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Durchflusszytometrie-Analyse von Eosinophilen bei Patienten mit schwerem Asthma.

5. August 2021 aktualisiert von: Scarlata, Simone, M.D.

Durchflusszytometrie-Analyse der Aktivität von Eosinophilen und der Expression von Membranrezeptoren bei Patienten mit schwerem Asthma: Basale Charakterisierung und Bewertung von Veränderungen, die durch biologische Arzneimittel hervorgerufen werden.

Asthma ist eine heterogene Erkrankung, die durch eine reversible Obstruktion des Luftstroms, eine Hyperreaktivität der Atemwege und eine Entzündung der Atemwege gekennzeichnet ist und bei der 40 % der Patienten eine Eosinophilen-bedingte Pathobiologie aufweisen. Die Hauptbehandlung von Asthma ist die Verwendung von Kortikosteroiden, deren Verwendung eine Verringerung der Eosinophilen induziert gilt als starker Prädiktor für das Ansprechen auf die Behandlung. Kortikosteroide sind nach wie vor die Hauptbehandlung bei Asthma, und die Verringerung der Eosinophilen ist nach wie vor der eindeutige Prädiktor für die Steroidreaktion. Die Prävalenz von Asthma, die voraussichtlich zunehmen wird, liegt weltweit bei etwa 300 Millionen Menschen. Etwa 5–10 % der Asthmapatienten haben eine schwere Erkrankung, die als Asthma definiert ist, das hochdosierte inhalative Kortikosteroide (ICS) plus einen zweiten Controller erfordert, um zu verhindern, dass es „unkontrolliert“ wird oder das trotz dieser Therapie „unkontrolliert“ bleibt. Patienten mit schwerer Erkrankung haben im Vergleich zu Gleichaltrigen mit gut kontrollierter Erkrankung eine schlechtere Lebensqualität und eine unverhältnismäßig hohe Morbidität, Mortalität und Inanspruchnahme von Gesundheitsressourcen. Die Pathophysiologie von Asthma ist bei den einzelnen Patienten komplex und heterogen, ebenso wie die Krankheit selbst; Auf der Grundlage der Beteiligung des Immunsystems ist es jedoch möglich, zwei Subtypen – oder Endotypen – von Asthma zu definieren. Diese Endotypen werden als T2 (für Typ-2-Zellen) hoch oder niedrig bezeichnet und durch die Expressionsniveaus der T2-Zytokine IL-4, IL-5 und IL-13 definiert, die von T-Helfer-2-Lymphozyten und angeborenen Lymphozyten produziert werden Bei Patienten mit hohem Zell-2.T2-Endotyp ist die Anzahl der Eosinophilen im Blut und Sputum erhöht und sie reagieren besser auf die derzeit verfügbaren biologischen Therapien, wie beispielsweise die Verabreichung von Mepolizumab (Anti-IL-5-Antikörper). Eosinophiles Asthma ist mit einem schwereren klinischen Phänotyp verbunden, aber Patienten mit einem T2-Endotyp sprechen besser auf biologische Therapien an. Die Hypothese des vorliegenden Vorschlags besteht darin, dass der Aktivierungsstatus dieser Zellen, analysiert durch die Expression von Aktivierungsmarkern, zur Definition eines neuen, anderen Endotyps verwendet werden kann, bei dem Eosinophile zwar quantitativ niedrig oder normal, aber qualitativ aktiver und aktiver sind aggressiv und könnte daher als Indikator für das Fortschreiten zu einem hohen T2-Endotyp dienen. Darüber hinaus werden die Forscher überprüfen, ob eine unterschiedliche Expression dieser Moleküle auf der Oberfläche von Eosinophilen mit einer unterschiedlichen klinischen Reaktion auf biologische Medikamente verbunden sein könnte.

