LINC01844 som en diagnostisk biomarkør for POCD hos ældre patienter

Forsøgsdesign Dette enkeltcenter, observationsforsøg vil blive udført under elektiv lumbal dekompression og fusion på Zhongshan Hospital Fudan University, Shanghai, Kina. Der indhentes skriftligt informeret samtykke fra alle deltagere. Inden den 21. februar 2024 blev forsøget godkendt til Zhongshan Hospital, Fudan University (Kina) med godkendelsesnummeret B2024-063R.

Anæstesi Efter at patienterne er kommet ind på operationsstuen, overvåges vitale tegn, patienterne får iltindånding (> 8L/min). Generel anæstesi induceres med sufentanil (0,2 ug/kg), propofol [målstyret infusion (TCI) ved plasmakoncentration på 3 ug/ml), remifentanil (TCI ved plasmakoncentration på 3 ng/ml) og rocuronium (0,6 mg/kg) . De narkotiske og vasoaktive lægemidler bruges under operationen i henhold til anæstesidybde, blodtryk og respiratoriske parametre. En patientstyret intravenøs analgesi (PCIA) pumpe (sufentanil 250 ug og ramosetron 0,6 mg) tilsluttes efter operationen.

Påvisning og klargøring af LINC01844 Total RNA ekstraheres fra perifere blodprøver ved hjælp af TRIzol LS (Invitrogen, USA) i henhold til instruktionerne fra producenten. Kort fortalt, efter homogenisering af blodprøven (250 μL) med TRIzol LS-regent (750 μL), tilsættes chloroform (200 μL) til yderligere analyse. Prøven centrifugeres ved 12.000 × g, 4˚C i 15 minutter, hvorefter den vandige fase indeholdende RNA'et overføres til et nyt rør, og isopropanol (0,5 ml) tilsættes til RNA-udfældning. RNA-pellet vaskes med 75% ethanol (1 ml) og resuspenderes til sidst i RNase-frit vand (10-20 μL), RNA-kvaliteten bestemmes med NanoDrop2000. Et optisk tæthedsforhold på 260/280 >1,80 er en indikation af, at prøven kunne bruges i efterfølgende eksperimenter. Dernæst bruger vi M-MLV revers transkriptase (Promega, USA) til syntese af cDNA. En kvantitativ polymerasekædereaktion i realtid (qRT-PCR) blev brugt til den endelige analyse i henhold til instruktionerne fra SYBR Green PCR Master Mix Kit (Qiagen). PCR-parametrene: 95˚C i 10 min; 45 cyklusser ved 95˚C i 15 sek., 60˚C i 30 sek. og 72˚C 30 sek. GAPDH er valgt som et referencegen, fold-ændring (2 -44Ct ) bruges til at analysere LINC01844 relative niveauer.

Neuropsykologisk testevaluering og POCD-vurdering Én dag før operationen vil patienter blive vurderet for depression ved hjælp af patientsundhedsspørgeskema-9 (PHQ-9), mens patienter med tidligere svær kognitiv svækkelse udelukkes ved hjælp af mini mental tilstandsundersøgelse (MMSE) (MMSE) score <24). Et batteri af neuropsykologiske tests vil blive udført 1 dag før operationen og 1., 3. og 5. dag efter operationen for at evaluere patienters kognitive funktion, inklusive Hopkins auditive læringstest-revideret (HALT-R), kort visuospatial hukommelsestest-revideret (BVMT) -R), trail making test (TMT), digit span test (DST), digital symbol substitution test (DSST) og verbum og graph recall test. Alle disse tests udføres i rolige omgivelser af en uddannet læge, som er blindet for den kirurgiske procedure og blodprøven. Samtidig vil 20 raske frivillige uden operation blive rekrutteret som kontrolgruppe, med alder, køn og uddannelsesår matchet. Den neuropsykologiske test vil blive udført i kontrolgruppen for at bestemme den normale referenceværdi for kognitiv funktion med samme interval. Baseline-score og læringsresultater blev trukket fra hver neuropsykologisk testscore i henhold til de internationale retningslinjer for undersøgelse af postoperativ kognitiv svækkelse og divideret med standardafvigelsen af ​​baseline-scores i kontrolgruppen. Resultatet blev betegnet som en Z-score. Når mindst to Z-skalaer er større end 1,961, blev POCD overvejet.

Studiebesøg og dataindsamling Patienter vil blive visiteret præoperativt og postoperativt dag (POD) 1 og 3 og 5. Patienterne vil blive screenet efter inklusionskriterierne. Alle patienter, der opfylder inklusionskriterierne, vil blive registreret i en screeningslogfil. Investigatorerne vil forklare forløbet og formålet med undersøgelsen og give skriftlig information om undersøgelsen. Patienter, der er villige til at deltage i undersøgelsen, skal give skriftligt informeret samtykke.

Data vil blive registreret i både papircaserapportformularen (CRF) og den elektroniske caserapportformular (eCRF) på elektronisk datafangst (EDC)-system af forsøgs- eller klinisk personale under opsyn af forsøgsstedets efterforskere. I tilfælde af inkonsistens vil papir-CRF blive brugt som guldstandard.

