LINC01844 como biomarcador diagnóstico para DCPO em pacientes idosos

Desenho do ensaio Este ensaio observacional unicêntrico será conduzido durante descompressão lombar eletiva e fusão no Hospital Zhongshan Fudan University, Xangai, China. O consentimento informado por escrito é obtido de todos os participantes. Em 21 de fevereiro de 2024, o ensaio foi aprovado para o Hospital Zhongshan, Universidade Fudan (China) com o número de aprovação B2024-063R.

Anestesia Após a entrada dos pacientes na sala de cirurgia, os sinais vitais são monitorados, os pacientes recebem oxigênio inalatório (> 8L/min). A anestesia geral é induzida com sufentanil (0,2ug/kg), propofol [infusão alvo controlada (TCI) na concentração plasmática de 3ug/ml), remifentanil (TCI na concentração plasmática de 3 ng/ml) e rocurônio (0,6mg/kg) . Os narcóticos e vasoativos são utilizados durante a operação de acordo com a profundidade da anestesia, a pressão arterial e os parâmetros respiratórios. Uma bomba de analgesia intravenosa controlada pelo paciente (PCIA) (sufentanil 250ug e ramosetron 0,6mg) é conectada após a cirurgia.

Detecção e preparação de RNA total LINC01844 é extraído de amostras de sangue periférico usando TRIzol LS (Invitrogen, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. Resumidamente, após homogeneizar a amostra de sangue (250 μL) com regente TRIzol LS (750 μL), adiciona-se clorofórmio (200 μL) para análise posterior. A amostra é centrifugada a 12.000 × g, 4˚C por 15 min, depois a fase aquosa contendo o RNA é transferida para um novo tubo e isopropanol (0,5 mL) é adicionado para precipitação do RNA. O pellet de RNA é lavado com etanol a 75% (1 mL) e finalmente ressuspenso em água livre de RNase (10-20 μL), a qualidade do RNA é determinada com NanoDrop2000. Uma relação de densidade óptica de 260/280> 1,80 é uma indicação de que a amostra pode ser usada em experimentos subsequentes. A seguir, utilizamos a transcriptase reversa M-MLV (Promega, EUA) para a síntese de cDNA. Uma reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) foi utilizada para a análise final de acordo com as instruções do SYBR Green PCR Master Mix Kit (Qiagen). Os parâmetros de PCR: 95˚C por 10 min; 45 ciclos a 95˚C por 15 s, 60˚C por 30s e 72˚C por 30s. GAPDH é escolhido como gene de referência, a alteração de dobra (2 -44Ct) é utilizada para analisar os níveis relativos de LINC01844.

Avaliação de teste neuropsicológico e avaliação de DCPO Um dia antes da cirurgia, os pacientes serão avaliados quanto à depressão usando o Questionário de saúde do paciente-9 (PHQ-9), enquanto pacientes com comprometimento cognitivo grave anterior são excluídos usando o mini exame do estado mental (MEEM) (MEEM pontuação <24). Uma bateria de testes neuropsicológicos será realizada 1 dia antes da operação e 1º, 3º e 5º dia após a operação para avaliar a função cognitiva dos pacientes, incluindo teste de aprendizagem auditiva Hopkins revisado (HALT-R), breve teste de memória visuoespacial revisado (BVMT -R), teste de trilha (TMT), teste de extensão de dígitos (DST), teste de substituição de símbolo digital (DSST) e teste de recuperação de verbo e gráfico. Todos esses testes são realizados em um ambiente silencioso por um médico treinado, que não conhece o procedimento cirúrgico e a amostra de sangue. Ao mesmo tempo, 20 voluntários saudáveis ​​sem cirurgia serão recrutados como grupo controle, com idade, sexo e escolaridade pareados. O teste neuropsicológico será realizado no grupo controle para determinar o valor de referência normal da função cognitiva, com o mesmo intervalo. As pontuações iniciais e os resultados de aprendizagem foram subtraídos de cada pontuação do teste neuropsicológico de acordo com as diretrizes internacionais para o estudo do comprometimento cognitivo pós-operatório e divididos pelo desvio padrão das pontuações iniciais no grupo controle. O resultado foi designado escore Z. Quando pelo menos duas escalas Z forem maiores que 1,961, foi considerada DCPO.

Visitas de estudo e coleta de dados Os pacientes serão visitados no pré-operatório e no dia pós-operatório (POD) 1, 3 e 5. Os pacientes serão triados de acordo com os critérios de inclusão. Todos os pacientes que atenderem aos critérios de inclusão serão registrados em um arquivo de registro de triagem. Os investigadores explicarão o curso e o propósito do estudo e fornecerão informações por escrito sobre o estudo. Os pacientes dispostos a participar do estudo deverão fornecer consentimento informado por escrito.