Studienübersicht

Status

Rekrutierung

Bedingungen

Intervention / Behandlung

Detaillierte Beschreibung

Probanden, die die Zulassungskriterien erfüllen, werden gebeten, an der Studie teilzunehmen. Alle erhalten eine detaillierte Erläuterung der Art der Studie sowie der Ziele und Zielsetzungen. Nach Unterzeichnung der Einverständniserklärung werden die Patienten je nach klinischem Status in zwei Gruppen eingeteilt: die Gruppe mit kontrolliertem Asthma (Gruppe A) und die Gruppe mit schwerem Asthma (Gruppe B). Besuche werden bei der Einstellung nach einer Einlaufphase (drei Monate) geplant, um die medizinische Erst- und Zweitlinienbehandlung zu optimieren und die Diagnose von schwerem Asthma zu bestätigen. Nach der Einlaufphase werden die Patienten erneut untersucht und eine geeignete medizinische Therapie maßgeschneidert (T0). Für Gruppe B wird eine Therapie mit Mepolizumab oder Omalizumab gemäß den Standardrichtlinien durchgeführt. Bei T0 wird eine Blutprobe entnommen (3 ml), um den Phänotyp der Eosinophilen mittels Durchflusszytometrie zu bewerten (siehe unten). Nach 6 Monaten (T1/2) und 12 Monaten (T1) werden die Patienten erneut besucht und es wird eine Blutprobe für die Durchflusszytometrie-Analyse entnommen. Alle Proben werden ordnungsgemäß gelagert und zur Analyse gemäß den besten Praktiken und dem Stand der Technik versandt Kriterien, innerhalb von 6 Stunden nach der Probenentnahme. Die Datenerhebung und -speicherung erfolgt gemäß der DSGVO (Datenschutz-Grundverordnung, EU 2016/679). Das gesammelte biologische Material wird nur für den angegebenen Test verwendet und überschüssiges Material wird entsorgt.

  • Basisbewertung (T'0) Im Falle der Annahme und nach Unterzeichnung einer Einverständniserklärung werden die Teilnehmer gebeten, eine vollständige Krankengeschichte zu sammeln, einschließlich Allergien und Asthma-bedingten Komorbiditäten; eine umfassende körperliche Untersuchung und Atemfunktionstests bestehend aus: Durchfluss-Volumen-Spirometrie plus Restvolumen- und DLCO-Bestimmung. Im Falle einer Erstdiagnose von Asthma wird eine bronchodilatatorische Reaktion oder ein Methacholin-Provokationstest durchgeführt. Im Falle einer bereits bestehenden Asthmadiagnose werden frühere Untersuchungen zur Bestätigung und zum Nachweis der Diagnose erhoben.
  • Bewertungstool Die folgenden Daten werden bei T'0, T'1/2 (sechs Monate) und T'1 (zwölf Monate) gesammelt: Klinische Bewertung: ACT, Bedarfs- oder Rettungstherapie, akute Exazerbationen, Arztbesuche, Arbeitsabwesenheiten , Krankenhauseinweisungen. Funktionelle Beurteilung: Flussvolumenkurve, Restvolumen, Ig E- und Eosinophilenzahl, FeNO, 6-Minuten-Gehtest.
  • Durchflusszytometrie Die Forscher bewerten mittels Mehrfarben-Durchflusszytometrie die Expression von Molekülen auf der Membran von Eosinophilen unter Verwendung eines Vollblut-Färbeprotokolls, sodass Blutproben nur minimal manipuliert werden, wodurch die Möglichkeit von Artefakten verringert wird. Kurz gesagt, periphere Blutproben werden innerhalb von 6 Stunden nach der Entnahme verarbeitet. Die Proben werden bis zur Verarbeitung bei Raumtemperatur gelagert. Blutproben werden mit Fluorochrom-Konjugat-Antikörpern gefärbt, die gegen die Oberflächenmoleküle von Eosinophilen gerichtet sind. Insbesondere werden die Forscher Antikörper gegen CD45, CD66, CD15, CD16 und Siglec-8 verwenden, die zur Identifizierung von Eosinophilen zwischen anderen Leukozyten verwendet werden; CD63, CD294 (CRTH2, Prostaglandin-D2-Rezeptor), CD125 (IL-5-Rezeptor), CD193 (Rezeptor für mehrere Chemokine, wie zum Beispiel RANTES, Eotaxin, MCP-3, MIP1α) und HLA-DR: Diese Moleküle werden mit hochreguliert Aktivierung von Eosinophilen, sodass diese bei Patienten mit schwerem Asthma eine veränderte Expression aufweisen können. Nach 30-minütiger Inkubation bei 4 °C wird FACS-Lyselösung (BD Bioscience) gemäß den Anweisungen des Herstellers zur Entfernung von Erythrozyten verwendet. Die Proben werden in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) resuspendiert und mit einem LSRFortessa X-20 (BD Bioscience) Durchflusszytometer erfasst, das mit vier Lasern ausgestattet ist.

