LINC01844 come biomarcatore diagnostico per POCD nei pazienti anziani

Disegno dello studio Questo studio osservazionale in un singolo centro sarà condotto durante la decompressione e fusione lombare elettiva presso l'ospedale Fudan University di Zhongshan, Shanghai, Cina. Il consenso informato scritto viene ottenuto da tutti i partecipanti. Entro il 21 febbraio 2024, lo studio è stato approvato per l'ospedale Zhongshan, Università di Fudan (Cina) con il numero di approvazione B2024-063R.

Anestesia Dopo che i pazienti sono entrati nella sala operatoria, i segni vitali vengono monitorati, ai pazienti viene somministrata l'inalazione di ossigeno (> 8 L/min). L'anestesia generale è indotta con sufentanil (0,2 ug/kg), propofol [infusione controllata target (TCI) alla concentrazione plasmatica di 3 ug/ml), remifentanil (TCI alla concentrazione plasmatica di 3 ng/ml) e rocuronio (0,6 mg/kg). . I farmaci narcotici e vasoattivi vengono utilizzati durante l'intervento in base alla profondità dell'anestesia, alla pressione sanguigna e ai parametri respiratori. Una pompa per analgesia endovenosa controllata dal paziente (PCIA) (sufentanil 250ug e ramosetron 0,6 mg) viene collegata dopo l'intervento.

Rilevamento e preparazione dell'RNA totale LINC01844 viene estratto da campioni di sangue periferico utilizzando TRIzol LS (Invitrogen, USA) secondo le istruzioni del produttore. In breve, dopo aver omogeneizzato il campione di sangue (250 μL) con il regente TRIzol LS (750 μL), viene aggiunto cloroformio (200 μL) per ulteriori analisi. Il campione viene centrifugato a 12.000 × g, 4°C per 15 minuti, quindi la fase acquosa contenente l'RNA viene trasferita in una nuova provetta e viene aggiunto isopropanolo (0,5 mL) per la precipitazione dell'RNA. Il pellet di RNA viene lavato con etanolo al 75% (1 mL) e infine risospeso in acqua priva di RNasi (10-20 μL), la qualità dell'RNA viene determinata con NanoDrop2000. Un rapporto di densità ottica di 260/280 >1,80 indica che il campione potrebbe essere utilizzato in esperimenti successivi. Successivamente, utilizziamo la trascrittasi inversa M-MLV (Promega, USA) per la sintesi del cDNA. Per l'analisi finale è stata utilizzata una reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale (qRT-PCR) secondo le istruzioni del SYBR Green PCR Master Mix Kit (Qiagen). I parametri PCR: 95˚C per 10 minuti; 45 cicli a 95˚C per 15 s, 60˚C per 30 s e 72˚C per 30 s. GAPDH viene scelto come gene di riferimento, il fold change (2 -44Ct) viene utilizzato per analizzare i livelli relativi di LINC01844.

Valutazione dei test neuropsicologici e valutazione POCD Un giorno prima dell'intervento chirurgico, i pazienti verranno valutati per la depressione utilizzando il Patient Health Questionnaire-9 (PHQ-9), mentre i pazienti con precedente grave deterioramento cognitivo saranno esclusi utilizzando il mini mental state exam (MMSE) (MMSE punteggio < 24). Una serie di test neuropsicologici verrà eseguita 1 giorno prima dell'intervento e il 1°, 3° e 5° giorno dopo l'intervento per valutare la funzione cognitiva dei pazienti, tra cui il test di apprendimento uditivo di Hopkins rivisto (HALT-R), il breve test di memoria visuospaziale rivisto (BVMT) -R), test di trail making (TMT), test di digit span (DST), test di sostituzione di simboli digitali (DSST) e test di richiamo di verbi e grafici. Tutti questi test vengono eseguiti in un ambiente tranquillo da un medico esperto che non vede la procedura chirurgica e il prelievo di sangue. Allo stesso tempo, 20 volontari sani senza intervento chirurgico saranno reclutati come gruppo di controllo, abbinando età, sesso e anni di istruzione. Il test neuropsicologico verrà eseguito nel gruppo di controllo per determinare il normale valore di riferimento della funzione cognitiva, con lo stesso intervallo. I punteggi di base e i risultati dell’apprendimento sono stati sottratti da ciascun punteggio del test neuropsicologico secondo le linee guida internazionali per lo studio del deterioramento cognitivo postoperatorio e divisi per la deviazione standard dei punteggi di base nel gruppo di controllo. Il risultato è stato designato come punteggio Z. Quando almeno due scale Z sono maggiori di 1.961, è stato considerato il POCD.

Visite di studio e raccolta dati I pazienti verranno visitati prima e dopo l'intervento nei giorni 1, 3 e 5. I pazienti saranno selezionati secondo i criteri di inclusione. Tutti i pazienti che soddisfano i criteri di inclusione verranno registrati in un file di registro dello screening. Gli investigatori spiegheranno il corso e lo scopo dello studio e forniranno informazioni scritte sullo studio. Ai pazienti che desiderano partecipare allo studio verrà richiesto di fornire il consenso informato scritto.