Os dados serão registrados no formulário de relato de caso em papel (CRF) e no formulário eletrônico de relato de caso (eCRF) no sistema de captura eletrônica de dados (EDC) pelo ensaio ou pessoal clínico sob a supervisão dos investigadores do centro de ensaio. No caso de inconsistência, o CRF em papel será utilizado como padrão ouro.

Tratamento dos dados Dois membros da equipe de pesquisa realizarão o monitoramento do estudo. O monitoramento remoto será realizado para sinalizar padrões aberrantes precoces, problemas de consistência, credibilidade e outras anomalias. Os dados do paciente serão coletados em forma de pseudônimo usando um número de paciente (identificação) composto por quatro três dígitos. Os dados do estudo serão coletados e gerenciados usando ferramentas EDC de ensaio iniciadas pelo investigador (IIT-EDC). O IIT-EDC é um aplicativo baseado em intranet protegido por senha, projetado para apoiar o registro de dados para estudos de pesquisa (website: http://10.15.7.137). O acesso total ao conjunto de dados final do ensaio será concedido aos investigadores selecionados. Todos os registros originais, incluindo formulários de consentimento, relatos de suspeitas de eventos adversos graves inesperados (SAE) e correspondências relevantes, serão arquivados nos locais de estudo por 10 anos. O arquivo limpo do banco de dados do teste será anonimizado e mantido por 10 anos.

Segurança Todos os eventos adversos (EA) considerados relacionados ao estudo serão relatados ao centro de coordenação do estudo. De acordo com as leis e regulamentos locais, os participantes podem receber tratamento gratuito fornecido por nossa unidade ou ser indenizados se ocorrer qualquer lesão relacionada a este estudo, e todas as suspeitas de EAGs inesperados serão relatadas ao comitê de monitoramento e segurança de dados (DMSC). O DMSC é independente dos investigadores do estudo e realizará uma revisão contínua dos parâmetros de segurança e da conduta geral do estudo. O DMSC é composto por dois especialistas independentes em ensaios clínicos de grande escala e um estatístico independente. O DMSC será responsável por salvaguardar os interesses dos participantes do ensaio, avaliando a segurança e eficácia das intervenções durante o ensaio e monitorizando a condução geral do ensaio clínico. Para melhorar a integridade do ensaio, o DMSC também pode formular recomendações relacionadas com o recrutamento/retenção de participantes, a sua gestão, melhorando a adesão aos regimes especificados pelo protocolo e retenção de participantes, e procedimentos para gestão de dados e controlo de qualidade.

Análise estatística Tamanho da amostra -Para verificar o valor de previsão do nível relativo de LINC01844 no sangue para DCPO de idosos após a cirurgia, a área sob a curva (AUC) medida por meio da curva característica de operação do receptor (ROC) precisa ser superior a 0,5. Com base nos resultados do ensaio preliminar, a AUC foi de 0,73 e a incidência de DCPO foi de 33,3%. O tamanho da amostra foi calculado pelo PASS (versão 11.0). Para poder de 80% e nível de significância de 5% contra a hipótese alternativa unilateral, são necessários 57 participantes. Esperando-se uma desistência de 10% dos participantes, é necessário um tamanho de amostra de 63.

Análise - O teste de Kolmogorov-Smirnov será utilizado para avaliar a distribuição normal dos dados contínuos. As características da linha de base serão expressas como contagens e porcentagens, médias e desvios padrão, ou medianas e intervalos interquartis, conforme apropriado. Os preditores independentes de DCPO foram analisados ​​por regressão logística binária e os resultados foram expressos como odds ratio (OR). O desempenho de previsão do LINC01844 para POCD será medido usando ROC, e os resultados foram determinados pelos intervalos de confiança de 95% e AUC. Não são esperadas perdas ou perdas mínimas no acompanhamento dos resultados primários e secundários. A população com intenção de tratar (ITT, todos os casos atribuídos aleatoriamente) é usada para todas as análises de resultados. A análise de suporte é baseada em um conjunto de análise completo (FAS, todos os pacientes designados aleatoriamente que recebem descompressão e fusão lombar). A análise do caso completo será realizada para todos os resultados. No entanto, se forem encontrados mais de 1% de dados faltantes para o desfecho primário, será realizada uma análise de sensibilidade usando múltiplas imputações e métodos de equações de estimativa.

Limpeza e bloqueio do banco de dados Os conjuntos de dados utilizados e/ou analisados ​​durante o presente estudo serão disponibilizados pelo autor correspondente mediante solicitação razoável. A base de dados será bloqueada imediatamente após a introdução de todos os dados e a resolução de todos os dados discrepantes ou em falta, ou, em alternativa, se todos os esforços tiverem sido empreendidos e considerarmos que os problemas restantes não podem ser corrigidos. Nesta etapa, os dados serão revisados ​​antes do bloqueio do banco de dados. O banco de dados do estudo será então bloqueado e exportado para análise estatística. Nesta fase, a permissão de acesso ao banco de dados será removida de todos os investigadores e o banco de dados será arquivado.