Studientyp

Interventionell

Einschreibung (Voraussichtlich)

80

Phase

  • Phase 4

Kontakte und Standorte

Dieser Abschnitt enthält die Kontaktdaten derjenigen, die die Studie durchführen, und Informationen darüber, wo diese Studie durchgeführt wird.

Studienkontakt

Studienorte

  • Italien
      • Roma, Italien, 00136
        • Rekrutierung
        • Campus Bio Medico University and Teaching Hospital
        • Kontakt:

Teilnahmekriterien

Forscher suchen nach Personen, die einer bestimmten Beschreibung entsprechen, die als Auswahlkriterien bezeichnet werden. Einige Beispiele für diese Kriterien sind der allgemeine Gesundheitszustand einer Person oder frühere Behandlungen.

Zulassungskriterien

Studienberechtigtes Alter

18 Jahre und älter (Erwachsene, Älterer Erwachsener)

Akzeptiert gesunde Freiwillige

Nein

Studienberechtigte Geschlechter

Alle

Beschreibung

Einschlusskriterien:

  • gesicherte Diagnose eines schweren, refraktären eosinophilen Asthmas gemäß GINA-Empfehlungen und internationalen ERS/ATS-Richtlinien;
  • Zustimmung zur Teilnahme an dieser Studie und Unterzeichnung einer Einverständniserklärung.

Ausschlusskriterien:

  • aktuelle Rauchgewohnheiten (sowohl Tabak als auch E-Zigaretten),
  • Begleiterkrankungen, die eine chronische Verabreichung von Immunsuppressiva, biologischen Medikamenten oder systemischen Kortikosteroiden bei anderen Erkrankungen als Asthma erfordern
  • Vorgeschichte früherer oder begleitender akuter oder chronischer Erkrankungen, von denen bekannt ist, dass sie die Eosinophilenzahl sowohl quantitativ als auch qualitativ direkt oder indirekt beeinflussen (eosinophile Lungen- und Magen-Darm-Erkrankungen, systemische Vaskulitis, allergische bronchopulmonale Aspergillose, parasitäre Infektionen usw.)
  • COPD/Asthma-Überschneidung.
  • Unfähigkeit oder Verweigerung, die Einverständniserklärung zu unterzeichnen.

Studienplan

Dieser Abschnitt enthält Einzelheiten zum Studienplan, einschließlich des Studiendesigns und der Messung der Studieninhalte.

Wie ist die Studie aufgebaut?

Designdetails

  • Hauptzweck: Diagnose
  • Zuteilung: Zufällig
  • Interventionsmodell: Parallele Zuordnung
  • Maskierung: Keine (Offenes Etikett)

Waffen und Interventionen

Teilnehmergruppe / Arm
Intervention / Behandlung
Experimental: Gruppe A
Patient mit schwerem Asthma, behandelt mit Anti-IL5R-Antikörpern
Biologisch: Anti-IL5-Rezeptor-Antikörper
Patienten mit schwerem unkontrolliertem Asthma werden gemäß ärztlichem Rat und standardisierten Protokollen zur Asthmabehandlung einer Behandlung mit Omalizumab (Anti-Ig-E-Antikörper) oder Mepolizumab (Anti-IL-5-Antikörper) zugewiesen.
Kein Eingriff: Gruppe B
Patient mit schwerem Asthma, behandelt mit konventioneller Therapie

Was misst die Studie?

Primäre Ergebnismessungen

Ergebnis Maßnahme
Maßnahmenbeschreibung
Zeitfenster
Messung der Unterschiede im Prozentsatz der Eosinophilen, die aktivierungsbezogene Moleküle exprimieren, mittels Durchflusszytometrie
Zeitfenster: 12 Monate

Das Vorhandensein aktivierter Eosinophilen wird durch durchflusszytometrische Analyse der Expression von CD193, CD63, CD294, CD125 und HLA-DR auf der Eosinophilenmembran bewertet.

