Denne siden ble automatisk oversatt og nøyaktigheten av oversettelsen er ikke garantert. Vennligst referer til engelsk versjon for en kildetekst.

Flowcytometrianalyse av eosinofiler hos pasienter med alvorlig astma.

5. august 2021 oppdatert av: Scarlata, Simone, M.D.

Flowcytometrianalyse av eosinofilers aktivitet og membranreseptoruttrykk hos pasienter med alvorlig astma: Basal karakterisering og evaluering av endringer forårsaket av biologiske legemidler.

Astma er en heterogen sykdom, karakterisert ved reversibel luftstrømobstruksjon, luftveishyperresponsivitet og luftveisbetennelse, der 40 % av pasientene har eosinofil-drevet patobiologi. Hovedbehandlingen av astma er bruk av kortikosteroider, hvis bruk induserer en reduksjon i eosinofiler som anses som en sterk prediktor for respons på behandling. Kortikosteroider har fortsatt vært den viktigste behandlingen av astma, og reduksjon i eosinofiler har vært den utvetydige prediktoren for steroidrespons. Forekomsten av astma, som forventes å øke, er rundt 300 millioner mennesker over hele verden. Omtrent 5-10 % av astmapasientene har alvorlig sykdom, som er definert som astma som krever høydose inhalerte kortikosteroider (ICS) pluss en andre kontroller for å forhindre at den blir "ukontrollert" eller som forblir "ukontrollert" til tross for denne behandlingen. Pasienter med alvorlig sykdom har dårligere livskvalitet, og uforholdsmessig høy sykelighet, dødelighet og bruk av helseressurser sammenlignet med jevnaldrende med velkontrollert sykdom. Astmaens patofysiologi er kompleks og heterogen mellom pasientene, som selve sykdommen; På grunnlag av immunsystemets involvering er det imidlertid mulig å definere 2 undertyper - eller endotyper - av astma. Disse endotypene kalles T2 (for type 2-celler) høy eller lav, og er definert av nivåene av ekspresjon av T2-cytokinene, IL-4, IL-5 og IL-13 produsert av T-hjelper 2-lymfocytter og medfødt lymfoid cell-2.T2 høyendotypepasienter viser en økning i antall blod- og sputumeosinofiler, og har en bedre respons på dagens tilgjengelige biologiske terapier, for eksempel administrering av mepolizumab (anti IL-5 antistoff). Eosinofil astma er assosiert med en mer alvorlig klinisk fenotype, men pasienter med en T2-endotype reagerer bedre på biologiske terapier. Hypotesen for det foreliggende forslaget er at aktiveringsstatusen til disse cellene, analysert ved ekspresjon av aktiveringsmarkører, kan brukes til å definere en ny, annerledes endotype, der eosinofiler, selv om de er kvantitativt lave eller normale, er kvalitativt mer aktive og aggressiv, og kan derfor fungere som en indikator på progresjonen mot en T2 høy endotype. Videre vil etterforskerne verifisere om et annet uttrykk av disse molekylene på eosinofilens overflate kan være assosiert med ulik klinisk respons på biologiske medisiner.

Studieoversikt

Status

Rekruttering

Forhold

Intervensjon / Behandling

Detaljert beskrivelse

Emne som tilfredsstiller kvalifikasjonskriterier vil bli bedt om å delta i studien; alle vil motta en detaljert forklaring av studiens art, mål og mål. Etter å ha signert informert samtykke vil pasientene deles inn i to grupper, basert på deres kliniske status: kontrollert astmagruppe (gruppe A) og alvorlig astmagruppe (gruppe B). Besøk vil bli planlagt ved rekruttering, etter en innkjøringsperiode (3 måneder), ment å optimalisere første og andre linje medisinsk behandling og bekrefte diagnosen alvorlig astma. Etter innkjøringsperioden vil pasientene bli revurdert og passende medisinsk behandling vil bli skreddersydd (T0). Til gruppe B vil terapi med Mepolizumab eller Omalizumab bli gitt, i henhold til standard retningslinjer. Ved T0 vil det bli tatt en blodprøve (3 ml) for å evaluere eosinofilers fenotype ved flowcytometri (se nedenfor). Etter 6 måneder (T1/2) og 12 måneder (T1) vil pasienter bli besøkt igjen og en blodprøve vil bli tatt for flowcytometrianalyse. Alle prøver vil bli riktig lagret og sendt for analyse, i henhold til beste praksis og state of art kriterier, innen 6 timer fra prøvens innsamling. Data vil bli samlet inn og lagret i henhold til GDPR (General Data Protection Regulation, EU 2016/679). Biologisk materiale som samles inn vil kun brukes til den angitte analysen og overflødig materiale vil bli tømt ut.

