LINC01844 als diagnostische biomarker voor POCD bij oudere patiënten

Proefontwerp Dit observationele onderzoek in één centrum zal worden uitgevoerd tijdens electieve lumbale decompressie en fusie in het Zhongshan Hospital Fudan University, Shanghai, China. Van alle deelnemers wordt schriftelijke geïnformeerde toestemming verkregen. Op 21 februari 2024 werd de proef goedgekeurd voor het Zhongshan Hospital, Fudan University (China) met goedkeuringsnummer B2024-063R.

Anesthesie Nadat de patiënten de operatiekamer zijn binnengekomen, worden de vitale functies gecontroleerd en krijgen de patiënten zuurstofinhalatie (> 8L/min). Algemene anesthesie wordt geïnduceerd met sufentanil (0,2 µg/kg), propofol [target gecontroleerde infusie (TCI) bij een plasmaconcentratie van 3 µg/ml), remifentanil (TCI bij een plasmaconcentratie van 3 ng/ml) en rocuronium (0,6 mg/kg). . De narcotische en vasoactieve medicijnen worden tijdens de operatie gebruikt afhankelijk van de anesthesiediepte, de bloeddruk en ademhalingsparameters. Na de operatie wordt een door de patiënt gecontroleerde intraveneuze analgesiepomp (PCIA) (sufentanil 250 µg en ramosetron 0,6 mg) aangesloten.

Detectie en bereiding van LINC01844 Totaal RNA wordt geëxtraheerd uit perifere bloedmonsters met behulp van TRIzol LS (Invitrogen, VS) volgens de instructies van de fabrikant. In het kort wordt, na het homogeniseren van het bloedmonster (250 μl) met TRIzol LS-regent (750 μl), chloroform (200 μl) toegevoegd voor verdere analyse. Het monster wordt gedurende 15 minuten bij 12.000 x g, 4 °C gecentrifugeerd, vervolgens wordt de waterfase die het RNA bevat, overgebracht naar een nieuwe buis en wordt isopropanol (0,5 ml) toegevoegd voor RNA-precipitatie. De RNA-pellet wordt gewassen met 75% ethanol (1 ml) en uiteindelijk opnieuw gesuspendeerd in RNase-vrij water (10-20 μl). De RNA-kwaliteit wordt bepaald met NanoDrop2000. Een optische dichtheidsverhouding van 260/280 >1,80 is een indicatie dat het monster in volgende experimenten zou kunnen worden gebruikt. Vervolgens gebruiken we M-MLV reverse transcriptase (Promega, VS) voor de synthese van cDNA. Voor de uiteindelijke analyse werd een realtime kwantitatieve polymerasekettingreactie (qRT-PCR) gebruikt volgens de instructies van de SYBR Green PCR Master Mix Kit (Qiagen). De PCR-parameters: 95˚C gedurende 10 minuten; 45 cycli bij 95˚C gedurende 15 seconden, 60˚C gedurende 30 seconden en 72˚C gedurende 30 seconden. GAPDH wordt gekozen als referentiegen, vouwverandering (2-44Ct) wordt gebruikt om de relatieve niveaus van LINC01844 te analyseren.

Neuropsychologische testevaluatie en POCD-beoordeling Eén dag vóór de operatie worden patiënten beoordeeld op depressie met behulp van de Patient Health Questionnaire-9 (PHQ-9), terwijl patiënten met eerdere ernstige cognitieve stoornissen worden uitgesloten met behulp van het mini mental state exam (MMSE) (MMSE). score < 24). Een reeks neuropsychologische tests zal 1 dag vóór de operatie en de 1e, 3e en 5e dag na de operatie worden uitgevoerd om de cognitieve functie van patiënten te evalueren, waaronder Hopkins auditieve leertest-herzien (HALT-R), korte visueel-ruimtelijke geheugentest-herzien (BVMT). -R), trail making test (TMT), cijferreekstest (DST), digitale symboolvervangingstest (DSST) en werkwoord- en grafiekherinneringstest. Al deze tests worden uitgevoerd in een rustige omgeving door een getrainde arts die blind is voor de chirurgische ingreep en het bloedmonster. Tegelijkertijd zullen 20 gezonde vrijwilligers zonder operatie worden gerekruteerd als controlegroep, waarbij de leeftijd, het geslacht en de opleidingsjaren op elkaar zijn afgestemd. De neuropsychologische test zal worden uitgevoerd in een controlegroep om de normale referentiewaarde van de cognitieve functie te bepalen, met hetzelfde interval. Basisscores en leerresultaten werden afgetrokken van elke neuropsychologische testscore volgens de internationale richtlijnen voor het onderzoek naar postoperatieve cognitieve stoornissen, en gedeeld door de standaardafwijking van basisscores in de controlegroep. Het resultaat werd een Z-score genoemd. Wanneer ten minste twee Z-schalen groter zijn dan 1,961, werd POCD overwogen.

Studiebezoeken en gegevensverzameling Patiënten worden preoperatief en postoperatief op dag (POD) 1, 3 en 5 bezocht. De patiënten worden gescreend volgens de inclusiecriteria. Alle patiënten die aan de inclusiecriteria voldoen, worden geregistreerd in een screeninglogbestand. De onderzoekers zullen het verloop en het doel van het onderzoek toelichten en schriftelijke informatie over het onderzoek verstrekken. Patiënten die aan het onderzoek willen deelnemen, moeten schriftelijke geïnformeerde toestemming geven.

Gegevens zullen worden geregistreerd in zowel het papieren case report form (CRF) als het elektronische case report formulier (eCRF) op het elektronische data capture (EDC) systeem door onderzoeks- of klinisch personeel onder toezicht van de onderzoekers op de onderzoekslocatie. In geval van inconsistentie zal het papieren CRF als gouden standaard worden gebruikt.

