Effekten av förkonditionerade fetthärledda stamceller vid fettympning

Human subkutan fettvävnad tillsammans med informerat samtycke kommer att samlas in i en lipoaspiratbehållare eller 20 cc B.D-sprutor under steriliserade förhållanden under operationen. Insamling av fettaspirat kommer att baseras på vissa urvalskriterier, inklusive pre-rekvisition av icke-diabetespatienter med negativ viral status. Fetthärledda stamceller (ASC) kommer att isoleras från fettvävnad under sterila aseptiska förhållanden. Först öppnas lipoaspiratbehållaren i biosäkerhetsskåpet och dränerar blodet försiktigt med hjälp av serologisk pipett. Därefter tvättas fett tre gånger med 1X fosfatbuffertsaltlösning (PBS) innehållande antibiotika och antimykotisk lösning, för att bli av med blodkärl, hår och annan typ av bindväv. Efter det kommer vävnaden att smältas enzymatiskt med kollagenas typ I-lösning (1 mg/ml framställd i Low Glucose Dulbeccos modifierade örnmedium (LG-DMEM) och inkuberas i 45 minuter vid 37°C på en shaker. Efter digestion kommer enzymet att inaktiveras av LG-DMEM förstärkt med 5% nyisolerat humant serum och centrifugeras vid 1200 rpm i 10 minuter. Efter centrifugering kommer fett att kasseras och infranatanten kommer att passera genom 100 µm cellsilar för att avlägsna skräpet. Filtratet kommer att centrifugeras igen under 1200 rpm under 8 minuter. Pellet kommer att återsuspenderas och ströks ut i en steril T-75 cm2 kolv innehållande 10 ml LG-DMEM kompletterat med 5 % humant serum. Kolven kommer att placeras i en fuktad inkubator vid 37°C, 5 % koldioxid (CO2). Mediet kommer att fyllas på efter var tredje dag tills cellerna fick 80-90 % sammanflytning. Celler av P2-P3-stadiet kommer att användas i denna studie för immuncytokemi och även intervention. För förkonditionering kommer ASC:er att inkuberas med curcumin-förkonditionerat medium i 24 timmar. Cellsterilitet och livsduglighet kommer att bedömas före transplantation. För transplantation kommer 1 00 000 celler per ml fett att blandas, överföras till 10 cc sprutor och injiceras på deformitetsstället. Mängden fett kommer att förutbestäms av läkaren på basis av ansiktsasymmetri.