Eosinofiilien virtaussytometrinen analyysi vaikeissa astmapotilaissa.
torstai 5. elokuuta 2021 päivittänyt: Scarlata, Simone, M.D.
Eosinofiilien aktiivisuuden ja kalvoreseptorien ilmentymisen virtaussytometrinen analyysi vaikeissa astmapotilaissa: biologisten lääkkeiden aiheuttamien muutosten peruskarakterisointi ja arviointi.
Astma on heterogeeninen sairaus, jolle on tunnusomaista palautuva ilmavirtauksen tukos, hengitysteiden yliherkkyys ja hengitysteiden tulehdus, jossa 40 %:lla potilaista on eosinofiililähtöinen patobiologia. Astman pääasiallinen hoito on kortikosteroidien käyttö, jonka käyttö vähentää eosinofiilien määrää. Sitä pidetään vahvana hoitovasteen ennustajana.
Kortikosteroidit ovat pysyneet astman perushoidossa, ja eosinofiilien väheneminen on pysynyt yksiselitteisenä steroidivasteen ennustajana.
Astman esiintyvyys, jonka odotetaan kasvavan, on noin 300 miljoonaa ihmistä maailmanlaajuisesti.
Noin 5-10 prosentilla astmapotilaista on vaikea sairaus, joka määritellään astmaksi, joka vaatii suuria annoksia inhaloitavia kortikosteroideja (ICS) sekä toista säädintä, joka estää sitä tulemasta "kontrolloimattomaksi" tai joka pysyy "hallitsemattomana" tästä hoidosta huolimatta.
Vaikeaa sairautta sairastavilla potilailla on huonompi elämänlaatu ja suhteettoman korkea sairastuvuus, kuolleisuus ja terveydenhuollon resurssien käyttö verrattuna heidän ikäisensä, joilla on hyvin hallinnassa oleva sairaus. Astman patofysiologia on monimutkainen ja heterogeeninen potilaiden välillä, kuten itse sairaus; immuunijärjestelmän osallisuuden perusteella on kuitenkin mahdollista määrittää 2 astman alatyyppiä - tai endotyyppiä.
Näitä endotyyppejä kutsutaan T2:ksi (tyypin 2 soluille) korkea tai matala, ja ne määritellään T2-sytokiinien, T-auttaja 2 -lymfosyyttien ja synnynnäisen lymfoidin tuottamien IL-4:n, IL-5:n ja IL-13:n ilmentymistasojen perusteella. Korkean endotyypin solu-2.T2-potilailla on lisääntynyt veren ja ysköksen eosinofiilien määrä, ja heillä on parempi vaste nykyisiin saatavilla oleviin biologisiin hoitoihin, kuten mepolitsumabin (anti-IL-5-vasta-aine) antoon.
Eosinofiilinen astma liittyy vakavampaan kliiniseen fenotyyppiin, mutta potilaat, joilla on T2-endotyyppi, reagoivat paremmin biologisiin hoitoihin.
