LINC01844 als diagnostischer Biomarker für POCD bei älteren Patienten

Studiendesign Diese monozentrische Beobachtungsstudie wird während der elektiven Dekompression und Fusion der Lendenwirbelsäule am Zhongshan Hospital der Fudan-Universität, Shanghai, China, durchgeführt. Von allen Teilnehmern wird eine schriftliche Einverständniserklärung eingeholt. Bis zum 21. Februar 2024 wurde die Studie für das Zhongshan Hospital der Fudan-Universität (China) mit der Genehmigungsnummer B2024-063R genehmigt.

Anästhesie Nachdem die Patienten den Operationssaal betreten haben, werden die Vitalfunktionen überwacht und den Patienten wird Sauerstoff inhaliert (> 8 l/min). Die Vollnarkose wird mit Sufentanil (0,2 ug/kg), Propofol (zielkontrollierte Infusion (TCI) bei einer Plasmakonzentration von 3 ng/ml), Remifentanil (TCI bei einer Plasmakonzentration von 3 ng/ml) und Rocuronium (0,6 mg/kg) eingeleitet. . Die narkotischen und vasoaktiven Medikamente werden während der Operation entsprechend der Narkosetiefe, dem Blutdruck und den Atemparametern eingesetzt. Nach der Operation wird eine patientengesteuerte intravenöse Analgesiepumpe (PCIA) (Sufentanil 250 ug und Ramosetron 0,6 mg) angeschlossen.

Nachweis und Vorbereitung von LINC01844. Gesamt-RNA wird aus peripheren Blutproben mit TRIzol LS (Invitrogen, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers extrahiert. Kurz gesagt, nach der Homogenisierung der Blutprobe (250 μL) mit TRIzol LS Regent (750 μL) wird Chloroform (200 μL) zur weiteren Analyse hinzugefügt. Die Probe wird 15 Minuten lang bei 12.000 × g und 4 °C zentrifugiert. Anschließend wird die wässrige Phase mit der RNA in ein neues Röhrchen überführt und Isopropanol (0,5 ml) zur RNA-Fällung hinzugefügt. Das RNA-Pellet wird mit 75 % Ethanol (1 ml) gewaschen und schließlich in RNase-freiem Wasser (10–20 μl) resuspendiert. Die RNA-Qualität wird mit NanoDrop2000 bestimmt. Ein optisches Dichteverhältnis von 260/280 > 1,80 ist ein Hinweis darauf, dass die Probe in nachfolgenden Experimenten verwendet werden könnte. Als nächstes verwenden wir M-MLV-Reverse-Transkriptase (Promega, USA) für die Synthese von cDNA. Für die Endanalyse wurde eine quantitative Echtzeit-Polymerasekettenreaktion (qRT-PCR) gemäß den Anweisungen des SYBR Green PCR Master Mix Kit (Qiagen) verwendet. Die PCR-Parameter: 95 °C für 10 Minuten; 45 Zyklen bei 95 °C für 15 Sekunden, 60 °C für 30 Sekunden und 72 °C für 30 Sekunden. GAPDH wird als Referenzgen ausgewählt, die Faltungsänderung (2-44Ct) wird zur Analyse der relativen LINC01844-Spiegel verwendet.