Die Ergebnisse werden als Prozentsatz (%) der Eosinophilen ausgedrückt, die die Moleküle exprimieren.
12 Monate
Messung der Expressionsniveaus von Aktivierungsmarkern auf der Eosinophilenmembran mittels Durchflusszytometrie
Zeitfenster: 12 Monate

Aktivierungsassoziierte Membranmarker (CD193, CD63, CD294, CD125 und HLA-DR) auf der Eosinophilenmembran werden durch Durchflusszytometrie ausgewertet und die Ergebnisse werden als mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) der Moleküle ausgedrückt. Der MFI ist ein Maß für die Menge des auf der Membran der Eosinophilen exprimierten Moleküls: Je höher der MFI, desto höher ist die Dichte der Moleküle auf der Zellmembran.

Die Werte werden als willkürliche Einheiten (AU) ausgedrückt, die vom Gerät definiert werden, indem die Proben mit einer negativen (ungefärbten) Kontrolle verglichen werden.
12 Monate

Sekundäre Ergebnismessungen

Ergebnis Maßnahme
Maßnahmenbeschreibung
Zeitfenster
Korrelation zwischen dem Phänotyp aktivierter Eosinophilen und dem Fortschreiten der Krankheit
Zeitfenster: 12 Monate
Statistische Analysen werden verwendet, um die mögliche Korrelation zwischen der Expression von Aktivierungsmarkern auf Eosinophilen (wie in den primären Endpunkten 1 und 2 beschrieben) und dem klinischen Status der Patienten zu definieren, bewertet durch Flussvolumenkurve, Restvolumen, Ig E und Eosinophilenzahl , 6-Minuten-Gehtest.
12 Monate
Veränderung des Prozentsatzes aktivierter Eosinophilen in der Gruppe der Patienten, die die biologische Behandlung erhalten.
Zeitfenster: 12 Monate
Eine durchflusszytometrische Analyse von Eosinophilen wird vor und nach einjähriger Behandlung mit Antikörpern gegen IL-5 oder IL-5R durchgeführt. Der Prozentsatz der aktivierten Eosinophilen wird wie unter „Primäres Ergebnis“ beschrieben gemessen
12 Monate

Mitarbeiter und Ermittler

Hier finden Sie Personen und Organisationen, die an dieser Studie beteiligt sind.

Sponsor

Scarlata, Simone, M.D.

Mitarbeiter

IRCCS San Raffaele

Studienaufzeichnungsdaten

Diese Daten verfolgen den Fortschritt der Übermittlung von Studienaufzeichnungen und zusammenfassenden Ergebnissen an ClinicalTrials.gov. Studienaufzeichnungen und gemeldete Ergebnisse werden von der National Library of Medicine (NLM) überprüft, um sicherzustellen, dass sie bestimmten Qualitätskontrollstandards entsprechen, bevor sie auf der öffentlichen Website veröffentlicht werden.

Haupttermine studieren

Studienbeginn (Tatsächlich)

18. März 2021

Primärer Abschluss (Voraussichtlich)

1. März 2022

Studienabschluss (Voraussichtlich)

1. März 2023

Studienanmeldedaten

Zuerst eingereicht

23. April 2021

Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat

5. August 2021

Zuerst gepostet (Tatsächlich)

12. August 2021

Studienaufzeichnungsaktualisierungen

Letztes Update gepostet (Tatsächlich)

12. August 2021

Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt

5. August 2021

Zuletzt verifiziert

1. August 2021

Mehr Informationen

Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie

Schlüsselwörter

Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen

Andere Studien-ID-Nummern

  • EoAG

Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen

Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt

Nein

Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt

Nein

Diese Informationen wurden ohne Änderungen direkt von der Website clinicaltrials.gov abgerufen. Wenn Sie Ihre Studiendaten ändern, entfernen oder aktualisieren möchten, wenden Sie sich bitte an register@clinicaltrials.gov. Sobald eine Änderung auf clinicaltrials.gov implementiert wird, wird diese automatisch auch auf unserer Website aktualisiert .

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