obtenu. En cas de diagnostic préexistant d'asthme, un examen préalable confirmant et prouvant le diagnostic sera recueilli.
  • Outil d'évaluation Les données suivantes seront collectées à T'0, T'1/2 (six mois) et T'1 (douze mois) : Bilan clinique : ACT, traitement à la demande ou de secours, exacerbations aiguës, visites médicales, absences au travail , Admission à l'hôpital. Bilan fonctionnel : courbe débit volume, volume résiduel, numération des Ig E et des éosinophiles, FeNO, test de marche de 6 minutes.
  • Cytométrie en flux Les chercheurs évalueront, par cytométrie en flux multicolore, l'expression de molécules sur la membrane des éosinophiles, en utilisant un protocole de coloration du sang total, afin que les échantillons de sang soient manipulés au minimum, réduisant ainsi la possibilité d'artefacts. En bref, les échantillons de sang périphérique seront traités dans les 6 heures suivant le retrait. Les échantillons seront conservés à température ambiante jusqu'au traitement. Des échantillons de sang seront colorés à l'aide de conjugués fluorochromes d'anticorps dirigés contre les molécules de surface des éosinophiles. En particulier, les chercheurs utiliseront des anticorps contre CD45, CD66, CD15, CD16 et Siglec-8, qui seront utilisés pour identifier les éosinophiles entre d'autres leucocytes ; CD63, CD294 (CRTH2, récepteur de la prostaglandine D2), CD125 (récepteur de l'IL-5), CD193 (récepteur de plusieurs chimiokines, comme par exemple RANTES, Eotaxin, MCP-3, MIP1α), et HLA-DR : ces molécules sont régulées positivement avec activation des éosinophiles, de sorte qu'ils peuvent avoir une expression altérée chez les patients asthmatiques sévères. Après 30 minutes d'incubation à 4°C, la solution de lyse FACS (BD Bioscience) sera utilisée pour éliminer les érythrocytes, selon les instructions du fabricant. Les échantillons seront remis en suspension dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et acquis sur un cytomètre en flux LSRFortessa X-20 (BD Bioscience), équipé de quatre lasers.

Type d'étude

Interventionnel

Inscription (Anticipé)

80

Phase

  • Phase 4

Contacts et emplacements

Cette section fournit les coordonnées de ceux qui mènent l'étude et des informations sur le lieu où cette étude est menée.

Coordonnées de l'étude

Lieux d'étude

  • Italie
      • Roma, Italie, 00136
        • Recrutement
        • Campus Bio Medico University and Teaching Hospital
        • Contact:

Critères de participation

Les chercheurs recherchent des personnes qui correspondent à une certaine description, appelée critères d'éligibilité. Certains exemples de ces critères sont l'état de santé général d'une personne ou des traitements antérieurs.

Critère d'éligibilité

Âges éligibles pour étudier

18 ans et plus (Adulte, Adulte plus âgé)

Accepte les volontaires sains

Non

Sexes éligibles pour l'étude

Tout

La description

Critère d'intégration:

  • diagnostic prouvé d'asthme éosinophile sévère et réfractaire, selon les recommandations GINA et les directives internationales ERS/ATS ;
  • accepter de participer à cette étude et signer un consentement éclairé.

Critère d'exclusion:

  • habitude de fumer actuelle (tabac et e-cigarettes),
  • maladies concomitantes nécessitant l'administration chronique d'immunosuppresseurs, de médicaments biologiques ou de corticostéroïdes systémiques pour toute maladie autre que l'asthme
  • Antécédents de maladies aiguës ou chroniques antérieures ou concomitantes connues pour affecter directement ou indirectement le nombre d'éosinophiles, à la fois de manière quantitative et qualitative (maladies pulmonaires et gastro-intestinales à éosinophiles, vascularite systémique, aspergillose bronchopulmonaire allergique, infections parasitaires, etc.)
  • Chevauchement BPCO/Asthme.
  • Incapacité ou refus de signer le consentement éclairé.

Plan d'étude

Cette section fournit des détails sur le plan d'étude, y compris la façon dont l'étude est conçue et ce que l'étude mesure.

Comment l'étude est-elle conçue ?

Détails de conception

  • Objectif principal: Diagnostique
  • Répartition: Randomisé
  • Modèle interventionnel: Affectation parallèle
  • Masquage: Aucun (étiquette ouverte)

Armes et Interventions

Groupe de participants / Bras
Intervention / Traitement
Expérimental: Groupe A
Sujet souffrant d'asthme sévère, traité avec des anticorps anti IL5R
Biologique: anticorps anti-récepteur IL5
Les sujets souffrant d'asthme sévère non contrôlé seront assignés à un traitement par Omalizumab (anticorps anti Ig E) ou Mepolizumab (anticorps anti IL-5) selon les conseils médicaux et les protocoles standardisés pour le traitement de l'asthme.
Aucune intervention: Groupe B
Sujet souffrant d'asthme sévère, traité par thérapie conventionnelle

Que mesure l'étude ?

Principaux critères de jugement

Mesure des résultats
Description de la mesure
Délai
Mesure par cytométrie en flux des différences de pourcentages d'éosinophiles exprimant des molécules liées à l'activation
Délai: 12 mois

La présence d'éosinophiles activés sera évaluée par analyse par cytométrie en flux de l'expression de CD193, CD63, CD294, CD125 et HLA-DR sur la membrane des éosinophiles.

Les résultats seront exprimés en terme de pourcentage (%) d'éosinophiles exprimant les molécules ;
12 mois
Mesure par cytométrie en flux des niveaux d'expression des marqueurs d'activation sur la membrane des éosinophiles
Délai: 12 mois

Les marqueurs membranaires associés à l'activation (CD193, CD63, CD294, CD125 et HLA-DR) sur la membrane des éosinophiles seront évalués par cytométrie en flux et les résultats seront exprimés en termes d'intensité de fluorescence moyenne (MFI) des molécules. Le MFI est une mesure de la quantité de molécule exprimée sur la membrane des éosinophiles : plus le MFI est élevé, plus la densité des molécules sur la membrane cellulaire est élevée.

Les valeurs seront exprimées en unités arbitraires (UA), définies par l'instrument, en comparant les échantillons avec un contrôle négatif (non coloré).
12 mois

Mesures de résultats secondaires

Mesure des résultats
Description de la mesure
Délai
Corrélation entre le phénotype des éosinophiles activés et la progression de la maladie
Délai: 12 mois
L'analyse statistique sera utilisée pour définir la corrélation possible entre l'expression des marqueurs d'activation sur les éosinophiles (comme décrit dans les critères de jugement principaux 1 et 2) et l'état clinique des patients, évalué par la courbe de volume de débit, le volume résiduel, les Ig E et le nombre d'éosinophiles. , test de marche de 6 minutes.
12 mois
Evolution du pourcentage d'éosinophiles activés dans le groupe de patients recevant le traitement biologique.
Délai: 12 mois
Une analyse par cytométrie en flux des éosinophiles sera effectuée avant et après un an de traitements avec des anticorps contre l'IL-5 ou l'IL-5R. Les pourcentages d'éosinophiles activés seront mesurés comme décrit dans Résultat primaire
12 mois

Collaborateurs et enquêteurs

C'est ici que vous trouverez les personnes et les organisations impliquées dans cette étude.

Parrainer

Scarlata, Simone, M.D.

Collaborateurs

IRCCS San Raffaele

Dates d'enregistrement des études

Ces dates suivent la progression des dossiers d'étude et des soumissions de résultats sommaires à ClinicalTrials.gov. Les dossiers d'étude et les résultats rapportés sont examinés par la Bibliothèque nationale de médecine (NLM) pour s'assurer qu'ils répondent à des normes de contrôle de qualité spécifiques avant d'être publiés sur le site Web public.

Dates principales de l'étude

Début de l'étude (Réel)

18 mars 2021

Achèvement primaire (Anticipé)

1 mars 2022

Achèvement de l'étude (Anticipé)

1 mars 2023

Dates d'inscription aux études

Première soumission

23 avril 2021

Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité

5 août 2021

Première publication (Réel)

12 août 2021

Mises à jour des dossiers d'étude

Dernière mise à jour publiée (Réel)

12 août 2021

Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité

5 août 2021

Dernière vérification

1 août 2021

Plus d'information

Termes liés à cette étude

Mots clés

Termes MeSH pertinents supplémentaires

Autres numéros d'identification d'étude

  • EoAG

Informations sur les médicaments et les dispositifs, documents d'étude

Étudie un produit pharmaceutique réglementé par la FDA américaine

Non

Étudie un produit d'appareil réglementé par la FDA américaine

Non

Ces informations ont été extraites directement du site Web clinicaltrials.gov sans aucune modification. Si vous avez des demandes de modification, de suppression ou de mise à jour des détails de votre étude, veuillez contacter register@clinicaltrials.gov. Dès qu'un changement est mis en œuvre sur clinicaltrials.gov, il sera également mis à jour automatiquement sur notre site Web .

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