Omgang met gegevens Twee leden van het onderzoeksteam zullen de studiemonitoring uitvoeren. Er zal monitoring op afstand worden uitgevoerd om vroegtijdig afwijkende patronen, problemen met de consistentie, geloofwaardigheid en andere afwijkingen te signaleren. Patiëntgegevens worden in gepseudonimiseerde vorm verzameld met behulp van een patiënt(identificatie)nummer bestaande uit vier drie cijfers. Studiegegevens zullen worden verzameld en beheerd met behulp van door de onderzoeker geïnitieerde EDC-onderzoeksinstrumenten (IIT-EDC). IIT-EDC is een met een wachtwoord beveiligde, op intranet gebaseerde applicatie die is ontworpen ter ondersteuning van gegevensregistratie voor onderzoeksstudies (website: http://10.15.7.137). Geselecteerde onderzoekers krijgen volledige toegang tot de definitieve onderzoeksdataset. Alle originele documenten, inclusief toestemmingsformulieren, rapporten van vermoedelijke onverwachte ernstige bijwerkingen (SAE) en relevante correspondentie, zullen gedurende 10 jaar op de proeflocaties worden gearchiveerd. Het schone proefdatabasebestand wordt geanonimiseerd en gedurende 10 jaar bewaard.

Veiligheid Alle bijwerkingen waarvan wordt aangenomen dat ze verband houden met de studie, zullen worden gerapporteerd aan het onderzoekscoördinatiecentrum. Volgens de lokale wet- en regelgeving kunnen de deelnemers een gratis behandeling krijgen van onze afdeling of gecompenseerd worden als zich letsel voordoet dat verband houdt met dit onderzoek. Alle vermoedelijke onverwachte SAE's zullen worden gerapporteerd aan de Data Monitoring and Safety Committee (DMSC). De DMSC is onafhankelijk van de onderzoekers van het onderzoek en zal voortdurend de veiligheidsparameters en het algehele onderzoekgedrag beoordelen. Het DMSC bestaat uit twee onafhankelijke deskundigen op het gebied van grootschalige klinische onderzoeken en een onafhankelijke statisticus. Het DMSC zal verantwoordelijk zijn voor het waarborgen van de belangen van de proefdeelnemers, het beoordelen van de veiligheid en werkzaamheid van de interventies tijdens de proef, en het monitoren van het algehele verloop van de klinische proef. Om de integriteit van het onderzoek te vergroten, kan de DMSC ook aanbevelingen formuleren met betrekking tot de werving/retentie van deelnemers, hun management, het verbeteren van de naleving van protocolspecifieke regimes en het behouden van deelnemers, en procedures voor gegevensbeheer en kwaliteitscontrole.

Statistische analyse Steekproefgrootte -Om de voorspellingswaarde van het relatieve niveau van LINC01844 in het bloed voor POCD van oudere mensen na een operatie te verifiëren, moet de oppervlakte onder de curve (AUC), gemeten via de receiver operating karakteristieke curve (ROC), groter zijn dan 0,5. Gebaseerd op de resultaten van een voorlopig onderzoek was de AUC 0,73 en de incidentie van POCD 33,3%. De steekproefomvang werd berekend door PASS (versie 11.0). Voor een power van 80% en een significantieniveau van 5% tegen de eenzijdige alternatieve hypothese zijn 57 deelnemers nodig. Als we uitgaan van een uitval van 10% van de deelnemers, is een steekproefomvang van 63 vereist.

Analyse - De Kolmogorov-Smirnov-test zal worden gebruikt om de normale verdeling van continue gegevens te beoordelen. De basislijnkenmerken zullen worden uitgedrukt als tellingen en percentages, gemiddelden en standaarddeviaties, of medianen en interkwartielbereiken, al naar gelang van toepassing. De onafhankelijke voorspellers van POCD werden geanalyseerd door binaire logistische regressie, en de resultaten werden uitgedrukt als odds ratio's (OR's). De voorspellingsprestaties van LINC01844 voor POCD zullen worden gemeten met behulp van ROC, en de resultaten werden bepaald door de 95% betrouwbaarheidsintervallen en AUC. Er worden geen of minimale verliezen verwacht voor de follow-up van de primaire en secundaire uitkomsten. Voor alle uitkomstenanalyses wordt de ‘intention-to-treat’-populatie (ITT, alle willekeurig toegewezen gevallen) gebruikt. De ondersteunende analyse is gebaseerd op de volledige analyseset (FAS, alle willekeurig toegewezen patiënten die lumbale decompressie en fusie ondergaan). Voor alle uitkomsten wordt een complete casusanalyse uitgevoerd. Als echter meer dan 1% van de ontbrekende gegevens voor de primaire uitkomst wordt gevonden, wordt een gevoeligheidsanalyse uitgevoerd met behulp van meerdere imputaties en schattingsvergelijkingsmethoden.

Opschonen en vergrendelen van de database De tijdens het huidige onderzoek gebruikte en/of geanalyseerde datasets worden op redelijk verzoek ter beschikking gesteld van de corresponderende auteur. De database wordt onmiddellijk vergrendeld nadat alle gegevens zijn ingevoerd en alle afwijkende of ontbrekende gegevens zijn opgelost, of, als alternatief, als alle inspanningen zijn geleverd en wij van mening zijn dat de resterende problemen niet kunnen worden opgelost. In deze stap worden de gegevens gecontroleerd voordat de database wordt vergrendeld. De onderzoeksdatabase wordt vervolgens vergrendeld en geëxporteerd voor statistische analyse. In dit stadium wordt de toestemming voor toegang tot de database voor alle onderzoekers ingetrokken en wordt de database gearchiveerd.