지방이식에서 전처리 지방유래 줄기세포의 효능

정보에 입각한 동의에 따라 인간 피하 지방 조직은 수술 중 멸균 상태에서 지방 흡입 용기 또는 20cc B.D 주사기에 수집됩니다. 지방 흡인물 수집은 사전 요청 비당뇨병, 음성 바이러스 상태 환자를 포함한 특정 선택 기준을 기반으로 합니다. 지방 유래 줄기 세포(ASC)는 무균 무균 상태에서 지방 조직에서 분리됩니다. 먼저, biosafety cabinet에서 lipoaspirate 용기를 열고 혈청 피펫을 사용하여 조심스럽게 혈액을 배출합니다. 그런 다음 혈관, 모발 및 기타 유형의 결합 조직을 제거하기 위해 항생제 및 항진균제 용액이 포함된 1X 인산염 완충 식염수(PBS)로 지방을 세 번 세척합니다. 그 후, 조직은 콜라게나제 유형 I 용액(Low Glucose Dulbecco's Modified Eagle Medium(LG-DMEM)에서 제조된 1mg/ml)으로 효소 분해되고 진탕기에서 37°C에서 45분 동안 배양됩니다. 소화 후, 효소는 5% 새로 분리된 인간 혈청으로 보강된 LG-DMEM에 의해 비활성화되고 1200rpm에서 10분 동안 회전합니다. 원심분리 후 지방은 폐기되고 infranatant는 파편을 제거하기 위해 100 µm 셀 스트레이너를 통과합니다. 여액을 다시 1200rpm에서 8분 동안 원심분리합니다. 펠렛을 재현탁하고 5% 인간 혈청이 보충된 10ml LG-DMEM이 들어 있는 멸균 T-75 cm2 플라스크에 플레이팅합니다. 플라스크를 37°C, 5% 이산화탄소(CO2)의 가습 인큐베이터에 넣습니다. 배지는 세포가 80-90% 합류할 때까지 3일마다 보충됩니다. P2-P3 단계의 세포는 이 연구에서 면역세포화학 및 개입에도 사용될 것입니다. 전처리를 위해 ASC는 커큐민 전처리 배지와 함께 24시간 동안 배양됩니다. 세포 불임 및 생존력은 이식 전에 평가될 것입니다. 이식을 위해서는 지방 1ml당 1,00,000개의 세포를 혼합하여 10cc 주사기에 옮겨 기형 부위에 주입하게 됩니다. 지방의 양은 안면 비대칭을 기준으로 임상의가 미리 결정합니다.