Tämän ehdotuksen hypoteesi on, että näiden solujen aktivaatiotilaa, joka analysoidaan aktivaatiomarkkerien ilmentymisen avulla, voidaan käyttää määrittämään uusi, erilainen endotyyppi, jossa eosinofiilit, vaikka ne ovat kvantitatiivisesti alhaisia tai normaaleja, ovat laadullisesti aktiivisempia ja aggressiivisia ja voisi siksi toimia indikaattorina etenemisestä kohti korkeaa T2-endotyyppiä. Lisäksi tutkijat varmistavat, voiko näiden molekyylien erilainen ilmentyminen eosinofiilien pinnalla liittyä erilaiseen kliiniseen vasteeseen biologisille lääkkeille.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Rekrytointi
Ehdot
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Kelpoisuusehdot täyttäviä henkilöitä pyydetään osallistumaan tutkimukseen; kaikki saavat yksityiskohtaisen selvityksen tutkimuksen luonteesta, tavoitteista ja päämääristä. Allekirjoitetun suostumuksen jälkeen potilaat jaetaan kahteen ryhmään kliinisen tilansa perusteella: kontrolloidun astman ryhmään (ryhmä A) ja vaikean astman ryhmään (ryhmä B). Vierailut suunnitellaan rekrytoinnin yhteydessä, sisäänajojakson (3 kuukautta) jälkeen, jonka tarkoituksena on optimoida ensimmäisen ja toisen linjan lääketieteellinen hoito ja vahvistaa vaikean astman diagnoosi. Aloitusjakson jälkeen potilaat arvioidaan uudelleen ja sopiva lääkehoito räätälöidään (T0). Ryhmälle B annetaan hoitoa mepolitsumabilla tai omalitsumabilla standardiohjeiden mukaisesti. Ajanhetkellä T0 otetaan verinäyte (3 ml) eosinofiilien fenotyypin arvioimiseksi virtaussytometrialla (katso alla). Kuuden kuukauden (T1/2) ja 12 kuukauden (T1) kuluttua potilaiden luona käydään uudelleen ja niistä otetaan verinäyte virtaussytometriaanalyysiä varten. Kaikki näytteet säilytetään asianmukaisesti ja lähetetään analysoitavaksi parhaan käytännön ja tekniikan tason mukaisesti. 6 tunnin kuluessa näytteen keräämisestä. Tietoja kerätään ja säilytetään GDPR:n (Yleinen tietosuoja-asetus, EU 2016/679) mukaisesti. Kerättyä biologista materiaalia käytetään vain ilmoitettuun määritykseen ja ylimääräinen materiaali poistetaan.
- Lähtötilanteen arviointi (T'0) Hyväksymisen ja tietoisen suostumuksen allekirjoittamisen jälkeen osallistujia pyydetään keräämään täydellinen sairaushistoria, mukaan lukien allergiat ja astmaan liittyvät liitännäissairaudet; kattava fyysinen tutkimus ja hengitystoimintatestit, jotka koostuvat: virtaus-tilavuusspirometria plus jäännöstilavuus ja DLCO-määritys. Ensimmäisen astmadiagnoosin tapauksessa suoritetaan keuhkoputkia laajentava vaste tai metakoliinialtistustestit. Jos astmadiagnoosi on aiemmin ollut, kerätään aikaisempi diagnoosin vahvistava ja todistava tutkimus.
- Arviointityökalu Seuraavat tiedot kerätään T'0, T'1/2 (kuusi kuukautta) ja T'1 (kaksitoista kuukautta): Kliininen arviointi: ACT, tarvittaessa tai pelastushoito, akuutit pahenemisvaiheet, lääkärikäynnit, työpoissaolot , sairaalahoidot. Toiminnallinen arviointi: Virtaustilavuuskäyrä, jäännöstilavuus, Ig E ja eosinofiilien määrä, FeNO, 6 minuutin kävelytesti.
- Virtaussytometria Tutkijat arvioivat monivärisen virtaussytometrian avulla molekyylien ilmentymistä eosinofiilien kalvolla käyttäen kokoveren värjäysprotokollaa, jotta verinäytteitä käsitellään mahdollisimman vähän, mikä vähentää artefaktien mahdollisuutta. Lyhyesti sanottuna perifeeriset verinäytteet käsitellään 6 tunnin kuluessa ottamisesta. Näytteet säilytetään huoneenlämmössä käsittelyyn asti. Verinäytteet värjätään käyttämällä fluorokromikonjugaattivasta-aineita, jotka on suunnattu eosinofiilien pintamolekyyleihin. Erityisesti tutkijat käyttävät vasta-aineita CD45:tä, CD66:ta, CD15:tä, CD16:ta ja Siglec-8:aa vastaan, joita käytetään eosinofiilien tunnistamiseen muiden leukosyyttien välillä; CD63, CD294 (CRTH2, prostaglandiini D2-reseptori), CD125 (IL-5-reseptori), CD193 (reseptori useille kemokiinille, kuten esimerkiksi RANTES, Eotaksiini, MCP-3, MIP1α) ja HLA-DR: näitä molekyylejä säätelevät voimakkaammin eosinofiilien aktivaatio, joten niiden ilmentyminen voi muuttua vaikeissa astmapotilaissa. 30 minuutin inkuboinnin jälkeen 4 °C:ssa FACS-lyysiliuosta (BD Bioscience) käytetään punasolujen poistamiseen valmistajan ohjeiden mukaisesti. Näytteet suspendoidaan uudelleen fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen (PBS) ja hankitaan neljällä laserilla varustetulla LSRFortessa X-20 (BD Bioscience) -virtaussytometrillä.
