LINC01844 comme biomarqueur diagnostique du POCD chez les patients âgés

Conception de l'essai Cet essai observationnel monocentrique sera mené pendant la décompression lombaire et la fusion électives à l'hôpital Zhongshan de l'Université Fudan, Shanghai, Chine. Un consentement éclairé écrit est obtenu de tous les participants. Le 21 février 2024, l'essai a été approuvé pour l'hôpital Zhongshan de l'université de Fudan (Chine) avec le numéro d'approbation B2024-063R.

Anesthésie Après l'entrée des patients dans la salle d'opération, les signes vitaux sont surveillés, les patients reçoivent des inhalations d'oxygène (> 8 L/min). L'anesthésie générale est induite avec du sufentanil (0,2 ug/kg), du propofol [perfusion cible contrôlée (TCI) à une concentration plasmatique de 3 ug/ml), du rémifentanil (TCI à une concentration plasmatique de 3 ng/ml) et du rocuronium (0,6 mg/kg). . Les médicaments narcotiques et vasoactifs sont utilisés pendant l'opération en fonction de la profondeur de l'anesthésie, de la tension artérielle et des paramètres respiratoires. Une pompe d'analgésie intraveineuse contrôlée par le patient (PCIA) (sufentanil 250 ug et ramosétron 0,6 mg) est connectée après la chirurgie.

Détection et préparation de l'ARN total LINC01844 est extrait d'échantillons de sang périphérique à l'aide de TRIzol LS (Invitrogen, USA) conformément aux instructions du fabricant. En bref, après homogénéisation de l'échantillon de sang (250 μL) avec TRIzol LS regent (750 μL), du chloroforme (200 μL) est ajouté pour une analyse plus approfondie. L'échantillon est centrifugé à 12 000 × g, 4 °C pendant 15 min, puis la phase aqueuse contenant l'ARN est transférée dans un nouveau tube et de l'isopropanol (0,5 ml) est ajouté pour la précipitation de l'ARN. Le culot d'ARN est lavé avec de l'éthanol à 75 % (1 ml), et enfin remis en suspension dans de l'eau sans RNase (10-20 μL), la qualité de l'ARN est déterminée avec NanoDrop2000. Un rapport de densité optique de 260/280 > 1,80 indique que l'échantillon pourrait être utilisé dans des expériences ultérieures. Ensuite, nous utilisons la transcriptase inverse M-MLV (Promega, USA) pour la synthèse de l'ADNc. Une réaction en chaîne par polymérase quantitative en temps réel (qRT-PCR) a été utilisée pour l'analyse finale conformément aux instructions du kit SYBR Green PCR Master Mix (Qiagen). Les paramètres de la PCR : 95˚C pendant 10 min ; 45 cycles à 95˚C pendant 15 s, 60˚C pendant 30 s et 72˚C pendant 30 s. GAPDH est choisi comme gène de référence, le changement de pli (2 -44Ct) est utilisé pour analyser les niveaux relatifs de LINC01844.

Évaluation des tests neuropsychologiques et évaluation POCD Un jour avant la chirurgie, les patients seront évalués pour la dépression à l'aide du questionnaire de santé du patient-9 (PHQ-9), tandis que les patients ayant déjà présenté des troubles cognitifs sévères sont exclus à l'aide du mini examen de l'état mental (MMSE) (MMSE score < 24). Une batterie de tests neuropsychologiques sera effectuée 1 jour avant l'opération et 1er, 3ème et 5ème jour après l'opération pour évaluer la fonction cognitive des patients, y compris le test d'apprentissage auditif de Hopkins révisé (HALT-R), un bref test de mémoire visuospatiale révisé (BVMT -R), test de création de sentiers (TMT), test d'étendue des chiffres (DST), test de substitution de symboles numériques (DSST) et test de rappel de verbes et de graphiques. Tous ces tests sont effectués dans un environnement calme par un médecin qualifié qui ne connaît pas la procédure chirurgicale et l'échantillon de sang. Dans le même temps, 20 volontaires sains sans chirurgie seront recrutés comme groupe témoin, avec l'âge, le sexe et les années d'éducation correspondant. Le test neuropsychologique sera réalisé en groupe témoin pour déterminer la valeur de référence normale de la fonction cognitive, avec le même intervalle. Les scores de base et les résultats d'apprentissage ont été soustraits de chaque score de test neuropsychologique conformément aux lignes directrices internationales pour l'étude des troubles cognitifs postopératoires, et divisés par l'écart type des scores de base dans le groupe témoin. Le résultat a été désigné par un score Z. Lorsqu’au moins deux échelles Z sont supérieures à 1,961, le POCD a été pris en compte.

Visites d'étude et collecte de données Les patients seront visités les jours préopératoire et postopératoire (POD) 1, 3 et 5. Les patients seront dépistés selon les critères d'inclusion. Tous les patients répondant aux critères d'inclusion seront enregistrés dans un fichier journal de dépistage. Les enquêteurs expliqueront le déroulement et le but de l'étude et fourniront des informations écrites sur l'étude. Les patients souhaitant participer à l'étude devront fournir un consentement éclairé écrit.