Neuropsychologische Testauswertung und POCD-Beurteilung Einen Tag vor der Operation werden die Patienten mithilfe des Patientengesundheitsfragebogens 9 (PHQ-9) auf Depressionen untersucht, während Patienten mit früheren schweren kognitiven Beeinträchtigungen mithilfe der Mini-Mental-State-Untersuchung (MMSE) (MMSE) ausgeschlossen werden Punktzahl < 24). Eine Reihe neuropsychologischer Tests wird 1 Tag vor der Operation und 1., 3. und 5. Tag nach der Operation durchgeführt, um die kognitive Funktion der Patienten zu bewerten, einschließlich des überarbeiteten Hopkins-Hörlerntests (HALT-R) und des überarbeiteten kurzen visuell-räumlichen Gedächtnistests (BVMT). -R), Trail Making Test (TMT), Digit Span Test (DST), Digital Symbol Substitution Test (DSST) und Verb and Graph Recall Test. Alle diese Tests werden in einer ruhigen Umgebung von einem ausgebildeten Arzt durchgeführt, der keinen Einblick in den chirurgischen Eingriff und die Blutentnahme hat. Gleichzeitig werden 20 gesunde Freiwillige ohne Operation als Kontrollgruppe rekrutiert, wobei Alter, Geschlecht und Bildungsjahre übereinstimmen. Der neuropsychologische Test wird in einer Kontrollgruppe durchgeführt, um den normalen Referenzwert der kognitiven Funktion im gleichen Intervall zu bestimmen. Die Ausgangswerte und Lernergebnisse wurden gemäß den internationalen Richtlinien für die Untersuchung postoperativer kognitiver Beeinträchtigungen von jedem neuropsychologischen Testergebnis abgezogen und durch die Standardabweichung der Ausgangswerte in der Kontrollgruppe dividiert. Das Ergebnis wurde als Z-Score bezeichnet. Wenn mindestens zwei Z-Skalen größer als 1,961 sind, wurde POCD in Betracht gezogen.

Studienbesuche und Datenerfassung Die Patienten werden präoperativ und am postoperativen Tag (POD) 1, 3 und 5 besucht. Die Patienten werden gemäß den Einschlusskriterien gescreent. Alle Patienten, die die Einschlusskriterien erfüllen, werden in einer Screening-Protokolldatei registriert. Die Prüfärzte erläutern den Verlauf und Zweck der Studie und stellen schriftliche Informationen zur Studie zur Verfügung. Patienten, die an der Studie teilnehmen möchten, müssen eine schriftliche Einverständniserklärung abgeben.

Die Daten werden sowohl im Papier-Fallberichtsformular (CRF) als auch im elektronischen Fallberichtsformular (eCRF) im elektronischen Datenerfassungssystem (EDC) durch Studien- oder klinisches Personal unter der Aufsicht der Prüfer des Prüfzentrums registriert. Im Falle einer Inkonsistenz wird der Papier-CRF als Goldstandard verwendet.

Umgang mit Daten Zwei Mitglieder des Forschungsteams führen die Studienüberwachung durch. Eine Fernüberwachung wird durchgeführt, um frühzeitig abweichende Muster, Probleme mit der Konsistenz, Glaubwürdigkeit und andere Anomalien zu erkennen. Patientendaten werden in pseudonymer Form unter Verwendung einer Patienten-(Identifikations-)Nummer erfasst, die aus vier drei Ziffern besteht. Studiendaten werden mithilfe eines vom Forscher initiierten EDC-Tools (IIT-EDC) gesammelt und verwaltet. IIT-EDC ist eine passwortgeschützte, intranetbasierte Anwendung zur Unterstützung der Datenaufzeichnung für Forschungsstudien (Website: http://10.15.7.137). Ausgewählten Forschern wird uneingeschränkter Zugriff auf den endgültigen Versuchsdatensatz gewährt. Alle Originalunterlagen, einschließlich Einverständniserklärungen, Berichte über vermutete unerwartete schwerwiegende unerwünschte Ereignisse (SAE) und relevante Korrespondenzen, werden an den Prüfstandorten 10 Jahre lang archiviert. Die saubere Testdatenbankdatei wird anonymisiert und 10 Jahre lang aufbewahrt.

