Eficácia de células-tronco derivadas de tecido adiposo pré-condicionadas em enxerto de gordura

O tecido adiposo subcutâneo humano de acordo com o consentimento informado será coletado em um recipiente de lipoaspirado ou seringas B.D de 20 cc sob as condições esterilizadas durante a cirurgia. A coleta de aspirado de gordura será baseada em certos critérios de seleção, incluindo pré-requisição de pacientes não diabéticos com status viral negativo. Células-tronco derivadas do tecido adiposo (ASCs) serão isoladas do tecido adiposo sob condições assépticas estéreis. Primeiramente, o recipiente do lipoaspirado será aberto na cabine de biossegurança e drenará o sangue cuidadosamente com auxílio de pipeta sorológica. Em seguida, a gordura será lavada três vezes com tampão fosfato salino 1X (PBS) contendo solução antibiótica e antimicótica, a fim de eliminar vasos sanguíneos, cabelos e outros tipos de tecido conjuntivo. Em seguida, o tecido será digerido enzimaticamente com solução de colagenase tipo I (1mg/ml preparada em meio Eagle modificado por Dulbecco com baixo teor de glicose (LG-DMEM) e incubado por 45 minutos a 37°C em agitador. Após a digestão, a enzima será inativada por LG-DMEM acrescida de 5% de soro humano recém-isolado e centrifugada a 1200 rpm por 10 minutos. Após a centrifugação, a gordura será descartada e o infranadante passará por filtros de células de 100 µm para remover os detritos. O filtrado será novamente centrifugado a 1200rpm por 8 minutos. O pellet será ressuspenso e semeado em frasco T-75 cm2 estéril contendo 10 ml de LG-DMEM suplementado com 5% de soro humano. O frasco será colocado em incubadora umidificada a 37°C, 5% de dióxido de carbono (CO2). A mídia será reabastecida a cada três dias até que as células tenham 80-90% de confluência. Células do estágio P2-P3 serão utilizadas neste estudo para imunocitoquímica e intervenção. Para o pré-condicionamento, as ASCs serão incubadas com curcumina em meio pré-condicionado por 24 h. A esterilidade celular e a viabilidade serão avaliadas antes do transplante. Para o transplante, 1.00.000 células por ml de gordura serão misturadas, transferidas para seringas de 10 cc e injetadas no local da deformidade. A quantidade de gordura será predeterminada pelo clínico com base na assimetria facial.