Håndtering af data To medlemmer af forskergruppen vil udføre undersøgelsesmonitorering. Fjernovervågning vil blive udført for at signalere tidlige afvigende mønstre, problemer med konsistens, troværdighed og andre uregelmæssigheder. Patientdata vil blive indsamlet i pseudonym form ved hjælp af et patientnummer (identifikations-) bestående af fire tre cifre. Undersøgelsesdata vil blive indsamlet og administreret ved hjælp af et investigator-initieret EDC-værktøj (IIT-EDC). IIT-EDC er en adgangskodebeskyttet, intranetbaseret applikation designet til at understøtte dataregistrering til forskningsundersøgelser (websted: http://10.15.7.137). Fuld adgang til det endelige forsøgsdatasæt vil blive givet til udvalgte efterforskere. Alle originale optegnelser, inklusive samtykkeerklæringer, rapporter om formodede uventede alvorlige bivirkninger (SAE) og relevante korrespondancer, vil blive arkiveret på forsøgsstederne i 10 år. Den rene prøvedatabasefil vil blive anonymiseret og vedligeholdt i 10 år.

Sikkerhed Alle uønskede hændelser (AE), der menes at være relateret til forsøget, vil blive rapporteret til forsøgskoordineringscentret. I henhold til lokale love og regler kan deltagerne modtage gratis behandling leveret af vores enhed eller blive kompenseret, hvis der opstår en skade relateret til denne undersøgelse, og alle formodede uventede SAE'er vil blive rapporteret til dataovervågnings- og sikkerhedsudvalget (DMSC). DMSC er uafhængig af forsøgets efterforskere og vil udføre en løbende gennemgang af sikkerhedsparametre og overordnet undersøgelsesudførelse. DMSC består af to uafhængige eksperter i store kliniske forsøg og en uafhængig statistiker. DMSC vil være ansvarlig for at beskytte forsøgsdeltagernes interesser, vurdere sikkerheden og effektiviteten af ​​interventionerne under forsøget og overvåge den overordnede gennemførelse af det kliniske forsøg. For at forbedre integriteten af ​​forsøget kan DMSC også formulere anbefalinger vedrørende rekruttering/fastholdelse af deltagere, deres ledelse, forbedring af overholdelse af protokolspecificerede regimer og fastholdelse af deltagere og procedurer for datastyring og kvalitetskontrol.

Statistisk analyse Prøvestørrelse -For at verificere forudsigelsesværdien af ​​det relative niveau af LINC01844 i blod for POCD hos ældre mennesker efter operation skal arealet under kurven (AUC) målt via modtagerens operationskarakteristiske kurve (ROC) være mere end 0,5. Baseret på resultater fra det foreløbige forsøg var AUC 0,73, og forekomsten af ​​POCD var 33,3 %. Prøvestørrelsen blev beregnet ved PASS (version 11.0). For magt på 80 % og signifikansniveau på 5 % mod den ensidige alternative hypotese kræves 57 deltagere. Forventer 10% frafald af deltagere, en stikprøvestørrelse på 63 er påkrævet.

Analyse - Kolmogorov-Smirnov test vil blive brugt til at vurdere normalfordelingen af ​​kontinuerlige data. Baselinekarakteristikaene vil blive udtrykt som tællinger og procenter, gennemsnit og standardafvigelser eller medianer og interkvartilintervaller, alt efter hvad der er relevant. De uafhængige prædiktorer for POCD blev analyseret ved binær logistisk regression, og resultaterne blev udtrykt som odds ratioer (OR'er). Forudsigelsesydelsen af ​​LINC01844 for POCD vil blive målt ved hjælp af ROC, og resultaterne blev bestemt af 95 % konfidensintervaller og AUC. Der forventes ingen eller minimale tab til opfølgning for de primære og sekundære resultater. Intention-to-treat-populationen (ITT, alle tilfældigt tildelte tilfælde) bruges til alle udfaldsanalyser. Den understøttende analyse er baseret på et komplet analysesæt (FAS, alle tilfældigt tildelte patienter, som modtager lumbal dekompression og fusion). Der vil blive udført komplet case-analyse for alle resultater. Men hvis mere end 1 % af manglende data findes for det primære resultat, vil der blive udført en følsomhedsanalyse ved brug af multiple imputationer og estimering af ligningsmetoder.

Rengøring og låsning af databasen De datasæt, der anvendes og/eller analyseres under den aktuelle undersøgelse, vil blive stillet til rådighed fra den tilsvarende forfatter efter rimelig anmodning. Databasen vil blive låst umiddelbart efter, at alle data er indtastet, og alle uoverensstemmelser eller manglende data er løst, eller alternativt, hvis alle anstrengelser er blevet brugt, og vi vurderer, at de resterende problemer ikke kan løses. I dette trin vil dataene blive gennemgået før databaselåsning. Studiedatabasen vil derefter blive låst og eksporteret til statistisk analyse. På dette stadium vil tilladelsen til adgang til databasen blive fjernet for alle efterforskere, og databasen vil blive arkiveret.