  • Baseline-evaluering (T'0) Ved aksept, og etter å ha signert et informert samtykke, vil deltakerne bli bedt om å samle inn en fullstendig medisinsk historie, inkludert allergier og astma-relaterte komorbiditeter; en omfattende fysisk undersøkelse og respirasjonsfunksjonstester bestående av: flow-volum spirometri pluss restvolum og DLCO-bestemmelse. Ved første diagnose av astma vil en bronkodilatatorrespons eller en metakolinprovokasjonstester bli tatt. Ved eksisterende astmadiagnose vil tidligere undersøkelse som bekrefter og beviser diagnosen bli samlet inn.
  • Evalueringsverktøy Følgende data vil bli samlet inn ved T'0, T'1/2 (seks måneder) og T'1 (tolv måneder): Klinisk vurdering: ACT, på forespørsel eller redningsterapi, akutte eksacerbasjoner, legebesøk, arbeidsfravær , sykehusinnleggelser. Funksjonsvurdering: Strømningsvolumkurve, Restvolum, Ig E og antall eosinofiler, FeNO, 6 minutters gangtest.
  • Flowcytometri Etterforskerne vil evaluere, ved hjelp av flerfarget flowcytometri, ekspresjonen av molekyler på eosinofilers membran, ved å bruke en helblodsfargingsprotokoll, slik at blodprøver vil bli minimalt manipulert, og dermed redusere muligheten for artefakter. Kort fortalt vil perifere blodprøver bli behandlet innen 6 timer etter uttak. Prøver vil bli lagret ved romtemperatur frem til behandling. Blodprøver vil bli farget ved bruk av fluorokrom-konjugatantistoffer rettet mot eosinofilers overflatemolekyler. Spesielt vil etterforskerne bruke antistoffer mot CD45, CD66, CD15, CD16 og Siglec-8, som skal brukes til å identifisere eosinofiler mellom andre leukocytter; CD63, CD294 (CRTH2, prostaglandin D2-reseptor), CD125 (IL-5-reseptor), CD193 (reseptor for flere kjemokiner, som for eksempel RANTES, Eotaxin, MCP-3, MIP1α), og HLA-DR: disse molekylene er oppregulert med eosinofiler aktivering, slik at de kan ha et endret uttrykk hos alvorlige astmapasienter. Etter 30 minutters inkubering ved 4°C, vil FACS lyseringsløsning (BD Bioscience) brukes til å fjerne erytrocytter, i henhold til produsentens instruksjoner. Prøver vil bli resuspendert i fosfatbufret saltvann (PBS) og innhentet på et LSRFortessa X-20 (BD Bioscience) flowcytometer, utstyrt med fire lasere.

Studietype

Intervensjonell

Registrering (Forventet)

80

Fase

  • Fase 4

Kontakter og plasseringer

Denne delen inneholder kontaktinformasjon for de som utfører studien, og informasjon om hvor denne studien blir utført.

Studiekontakt

Studiesteder

  • Italia
      • Roma, Italia, 00136
        • Rekruttering
        • Campus Bio Medico University and Teaching Hospital
        • Ta kontakt med:

Deltakelseskriterier

Forskere ser etter personer som passer til en bestemt beskrivelse, kalt kvalifikasjonskriterier. Noen eksempler på disse kriteriene er en persons generelle helsetilstand eller tidligere behandlinger.

Kvalifikasjonskriterier

Alder som er kvalifisert for studier

18 år og eldre (Voksen, Eldre voksen)

Tar imot friske frivillige

Nei

Kjønn som er kvalifisert for studier

Alle

Beskrivelse

Inklusjonskriterier:

  • påvist diagnose av alvorlig, refraktær eosinofil astma, i henhold til GINA-anbefalinger og internasjonale ERS/ATS-retningslinjer;
  • godta å delta i denne studien og signere et informert samtykke.

Ekskluderingskriterier:

  • nåværende røykevane (både tobakk og e-sigaretter),
  • samtidige sykdommer som krever kronisk administrering av immunsuppressorer, biologiske medisiner eller systemiske kortikosteroider for andre sykdommer enn astma
  • Anamnese med tidligere eller samtidig akutt eller kronisk sykdom som er kjent for å direkte eller indirekte påvirke antallet eosinofiler, både på en kvantitativ og kvalitativ måte (eosinofile lunge- og gastrointestinale sykdommer, systemisk vaskulitt, allergisk bronkopulmonal aspergillose, parasittiske infeksjoner, etc)
  • KOLS/astma overlapper hverandre.
  • Manglende evne eller avslag til å signere det informerte samtykket.

Studieplan

Denne delen gir detaljer om studieplanen, inkludert hvordan studien er utformet og hva studien måler.

Hvordan er studiet utformet?