Sicherheit Alle unerwünschten Ereignisse (UE), von denen angenommen wird, dass sie mit der Studie in Zusammenhang stehen, werden dem Studienkoordinierungszentrum gemeldet. Gemäß den örtlichen Gesetzen und Vorschriften können die Teilnehmer eine kostenlose Behandlung durch unsere Einheit erhalten oder eine Entschädigung erhalten, wenn es zu Verletzungen im Zusammenhang mit dieser Studie kommt. Alle vermuteten unerwarteten SAEs werden dem Datenüberwachungs- und Sicherheitsausschuss (DMSC) gemeldet. Das DMSC ist von den Prüfärzten unabhängig und führt eine fortlaufende Überprüfung der Sicherheitsparameter und der gesamten Studiendurchführung durch. Das DMSC besteht aus zwei unabhängigen Experten für groß angelegte klinische Studien und einem unabhängigen Statistiker. Das DMSC ist für die Wahrung der Interessen der Studienteilnehmer, die Bewertung der Sicherheit und Wirksamkeit der Interventionen während der Studie und die Überwachung der Gesamtdurchführung der klinischen Studie verantwortlich. Um die Integrität der Studie zu verbessern, kann das DMSC auch Empfehlungen in Bezug auf die Rekrutierung/Bindung von Teilnehmern, deren Management, die Verbesserung der Einhaltung protokollspezifischer Schemata und die Bindung von Teilnehmern sowie Verfahren für die Datenverwaltung und Qualitätskontrolle formulieren.

Statistische Analyse Probengröße – Um den Vorhersagewert des relativen LINC01844-Spiegels im Blut für POCD bei älteren Menschen nach einer Operation zu überprüfen, muss die Fläche unter der Kurve (AUC), gemessen über die Receiver Operating Characteristic Curve (ROC), mehr als 0,5 betragen. Basierend auf den Ergebnissen der vorläufigen Studie betrug die AUC 0,73 und die POCD-Inzidenz 33,3 %. Die Probengröße wurde mit PASS (Version 11.0) berechnet. Für eine Trennschärfe von 80 % und ein Signifikanzniveau von 5 % gegenüber der einseitigen Alternativhypothese sind 57 Teilnehmer erforderlich. Bei einem erwarteten Ausstieg von 10 % der Teilnehmer ist eine Stichprobengröße von 63 erforderlich.

Analyse – Der Kolmogorov-Smirnov-Test wird verwendet, um die Normalverteilung kontinuierlicher Daten zu bewerten. Die Basismerkmale werden je nach Bedarf als Anzahl und Prozentsätze, Mittelwerte und Standardabweichungen oder Mediane und Interquartilbereiche ausgedrückt. Die unabhängigen Prädiktoren für POCD wurden mittels binärer logistischer Regression analysiert und die Ergebnisse als Odds Ratios (ORs) ausgedrückt. Die Vorhersageleistung von LINC01844 für POCD wird mithilfe des ROC gemessen, und die Ergebnisse wurden anhand der 95 %-Konfidenzintervalle und der AUC bestimmt. Es werden keine oder nur minimale Verluste bei der Nachbeobachtung der primären und sekundären Endpunkte erwartet. Für alle Ergebnisanalysen wird die Intention-to-Treat-Population (ITT, alle zufällig zugewiesenen Fälle) verwendet. Die unterstützende Analyse basiert auf einem vollständigen Analysesatz (FAS, alle zufällig zugewiesenen Patienten, die eine lumbale Dekompression und Fusion erhalten). Für alle Ergebnisse wird eine vollständige Fallanalyse durchgeführt. Wenn jedoch mehr als 1 % der fehlenden Daten für den primären Endpunkt gefunden werden, wird eine Sensitivitätsanalyse unter Verwendung mehrerer Imputationen und Schätzgleichungsmethoden durchgeführt.

Bereinigen und Sperren der Datenbank Die während der aktuellen Studie verwendeten und/oder analysierten Datensätze werden auf begründete Anfrage vom entsprechenden Autor zur Verfügung gestellt. Die Datenbank wird sofort gesperrt, nachdem alle Daten eingegeben und alle abweichenden oder fehlenden Daten behoben wurden, oder alternativ, wenn alle Anstrengungen unternommen wurden und wir der Ansicht sind, dass die verbleibenden Probleme nicht behoben werden können. In diesem Schritt werden die Daten überprüft, bevor die Datenbank gesperrt wird. Die Studiendatenbank wird dann gesperrt und zur statistischen Analyse exportiert. Zu diesem Zeitpunkt wird allen Ermittlern die Erlaubnis zum Zugriff auf die Datenbank entzogen und die Datenbank wird archiviert.