I dati verranno registrati sia nel modulo cartaceo di segnalazione del caso (CRF) che nel modulo elettronico di segnalazione del caso (eCRF) sul sistema di acquisizione elettronica dei dati (EDC) da parte del personale clinico o dello studio sotto la supervisione degli investigatori del sito di sperimentazione. In caso di incoerenza verrà utilizzata come gold standard la CRF cartacea.

Trattamento dei dati Due membri del gruppo di ricerca eseguiranno il monitoraggio dello studio. Verrà effettuato un monitoraggio remoto per segnalare i primi modelli aberranti, problemi di coerenza, credibilità e altre anomalie. I dati del paziente verranno raccolti in forma pseudonima utilizzando un numero di paziente (identificazione) composto da quattro tre cifre. I dati dello studio verranno raccolti e gestiti utilizzando gli strumenti di uno studio EDC (IIT-EDC) avviato dallo sperimentatore. IIT-EDC è un'applicazione intranet protetta da password, progettata per supportare la registrazione di dati per studi di ricerca (sito web: http://10.15.7.137). L'accesso completo al set di dati finale dello studio sarà concesso ai ricercatori selezionati. Tutti i documenti originali, inclusi i moduli di consenso, le segnalazioni di sospetti eventi avversi gravi inaspettati (SAE) e la relativa corrispondenza, saranno archiviati nei siti di sperimentazione per 10 anni. Il file del database della sperimentazione pulita sarà reso anonimo e mantenuto per 10 anni.

Sicurezza Tutti gli eventi avversi (EA) ritenuti correlati allo studio verranno segnalati al centro di coordinamento dello studio. Secondo le leggi e i regolamenti locali, i partecipanti possono ricevere un trattamento gratuito fornito dalla nostra unità o essere risarciti se si verificano lesioni correlate a questo studio e tutti i sospetti SAE imprevisti verranno segnalati al comitato per il monitoraggio e la sicurezza dei dati (DMSC). Il DMSC è indipendente dagli investigatori dello studio ed eseguirà una revisione continua dei parametri di sicurezza e della condotta complessiva dello studio. Il DMSC comprende due esperti indipendenti in studi clinici su larga scala e uno statistico indipendente. Il DMSC sarà responsabile della salvaguardia degli interessi dei partecipanti allo studio, della valutazione della sicurezza e dell'efficacia degli interventi durante lo studio e del monitoraggio della condotta complessiva dello studio clinico. Per migliorare l'integrità dello studio, il DMSC può anche formulare raccomandazioni relative al reclutamento/mantenimento dei partecipanti, alla loro gestione, al miglioramento dell'aderenza ai regimi specificati nel protocollo e al mantenimento dei partecipanti, nonché alle procedure per la gestione dei dati e il controllo di qualità.

Analisi statistica Dimensione del campione - Per verificare il valore di previsione del livello relativo di LINC01844 nel sangue per POCD di persone anziane dopo l'intervento chirurgico, l'area sotto la curva (AUC) misurata tramite la curva caratteristica operativa del ricevitore (ROC) deve essere superiore a 0,5. Sulla base dei risultati dello studio preliminare, l'AUC era 0,73 e l'incidenza di POCD era 33,3%. La dimensione del campione è stata calcolata da PASS (versione 11.0). Per una potenza dell'80% e un livello di significatività del 5% rispetto all'ipotesi alternativa unilaterale, sono necessari 57 partecipanti. Prevedendo un abbandono del 10% dei partecipanti, è necessaria una dimensione del campione di 63 partecipanti.

Analisi - Il test di Kolmogorov-Smirnov verrà utilizzato per valutare la distribuzione normale di dati continui. Le caratteristiche di base saranno espresse come conteggi e percentuali, medie e deviazioni standard, o mediane e intervalli interquartili, a seconda dei casi. I predittori indipendenti di POCD sono stati analizzati mediante regressione logistica binaria e i risultati sono stati espressi come odds ratio (OR). Le prestazioni di previsione di LINC01844 per POCD verranno misurate utilizzando ROC e i risultati saranno determinati dagli intervalli di confidenza al 95% e dall'AUC. Sono previste perdite minime o assenti al follow-up per gli esiti primari e secondari. Per tutte le analisi dei risultati viene utilizzata la popolazione intenzionale al trattamento (ITT, tutti i casi assegnati in modo casuale). L'analisi di supporto si basa su un set di analisi completo (FAS, tutti i pazienti assegnati in modo casuale a ricevere decompressione e fusione lombare). Per tutti i risultati verrà eseguita l'analisi del caso completo. Tuttavia, se viene trovato più dell'1% dei dati mancanti per l'esito primario, verrà effettuata un'analisi di sensibilità utilizzando imputazioni multiple e metodi di stima delle equazioni.

Pulizia e blocco del database I set di dati utilizzati e/o analizzati durante lo studio in corso saranno resi disponibili dall'autore corrispondente su ragionevole richiesta. Il database verrà bloccato immediatamente dopo che tutti i dati sono stati immessi e tutti i dati discrepanti o mancanti sono stati risolti o, in alternativa, se sono stati compiuti tutti gli sforzi e si ritiene che i problemi rimanenti non possano essere risolti. In questo passaggio, i dati verranno esaminati prima del blocco del database. Il database dello studio verrà quindi bloccato ed esportato per l'analisi statistica. In questa fase, il permesso di accesso al database verrà rimosso per tutti gli investigatori e il database verrà archiviato.