Opintotyyppi
Interventio
Ilmoittautuminen (Odotettu)
80
Vaihe
- Vaihe 4
Yhteystiedot ja paikat
Tässä osiossa on tutkimuksen suorittajien yhteystiedot ja tiedot siitä, missä tämä tutkimus suoritetaan.
Opiskeluyhteys
- Nimi: Simone Scarlata, M.D.
- Puhelinnumero: +393939259912
- Sähköposti: s.scarlata@unicampus.it
Opiskelupaikat
-
-
-
Roma, Italia, 00136
- Rekrytointi
- Campus Bio Medico University and Teaching Hospital
-
Ottaa yhteyttä:
- Simone Scarlata, MD
- Puhelinnumero: +393939259912
- Sähköposti: s.scarlata@unicampus.it
-
-
Osallistumiskriteerit
Tutkijat etsivät ihmisiä, jotka sopivat tiettyyn kuvaukseen, jota kutsutaan kelpoisuuskriteereiksi. Joitakin esimerkkejä näistä kriteereistä ovat henkilön yleinen terveydentila tai aiemmat hoidot.
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
18 vuotta ja vanhemmat (Aikuinen, Vanhempi Aikuinen)
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Ei
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Kaikki
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- vaikean, refraktorisen eosinofiilisen astman todistettu diagnoosi GINA-suositusten ja kansainvälisten ERS/ATS-ohjeiden mukaisesti;
- suostuvansa osallistumaan tähän tutkimukseen ja allekirjoittamaan tietoisen suostumuksen.
Poissulkemiskriteerit:
- nykyinen tupakointitapa (sekä tupakka että sähkötupakka),
- samanaikaiset sairaudet, jotka vaativat kroonista immunosuppressorien, biologisten lääkkeiden tai systeemisten kortikosteroidien antamista mihin tahansa muuhun sairauteen kuin astmaan
- Aiempi tai samanaikainen akuutti tai krooninen sairaus, jonka tiedetään suoraan tai epäsuorasti vaikuttavan eosinofiilien määrään sekä kvantitatiivisesti että laadullisesti (eosinofiiliset keuhkosairaudet ja maha-suolikanavan sairaudet, systeeminen vaskuliitti, allerginen bronkopulmonaalinen aspergilloosi, loisinfektiot jne.)
- COPD/astma päällekkäisyys.
- Tietoisen suostumuksen allekirjoittamisen kyvyttömyys tai kieltäminen.
Opintosuunnitelma
Tässä osiossa on tietoja tutkimussuunnitelmasta, mukaan lukien kuinka tutkimus on suunniteltu ja mitä tutkimuksella mitataan.