Designdetaljer

  • Primært formål: Diagnostisk
  • Tildeling: Randomisert
  • Intervensjonsmodell: Parallell tildeling
  • Masking: Ingen (Open Label)

Våpen og intervensjoner

Deltakergruppe / Arm
Intervensjon / Behandling
Eksperimentell: Gruppe A
Person med alvorlig astma, behandlet med anti-IL5R-antistoffer
Biologisk: anti IL5 reseptor antistoffer
Pasienter med alvorlig ukontrollert astma vil bli tildelt behandling med Omalizumab (anti Ig E antistoffer) eller Mepolizumab (anti IL-5 antistoffer) i henhold til medisinske råd og standardiserte protokoller for astmabehandling.
Ingen inngripen: Gruppe B
Person med alvorlig astma, behandlet med konvensjonell terapi

Hva måler studien?

Primære resultatmål

Resultatmål
Tiltaksbeskrivelse
Tidsramme
Måling ved hjelp av flowcytometri av forskjeller i prosentandelen av eosinofiler som uttrykker aktiveringsrelaterte molekyler
Tidsramme: 12 måneder

Tilstedeværelsen av aktiverte eosinofiler vil bli evaluert ved flowcytometrianalyse av ekspresjonen av CD193, CD63, CD294, CD125 og HLA-DR på eosinofilers membran.

Resultatene vil bli uttrykt i prosent (%) av eosinofiler som uttrykker molekylene;
12 måneder
Måling ved flowcytometri av ekspresjonsnivåene til aktiveringsmarkører på eosinofilers membran
Tidsramme: 12 måneder

Aktiveringsassosierte membranmarkører (CD193, CD63, CD294, CD125 og HLA-DR) på eosinofilers membran vil bli evaluert ved hjelp av flowcytometri og resultatene vil bli uttrykt som gjennomsnittlig fluorescensintensitet (MFI) til molekylene. MFI er et mål på mengden av molekylet uttrykt på eosinofilmembranen: jo høyere MFI, jo høyere tetthet av molekyler på cellulær membran.

Verdiene vil bli uttrykt som vilkårlige enheter (AU), definert av instrumentet, og sammenligner prøvene med en negativ (ufarget) kontroll.
12 måneder

Sekundære resultatmål

Resultatmål
Tiltaksbeskrivelse
Tidsramme
Korrelasjon mellom aktiverte eosinofilers fenotype og sykdomsprogresjon
Tidsramme: 12 måneder
Statistisk analyse vil bli brukt for å definere den mulige korrelasjonen mellom ekspresjon av aktiveringsmarkører på eosinofiler (som beskrevet i primære utfall 1 og 2) og den kliniske statusen til pasientene, evaluert ved strømningsvolumkurve, restvolum, Ig E og antall eosinofiler , 6 minutters gangprøve.
12 måneder
Endring i prosentandelen aktiverte eosinofiler i gruppen pasienter som får den biologiske behandlingen.
Tidsramme: 12 måneder
Flowcytometrianalyse av eosinofiler vil bli utført før og etter ett års behandlinger med antistoffer mot IL-5 eller IL-5R. Prosentandeler av aktiverte eosinofiler vil bli målt som beskrevet i Primært utfall
12 måneder

Samarbeidspartnere og etterforskere

Det er her du vil finne personer og organisasjoner som er involvert i denne studien.

Sponsor

Scarlata, Simone, M.D.

Samarbeidspartnere

IRCCS San Raffaele

Studierekorddatoer

Disse datoene sporer fremdriften for innsending av studieposter og sammendragsresultater til ClinicalTrials.gov. Studieposter og rapporterte resultater gjennomgås av National Library of Medicine (NLM) for å sikre at de oppfyller spesifikke kvalitetskontrollstandarder før de legges ut på det offentlige nettstedet.

Studer hoveddatoer

Studiestart (Faktiske)

18. mars 2021

Primær fullføring (Forventet)

1. mars 2022

Studiet fullført (Forventet)

1. mars 2023

Datoer for studieregistrering

Først innsendt

23. april 2021

Først innsendt som oppfylte QC-kriteriene

5. august 2021

Først lagt ut (Faktiske)

12. august 2021

Oppdateringer av studieposter

Sist oppdatering lagt ut (Faktiske)

12. august 2021

Siste oppdatering sendt inn som oppfylte QC-kriteriene

5. august 2021

Sist bekreftet

1. august 2021

Mer informasjon

Begreper knyttet til denne studien

Nøkkelord

Ytterligere relevante MeSH-vilkår

Andre studie-ID-numre

  • EoAG

Legemiddel- og utstyrsinformasjon, studiedokumenter

Studerer et amerikansk FDA-regulert medikamentprodukt

Nei

Studerer et amerikansk FDA-regulert enhetsprodukt

Nei

Denne informasjonen ble hentet direkte fra nettstedet clinicaltrials.gov uten noen endringer. Hvis du har noen forespørsler om å endre, fjerne eller oppdatere studiedetaljene dine, vennligst kontakt register@clinicaltrials.gov. Så snart en endring er implementert på clinicaltrials.gov, vil denne også bli oppdatert automatisk på nettstedet vårt. .

Abonnere