Eficacia de las células madre derivadas de tejido adiposo preacondicionadas en el injerto de grasa

El tejido adiposo subcutáneo humano junto con los consentimientos informados se recolectará en un recipiente de lipoaspirado o jeringas B.D de 20 cc en las condiciones esterilizadas durante la cirugía. La recolección de aspirado de grasa se basará en ciertos criterios de selección, incluida la solicitud previa de pacientes no diabéticos con estado viral negativo. Las células madre derivadas de tejido adiposo (ASC) se aislarán del tejido adiposo en condiciones asépticas estériles. En primer lugar, se abrirá el recipiente del lipoaspirado en la cabina de bioseguridad y se drenará la sangre cuidadosamente con la ayuda de una pipeta serológica. Luego, la grasa se lavará tres veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS) 1X que contiene una solución antibiótica y antimicótica, para eliminar los vasos sanguíneos, el cabello y otro tipo de tejido conectivo. Después de eso, el tejido se digerirá enzimáticamente con una solución de colagenasa tipo I (1 mg/ml preparada en medio Eagle modificado por Dulbecco con bajo contenido de glucosa (LG-DMEM) y se incubará durante 45 minutos a 37 °C en un agitador. Después de la digestión, la enzima se inactivará mediante LG-DMEM aumentado con suero humano recién aislado al 5 % y se centrifugará a 1200 rpm durante 10 minutos. Después de la centrifugación, se desechará la grasa y se pasará el infranadante a través de filtros de células de 100 µm para eliminar los residuos. El filtrado se centrifugará nuevamente a 1200 rpm durante 8 minutos. El sedimento se resuspenderá y se sembrará en placas en un matraz estéril T-75 cm2 que contiene 10 ml de LG-DMEM suplementado con suero humano al 5 %. El matraz se colocará en una incubadora humidificada a 37°C, 5% de dióxido de carbono (CO2). Los medios se repondrán después de cada tercer día hasta que las células tengan una confluencia del 80-90 %. Las células de la etapa P2-P3 se utilizarán en este estudio para la inmunocitoquímica y también para la intervención. Para el preacondicionamiento, las ASC se incubarán con medio preacondicionado con curcumina durante 24 h. La esterilidad y la viabilidad de las células se evaluarán antes del trasplante. Para el trasplante, se mezclarán 1,00,000 células por ml de grasa, se transferirán a jeringas de 10 cc y se inyectarán en el sitio de la deformidad. El médico predeterminará la cantidad de grasa en función de la asimetría facial.