Les données seront enregistrées à la fois dans le formulaire de rapport de cas papier (CRF) et dans le formulaire de rapport de cas électronique (eCRF) sur le système de saisie électronique des données (EDC) par le personnel d'essai ou clinique sous la supervision des enquêteurs du site d'essai. En cas d’incohérence, le CRF papier sera utilisé comme référence.

Traitement des données Deux membres de l'équipe de recherche effectueront le suivi de l'étude. Une surveillance à distance sera effectuée pour signaler les premiers modèles aberrants, les problèmes de cohérence, de crédibilité et d'autres anomalies. Les données des patients seront collectées sous forme pseudonyme à l'aide d'un numéro (d'identification) de patient composé de quatre trois chiffres. Les données de l'étude seront collectées et gérées à l'aide d'outils EDC d'essai lancé par l'investigateur (IIT-EDC). IIT-EDC est une application intranet protégée par mot de passe conçue pour prendre en charge l'enregistrement de données pour les études de recherche (site Web : http://10.15.7.137). Un accès complet à l'ensemble de données final de l'essai sera accordé aux enquêteurs sélectionnés. Tous les dossiers originaux, y compris les formulaires de consentement, les rapports d'événements indésirables graves (EIG) inattendus et les correspondances pertinentes, seront archivés sur les sites d'essai pendant 10 ans. Le fichier de la base de données d'essai propre sera anonymisé et conservé pendant 10 ans.

Sécurité Tous les événements indésirables (EI) considérés comme liés à l'essai seront signalés au centre de coordination de l'essai. Conformément aux lois et réglementations locales, les participants peuvent recevoir un traitement gratuit fourni par notre unité ou être indemnisés si une blessure liée à cette étude survient, et tous les EIG inattendus suspectés seront signalés au comité de surveillance et de sécurité des données (DMSC). Le DMSC est indépendant des enquêteurs de l'essai et effectuera un examen continu des paramètres de sécurité et de la conduite globale de l'étude. Le DMSC est composé de deux experts indépendants en essais cliniques à grande échelle et d'un statisticien indépendant. Le DMSC sera chargé de sauvegarder les intérêts des participants à l’essai, d’évaluer la sécurité et l’efficacité des interventions pendant l’essai et de surveiller le déroulement global de l’essai clinique. Pour améliorer l'intégrité de l'essai, le DMSC peut également formuler des recommandations relatives au recrutement/à la rétention des participants, à leur gestion, à l'amélioration du respect des schémas thérapeutiques spécifiés dans le protocole et à la rétention des participants, ainsi qu'aux procédures de gestion des données et de contrôle qualité.

Analyse statistique Taille de l'échantillon - Pour vérifier la valeur prédictive du niveau relatif de LINC01844 dans le sang pour le POCD des personnes âgées après une intervention chirurgicale, l'aire sous la courbe (AUC) mesurée via la courbe caractéristique de fonctionnement du récepteur (ROC) doit être supérieure à 0,5. D'après les résultats de l'essai préliminaire, l'ASC était de 0,73 et l'incidence du POCD était de 33,3 %. La taille de l'échantillon a été calculée par PASS (version 11.0). Pour une puissance de 80 % et un niveau de signification de 5 % par rapport à l'hypothèse alternative unilatérale, 57 participants sont requis. En s'attendant à un abandon de 10 % des participants, un échantillon de 63 personnes est requis.

Analyse - Le test de Kolmogorov-Smirnov sera utilisé pour évaluer la distribution normale des données continues. Les caractéristiques de base seront exprimées sous forme de nombres et de pourcentages, de moyennes et d'écarts types, ou de médianes et d'intervalles interquartiles, selon le cas. Les prédicteurs indépendants de POCD ont été analysés par régression logistique binaire et les résultats ont été exprimés sous forme de rapports de cotes (OR). Les performances de prédiction de LINC01844 pour POCD seront mesurées à l'aide de ROC, et les résultats ont été déterminés par les intervalles de confiance à 95 % et l'AUC. Aucune perte de suivi ou des pertes minimes pour les résultats primaires et secondaires ne sont attendues. La population en intention de traiter (ITT, tous les cas assignés au hasard) est utilisée pour toutes les analyses de résultats. L'analyse de soutien est basée sur un ensemble d'analyses complet (SAF, tous les patients assignés au hasard qui reçoivent une décompression et une fusion lombaires). Une analyse de cas complète sera effectuée pour tous les résultats. Cependant, si plus de 1 % de données manquantes sont trouvées pour le résultat principal, une analyse de sensibilité utilisant des imputations multiples et des méthodes d'équations d'estimation sera effectuée.

Nettoyage et verrouillage de la base de données Les ensembles de données utilisés et/ou analysés au cours de la présente étude seront mis à disposition auprès de l'auteur correspondant sur demande raisonnable. La base de données sera verrouillée immédiatement après que toutes les données auront été saisies et que toutes les données incohérentes ou manquantes auront été résolues, ou, alternativement, si tous les efforts ont été déployés et que nous considérons que les problèmes restants ne peuvent pas être résolus. Dans cette étape, les données seront examinées avant le verrouillage de la base de données. La base de données de l'étude sera ensuite verrouillée et exportée pour une analyse statistique. À ce stade, l'autorisation d'accès à la base de données sera supprimée pour tous les enquêteurs et la base de données sera archivée.