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Diagnostiikka
- Jako: Satunnaistettu
- Inventiomalli: Rinnakkaistehtävä
- Naamiointi: Ei mitään (avoin tarra)
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Kokeellinen: Ryhmä A
Potilas, jolla on vaikea astma, hoidettu anti-IL5R-vasta-aineilla
|
Potilaat, joilla on vaikea hallitsematon astma, määrätään hoitoon Omalitsumabilla (anti Ig E -vasta-aineet) tai Mepolitsumabilla (anti-IL-5-vasta-aineet) lääketieteellisten ohjeiden ja astman hoitostandardien mukaisesti.
|
|
Ei väliintuloa: Ryhmä B
Potilas, jolla on vaikea astma ja jota hoidetaan tavanomaisella hoidolla
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Aktivaatioon liittyviä molekyylejä ilmentävien eosinofiilien prosenttiosuuksien erojen mittaus virtaussytometrialla
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Aktivoituneiden eosinofiilien läsnäolo arvioidaan virtaussytometrisellä analyysillä CD193:n, CD63:n, CD294:n, CD125:n ja HLA-DR:n ekspressiosta eosinofiilien kalvolla. Tulokset ilmaistaan molekyylejä ilmentävien eosinofiilien prosenttiosuutena (%); |
12 kuukautta
|
|
Aktivaatiomarkkerien ilmentymistasojen mittaus virtaussytometrialla eosinofiilien kalvolla
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Aktivaatioon liittyvät kalvomarkkerit (CD193, CD63, CD294, CD125 ja HLA-DR) eosinofiilien kalvolla arvioidaan virtaussytometrialla ja tulokset ilmaistaan molekyylien keskimääräisenä fluoresenssivoimakkuutena (MFI). MFI on eosinofiilien kalvolla ilmentyneiden molekyylien määrän mitta: mitä suurempi MFI, sitä suurempi on molekyylien tiheys solukalvolla. Arvot ilmaistaan mielivaltaisina yksiköinä (AU), jotka laite määrittää vertaamalla näytteitä negatiiviseen (värjäämättömään) kontrolliin. |
12 kuukautta
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Aktivoituneiden eosinofiilien fenotyypin ja taudin etenemisen välinen korrelaatio
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Tilastollista analyysiä käytetään määrittämään mahdollinen korrelaatio eosinofiilien aktivaatiomarkkerien ilmentymisen välillä (kuten on kuvattu ensisijaisissa tuloksissa 1 ja 2) ja potilaiden kliinisen tilan välillä, joka arvioidaan virtaustilavuuskäyrällä, jäännöstilavuudella, Ig E:llä ja eosinofiilien määrällä. , 6 minuutin kävelytesti.
|
12 kuukautta
|
|
Muutos aktivoituneiden eosinofiilien prosenttiosuudessa biologista hoitoa saaneiden potilaiden ryhmässä.
Aikaikkuna: 12 kuukautta
|
Eosinofiilien virtaussytometrinen analyysi suoritetaan ennen ja jälkeen vuoden kestäneen IL-5- tai IL-5R-vasta-ainekäsittelyn.
Aktivoituneiden eosinofiilien prosenttiosuudet mitataan kohdassa Ensisijainen tulos kuvatulla tavalla
|
12 kuukautta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Täältä löydät tähän tutkimukseen osallistuvat ihmiset ja organisaatiot.
Sponsori
Yhteistyökumppanit
Opintojen ennätyspäivät
Nämä päivämäärät seuraavat ClinicalTrials.gov-sivustolle lähetettyjen tutkimustietueiden ja yhteenvetojen edistymistä. National Library of Medicine (NLM) tarkistaa tutkimustiedot ja raportoidut tulokset varmistaakseen, että ne täyttävät tietyt laadunvalvontastandardit, ennen kuin ne julkaistaan julkisella verkkosivustolla.
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Torstai 18. maaliskuuta 2021
Ensisijainen valmistuminen (Odotettu)
Tiistai 1. maaliskuuta 2022
Opintojen valmistuminen (Odotettu)
Keskiviikko 1. maaliskuuta 2023
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Perjantai 23. huhtikuuta 2021
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Torstai 5. elokuuta 2021
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Torstai 12. elokuuta 2021
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Torstai 12. elokuuta 2021
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Torstai 5. elokuuta 2021
Viimeksi vahvistettu
Sunnuntai 1. elokuuta 2021
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- EoAG
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Ei
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Ei
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .