노인 환자의 POCD에 대한 진단 바이오마커로서의 LINC01844

시험 설계 이 단일 센터 관찰 시험은 중국 상하이 푸단대학교 중산병원에서 선택적인 요추 감압 및 유합술 중에 실시됩니다. 모든 참가자로부터 서면 동의를 얻습니다. 2024년 2월 21일까지 해당 임상시험은 승인 번호 B2024-063R로 푸단대학교(중국) 중산병원에 대해 승인되었습니다.

마취 환자가 수술실에 들어간 후 활력 징후를 모니터링하고 환자에게 산소 흡입(> 8L/min)을 제공합니다. 전신마취는 수펜타닐(0.2ug/kg), 프로포폴[혈장농도 3ug/ml의 표적조절주입(TCI)), 레미펜타닐(TCI 혈장농도 3ng/ml) 및 로쿠로늄(0.6mg/kg)으로 유도됩니다. . 마취 깊이, 혈압, 호흡 지표에 따라 수술 중 마약성 약물과 혈관 활성 약물을 사용합니다. 수술 후 환자 조절형 정맥 진통제(PCIA) 펌프(수펜타닐 250ug, 라모세트론 0.6mg)를 연결합니다.

LINC01844의 검출 및 준비 제조업체의 지침에 따라 TRIzol LS(Invitrogen, USA)를 사용하여 말초 혈액 샘플에서 전체 RNA를 추출합니다. 간단히 말하면, 혈액 샘플(250 μL)을 TRIzol LS 리젠트(750 μL)로 균질화한 후 추가 분석을 위해 클로로포름(200 μL)을 첨가합니다. 샘플을 12,000 x g, 4˚C에서 15분간 원심분리한 후 RNA가 포함된 수성상을 새 튜브로 옮기고 RNA 침전을 위해 이소프로판올(0.5 mL)을 첨가합니다. RNA 펠릿을 75% 에탄올(1mL)로 세척하고 마지막으로 RNase가 없는 물(10-20μL)에 재현탁하고 NanoDrop2000을 사용하여 RNA 품질을 측정합니다. 260/280 >1.80의 광학 밀도 비율은 샘플이 후속 실험에 사용될 수 있음을 나타냅니다. 다음으로 cDNA 합성을 위해 M-MLV 역전사효소(Promega, USA)를 사용합니다. SYBR Green PCR Master Mix Kit(Qiagen)의 지침에 따라 실시간 정량 중합효소 연쇄 반응(qRT-PCR)을 최종 분석에 활용했습니다. PCR 매개변수: 95˚C에서 10분; 95˚C에서 15초, 60˚C에서 30초, 72˚C에서 30초 동안 45사이클. GAPDH는 참조 유전자로 선택되었으며 배수 변화(2-44Ct)는 LINC01844 상대 수준을 분석하는 데 활용되었습니다.

신경심리검사 평가 및 POCD 평가 수술 1일 전 환자 건강 설문지-9(PHQ-9)을 통해 환자의 우울증 여부를 평가하고, 이전에 중증 인지 장애가 있었던 환자는 간이 정신 상태 검사(MMSE)(MMSE)를 통해 제외한다. 점수 < 24). 환자의 인지 기능을 평가하기 위해 수술 1일 전과 수술 후 1일, 3일, 5일에 홉킨스 청각 학습 테스트(HALT-R), 단기 시공간 기억 테스트(BVMT)를 포함한 일련의 신경심리학 테스트가 수행됩니다. -R), 트레일 메이킹 테스트(TMT), 숫자 범위 테스트(DST), 디지털 기호 대체 테스트(DSST) 및 동사 및 그래프 회상 테스트. 이러한 모든 검사는 수술 절차와 혈액 샘플을 알지 못하는 숙련된 의사에 의해 조용한 환경에서 수행됩니다. 동시에 수술을 받지 않은 건강한 자원봉사자 20명을 연령, 성별, 학력을 일치시켜 대조군으로 모집할 예정이다. 신경심리검사는 인지기능의 정상 기준값을 결정하기 위해 대조군에서 동일한 간격으로 시행됩니다. 각 신경심리검사 점수에서 수술 후 인지장애 연구를 위한 국제 가이드라인에 따라 기준점수와 학습성과를 뺀 후 대조군의 기준점수의 표준편차로 나누었습니다. 결과는 Z 점수로 지정되었습니다. 두 개 이상의 Z 척도가 1.961보다 큰 경우 POCD가 고려되었습니다.

연구 방문 및 데이터 수집 환자는 수술 전과 수술 후 당일(POD) 1, 3, 5에 방문됩니다. 환자는 포함 기준에 따라 선별됩니다. 포함 기준을 충족하는 모든 환자는 스크리닝 로그 파일에 등록됩니다. 연구자는 연구 과정과 목적을 설명하고 연구에 대한 서면 정보를 제공합니다. 연구에 참여하고자 하는 환자는 서면 동의서를 제출해야 합니다.

데이터는 시험 현장 조사자의 감독 하에 시험 또는 임상 인력이 전자 데이터 캡처(EDC) 시스템에 있는 종이 증례 보고 양식(CRF)과 전자 증례 보고 양식(eCRF)에 모두 등록됩니다. 불일치가 있는 경우 종이 CRF가 표준으로 사용됩니다.

데이터 처리 연구팀의 두 구성원이 연구 모니터링을 수행합니다. 초기 이상 패턴, 일관성 문제, 신뢰성 및 기타 이상 현상을 알리기 위해 원격 모니터링이 수행됩니다. 환자 데이터는 4자리 3자리로 구성된 환자(식별) 번호를 사용하여 가명 형태로 수집됩니다. 연구 데이터는 연구자 개시 시험 EDC(IIT-EDC) 도구를 사용하여 수집 및 관리됩니다. IIT-EDC는 연구 조사를 위한 데이터 기록을 지원하도록 설계된 암호로 보호된 인트라넷 기반 애플리케이션입니다(웹사이트: http://10.15.7.137). 선택된 조사자에게는 최종 시험 데이터 세트에 대한 전체 액세스 권한이 부여됩니다. 동의서, 예상치 못한 심각한 부작용(SAE)이 의심되는 보고서, 관련 서신을 포함한 모든 원본 기록은 임상 시험 현장에 10년 동안 보관됩니다. 깨끗한 임상시험 데이터베이스 파일은 익명화되어 10년 동안 유지됩니다.

안전성 임상시험과 관련이 있다고 생각되는 모든 부작용(AE)은 임상시험 조정 센터에 보고됩니다. 현지 법률 및 규정에 따라 참가자는 당사 부서에서 제공하는 무료 치료를 받거나 본 연구와 관련된 부상이 발생할 경우 보상을 받을 수 있으며, 예상치 못한 SAE가 의심되는 모든 경우 데이터 모니터링 및 안전 위원회(DMSC)에 보고됩니다. DMSC는 시험 연구자로부터 독립적이며 안전성 매개변수와 전반적인 연구 수행에 대한 지속적인 검토를 수행합니다. DMSC는 대규모 임상시험의 독립적인 전문가 2명과 독립적인 통계학자 1명으로 구성됩니다. DMSC는 임상시험 참가자의 이익을 보호하고, 임상시험 중 중재의 안전성과 효능을 평가하고, 임상시험의 전반적인 수행을 모니터링하는 일을 담당합니다. 시험의 무결성을 강화하기 위해 DMSC는 참가자 모집/유지, 참가자 관리, 프로토콜에 지정된 요법 준수 및 참가자 유지 개선, 데이터 관리 및 품질 관리 절차와 관련된 권장 사항을 공식화할 수도 있습니다.

통계 분석 표본 크기 - 노인의 수술 후 POCD에 대한 혈액 내 LINC01844 상대 수치 예측값을 검증하려면 수신자 작동 특성 곡선(ROC)을 통해 측정한 곡선하 면적(AUC)이 0.5 이상이어야 합니다. 예비시험 결과에 따르면 AUC는 0.73이었고 POCD 발생률은 33.3%였다. 샘플 크기는 PASS(버전 11.0)로 계산되었습니다. 단측 대립 가설에 대한 80%의 검정력과 5%의 유의 수준을 위해서는 57명의 참가자가 필요합니다. 참가자 중 10%가 탈락할 것으로 예상하면 표본 크기 63이 필요합니다.

분석 - Kolmogorov-Smirnov 테스트는 연속 데이터의 정규 분포를 평가하는 데 사용됩니다. 기본 특성은 적절하게 개수 및 백분율, 평균 및 표준 편차, 중앙값 및 사분위수 범위로 표시됩니다. POCD의 독립 예측 변수는 이진 로지스틱 회귀 분석을 통해 분석되었으며 결과는 교차비(OR)로 표시되었습니다. POCD에 대한 LINC01844의 예측 성능은 ROC를 사용하여 측정되며 결과는 95% 신뢰 구간과 AUC에 의해 결정됩니다. 1차 및 2차 결과에 대한 후속 조치에 대한 손실이 없거나 최소화될 것으로 예상됩니다. 치료 의도(ITT, 모든 무작위 할당 사례) 모집단은 모든 결과 분석에 사용됩니다. 지지적 분석은 전체 분석 세트(FAS, 요추 감압 및 유합술을 받은 모든 무작위 배정 환자)를 기반으로 합니다. 모든 결과에 대해 완전한 사례 분석이 수행됩니다. 다만, 1차 결과에 대해 결측자료가 1% 이상 발견된 경우 다중 대치 및 추정방정식 방법을 이용한 민감도 분석을 실시한다.

데이터베이스 정리 및 잠금 현재 연구 중에 사용 및/또는 분석된 데이터 세트는 합당한 요청이 있을 경우 교신 작성자에게 제공됩니다. 데이터베이스는 모든 데이터가 입력되고 일치하지 않거나 누락된 모든 데이터가 해결된 후 즉시 잠기게 됩니다. 또는 모든 노력을 기울였으나 나머지 문제를 해결할 수 없다고 판단한 경우에는 즉시 잠깁니다. 이 단계에서는 데이터베이스를 잠그기 전에 데이터를 검토합니다. 그러면 연구 데이터베이스가 잠기고 통계 분석을 위해 내보내집니다. 이 단계에서는 모든 조사자의 데이터베이스 접근 권한이 제거되고 데이터베이스는 보관됩니다.